Summary
Her præsenterer vi en forbedret suspensionsfikseringsmetode ved hjælp af en rottejakke til effektivt at immobilisere rotter under akupunkturforsøg. Desuden belyses strukturen og anvendelsen af dette fikseringsapparat samt instruktioner og evaluering for dets anvendelse i elektroakupunkturterapi.
Abstract
I grundlæggende eksperimentel akupunkturforskning anvendes rotter almindeligvis som forsøgsdyr. Det er dog svært for dem at opretholde en fast kropsholdning. Under elektroakupunkturprocedurer er korrekt immobilisering af rotter afgørende. Forskellige metoder til rottefiksering anvendes i øjeblikket, herunder anæstesifiksering, fiksering på høj platform, bindende fiksering og fiksering med en selvfremstillet rottefrakke. Disse metoder har imidlertid deres begrænsninger, hvilket til en vis grad kan påvirke eksperimentets effektivitet og funktionsdygtighed. Denne protokol introducerer en metode til at suspendere og fiksere rotter ved hjælp af rottetøj. For det første er rotter klædt med rottejakker, der matcher deres kropsform, og udnytter deres præference for mørke og gravning. Nåleoperationen kan derefter udføres, efter at rotterne har brugt rottetøj. Når de er suspenderet, er rotterne relativt stille, da deres lemmer ikke kan bevæge sig. Denne fikseringsmetode giver ikke kun økonomiske og brugervenlige fordele, men sikrer også en stabil og pålidelig fiksering af rotterne i en behagelig afslappet position. Det minimerer også effektivt tidsforbrug, eksperimentel plads og arbejdskraftressourcer. Derudover giver denne metode mulighed for eksponering af de fleste akupunkter, der anvendes til akupunktur hos rotter. Denne artikel koncentrerer sig primært om enhedens sammensætning, der omfatter en specielt designet rottejakke, et forhøjet fikseringsstativ og deres forbindelsesstrukturer. Derudover vil et illustrativt eksempel blive præsenteret for at demonstrere anvendelsen af den rottetøjsbaserede suspensionsfikseringsmetode i rotteelektroakupunkturprocedurer.
Introduction
Akupunktur er en traditionel terapi karakteriseret ved nål på specifikke akupunkter eller andre positioner for at forebygge og behandle sygdomme. Elektroakupunktur kombinerer filiforme nåle med elektrisk stimulering1, hvilket giver mulighed for præcis kontrol over mængden af stimulering ved at justere relevante parametre, hvilket fremmer standardiseringen af akupunkturbehandling2. I de senere år har forskning i elektroakupunkturmekanismerne fortsat udvidet og uddybet3,4, hvilket har ført til en årlig stigning i undersøgelser med fokus på mekanismerne i elektroakupunktur5.
I grundforskning i elektroakupunktur er rotter de mest almindeligt anvendte dyr. Under elektroakupunkturbehandling skal modtageren forblive stille for at sikre en jævn procedure. I modsætning til kliniske forsøg med mennesker kan små dyr, der anvendes i dyreforsøg, ikke følge kommandoer bevidst under 15-30 minutters langvarige elektroakupunkturprocedurer. Dette stiller forskere over for en primær udfordring med at opnå stabil og pålidelig fiksering. Forkert fiksering kan føre til negative følelser som angst, depression og frygt hos dyr6, hvilket ikke kun øger risikoen for skade for rotter og chancen for at blive bidt for forsøgspersonalet, men også påvirker stabiliteten og overbevisende forskningsresultater.
I tidligere undersøgelser har forskere ofte brugt anæstesifiksering7, høj platformfiksering8, bindingsfiksering 6,9 eller rottebelægningsfiksering10 før akupunktur eller elektroakupunkturoperationer. I betragtning af virkningerne af anæstesi på kroppen11 og hjernefunktionen12 og i betragtning af at akupunktur udføres på bevidste patienter i kliniske tilfælde, kan anæstesi imidlertid påvirke forskningsresultaterne til en vis grad. Derfor sammenlignet med anæstesifiksering er behagelig fiksering af rotter i vågen tilstand en bedre mulighed.
I ikke-bedøvet tilstand har forskellige fikseringsmetoder imidlertid også deres respektive begrænsninger, herunder begrænset akupunkteksponering på grund af dækning af rottebelægningen på rotter10, nødvendigheden af mindst to individer til at udføre operationen 13, ikke-justerbar fiksator størrelse14 eller den stressede tilstand hos rotter i en tvungen position6. For at løse disse tekniske problemer designede vi en rottejakke og et fikseringsstativ, der er egnet til akupunkturmanipulation i de fleste dele af rottekroppen. Dette kan hjælpe forskere med effektivt at udføre akupunkturprocedurer med rotter.
Begrundelsen for denne protokol er som følger: For det første udnytter den lukkede hovedbeklædning på rottens jakke rotternes naturlige tilbøjelighed til mørke og gravning og begrænser dermed deres aktivitetsområde. For det andet giver bindingstovene nær leddene i rotternes lemmer fysisk kompressionsbegrænsning og pålægger visse begrænsninger for deres bevægelser. Rotter er dog stadig i stand til at hoppe og bevæge sig vandret, selv når de bærer jakken. Endelig, da rotter ikke kan røre jorden uden et fast kraftpunkt, når de er suspenderet, tilføjede vi en affjedringsfikseringsenhed til rottejakken, hvilket yderligere begrænsede deres bevægelser og sikrede nålefastholdelse. Sammensætningen af fikseringsanordningen er vist i figur 1.
Figur 1: Skematisk diagram over rottejakken og ophængsfiksering. (A) Rottejakkens generelle udseende i flad visning. (B) Tredimensionelt billede af rottejakken. (C) Specielt skræddersyet rottejakke med et snit nær akupunkterne på hoved og ryg talje. (D) Illustration af flere rotter samtidig ophængt på det forhøjede stativ. 1: Stof samlet visning; 2: Forbenets udløb; 3: Bagbenets udløb; 4: Bindetov; 5: Hulrum dannet efter suturering; 6: Snit til eksponering af hovedakupunkter; 7: Indsnit til eksponering af ryg- og taljeakupunkter. 8: Suturstilling. Klik her for at se en større version af denne figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle procedurer udført på rotterne i denne undersøgelse overholdt National Standard for Laboratory Animal Welfare and Ethics Review Guidelines (2018), officielt vedtaget af Folkerepublikken Kina, og vejledning til pleje og brug af forsøgsdyr fra National Academies Press15. Denne protokol består af tre hovedtrin. For det første er rottejakkerne skræddersyet og tilpasset ud fra de individuelle kropsformer hos rotter med forskellig vægt. Dernæst udføres akupunkturmanipulation efter standardprocedurer. Endelig suspenderes rotterne i deres jakker, mens nålene forbliver på plads for at imødekomme behovet for samtidige indgreb blandt rotter inden for samme gruppe.
1. Forberedelse før nål
- Produktion af rottejakken
- Vej rotterne og mål deres kropsform, før du laver deres jakker. For at verificere denne protokols egnethed til rotter af forskellig vægt udvælges rotter, der vejer 220 g, 300 g, 400 g og 520 g, til uafhængige målinger af deres kropsdimensioner, der omfatter målinger fra a til f, som vist i figur 2.
BEMÆRK: Sammenhængen mellem rottes kropslige proportioner og deres tilsvarende jakkestørrelser er også vist i figur 2. De relevante kropslængdeparametre for rotter af forskellig vægt er registreret i tabel 1. - Skær et rektangulært stykke tykt, mørkt stof for at lave en rottejakke. Brug stoffet med udfoldet bredde svarende til omkredsen målt omkring den tykkeste del af rottens mave. Stoffets længde er lig med afstanden fra rottens næsespids til bunden af halen (se figur 2).
- Fold stoffet på midten og skær det øverste venstre hjørne af i en vinkel på ca. 45°-65° for at danne en højre trapez (se figur 3A).
- Sy de to sider til venstre tæt med bomuldstråd. Se figur 1B og figur 3B for vejledning.
- Skær to små huller, et på hver side af stoffet, så rottens øvre og nedre lemmer kan passere igennem (se figur 3C). Afstanden mellem de to øvre lemmer bestemmer afstanden mellem rottejakkens øverste huller. Afstanden mellem de to underben bestemmer afstanden mellem rottejakkens nedre huller.
- Brug afstanden i længderetningen mellem rottens armhule og iliumets forside til at tjene som afstanden mellem rottejakkens øvre og nedre huller. Brug omkredsen af skulderleddet til at bestemme omkredsen af det øverste hul i rottejakken. Brug omkredsen af hofteleddet til omkredsen af det nederste hul i rottejakken.
- Ved siden af hvert hul skal du sy en lang kludrem, der kan krydses og vikles tæt rundt om kroppen fra jakkens åbningsende for at fastgøre rotten.
- Vej rotterne og mål deres kropsform, før du laver deres jakker. For at verificere denne protokols egnethed til rotter af forskellig vægt udvælges rotter, der vejer 220 g, 300 g, 400 g og 520 g, til uafhængige målinger af deres kropsdimensioner, der omfatter målinger fra a til f, som vist i figur 2.
- Metode til brug af rottejakker
- Brug handsker, før du fortsætter med at klæde rotten i jakken. Start med at holde den midterste og bageste del af rottejakken med den ene hånd på bordet. Hold rottens hale fra fodringsburet med den anden hånd og læg den forsigtigt ind i jakken.
- Når rotten bevæger sig fremad, når hovedet jakkens hovedbeklædning. På dette tidspunkt skal du bruge begge hænder til forsigtigt at trække venstre og højre overekstremitet ud af hullerne i jakken.
- Tag bindetovet fra jakkens åbningsende, kryds det over fra venstre mod højre, og vikl det sikkert rundt om rottens bagagerum. Bind det tæt på den modsatte side af bagagerummet for at sikre korrekt fiksering. Efter fastholdelsen af rottens øvre lemmer gentages den samme procedure for at fastgøre dens underekstremiteter.
- Tag forholdsregler for at undgå at blive bidt eller ridset af rottens kløer, når du trækker dens lemmer ud af jakkehullerne. Sørg for, at rebets tæthed er justeret korrekt, dvs. ikke for stram til at forårsage lokal ekstremitetsiskæmi og hypoxi hos rotter og ikke for løs, så rotten let kan undslippe (se video 1).
- Fastgørelsesstativ og S-formede jernkroge
- Fastgørelsesstativet består af to tunge jernbakker (24 cm i længden, 12 cm i bredden og 2 cm i højden) og en jernsøjle (60 cm i længden), der er fast svejset på hver bakke. Fastgør en massiv jernpind (145 cm lang) i samme højde på de to jernsøjler ved hjælp af en skrueforbindelsesstruktur, der kan justeres og vedligeholdes i en fast højde (se figur 4A).
- For at forbinde rotten, der bærer jakken, til jernpinden skal du bruge de S-formede kroge (11 cm i diameter). Sæt den ene ende af krogen rundt om remmen på jakken, mens den anden ende hænges på jernpinden. Brug to S-formede kroge til at fastgøre rotten på pinden. Se figur 1D og figur 4B for den overordnede struktur.
Figur 2: Tilsvarende diagram over rottens kropsform og matchede rottejakkestørrelse. I diagrammet repræsenterer parameteren a den tværgående afstand bag på leddet mellem de øvre lemmer og rottens bagagerum. Denne værdi bruges som afstandsmåling mellem de gennemtrængende huller for rottejakkens øvre lemmer. Tilsvarende repræsenterer parameter b den tværgående afstand på bagsiden, hvor rottens bilaterale underekstremiteter forbinder med bagagerummet. Denne måling bestemmer afstanden mellem de gennemtrængende huller til rottejakkens underekstremiteter. Parameteren c betyder omkredsen af den tykkeste del af rottens mave, som kan bruges som breddemål for stoffet i rottens jakke. Parameteren d repræsenterer afstanden fra rottens armhule til forsiden af dens ilium og bestemmer længdeafstanden mellem kappens øvre og nedre huller. Parameteren e svarer til længdeafstanden fra rottens næsespids til bunden af halen, der tjener som længdemåling for rottens jakkeklud. Parameteren f angiver omkredsen af artikulationen, der forbinder overbenet og rottens bagagerum, der tjener som omkredsen af hullet, gennem hvilket de øvre lemmer passerer. Parameteren g repræsenterer omkredsen af leddet, der forbinder underbenene og rottens bagagerum, og bestemmer omkredsen af hullet, gennem hvilket underbenene passerer. Klik her for at se en større version af denne figur.
| Kropsvægt (g) | Parametre for kropsform (cm) | ||||||
| en | b | c | d | e | f | g | |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
Tabel 1. Måleresultaterne af kropsformparametre for rotter med forskellige kropsvægte.
Figur 3: Diagram, der viser rottejakkens fysiske udseende og brug . (A) Plane udvendige billeder af rottejakken. Formen på rottens jakke ligner en retvinklet trapezform med separate åbninger på venstre og højre side, så rottens øvre og nedre lemmer kan passere igennem. (B) Udfoldet udvendigt billede af rottejakken. Lukningen af hovedbeklædningen skaber et halvlukket hulrum, der tjener som en afgørende komponent for at lokke rotter til at komme ind. (C) Set fra siden af en rotte klædt med jakken. Når rottens lemmer passerer gennem åbningerne i tøjet, krydses stropperne over bagagerummets ventrale overflade og fastgøres sikkert bagpå med passende spænding. Dette sikrer, at rotten er relativt immobiliseret. (D) Abdominal visning af en rotte klædt med rottejakken. Den ventrale overflade af jakken blotter rottens mavehud, hvilket giver nem adgang til akupunktur på ventrale punkter. Klik her for at se en større version af denne figur.
Video 1: Tag rottejakken på. Denne video viser en typisk proces med at klæde rotten i jakken. Klik her for at downloade denne video.
Figur 4: Diagram, der viser det fysiske udseende og brugen af det forhøjede fikseringsstativ. (A) Forhøjet fikseringsstativ. Dette stativ består primært af to lodrette jernsøjler (60 cm lange) svejset til hver bakke sammen med en lang vandret jernpind (145 cm i længden) placeret parallelt med jorden. Skruer bruges til at fastgøre den vandrette pind i samme højde som de lodrette søjler. B) Rotteophæng på fikseringsstativet. Rotter, der bærer rottejakkerne, fastgøres sikkert til fikseringsstativet ved hjælp af to S-formede kroge pr. Rotte. (C) Samtidig elektroakupunkturbehandling med flere rotter. For at forhindre enhver potentiel interferens som følge af halebevægelse var det nødvendigt at opretholde korrekt afstand mellem rotterne, svarende til længden af en rottes hale. Klik her for at se en større version af denne figur.
2. Elektroakupunktur procedure
- Rutinemæssig forberedelse
- Placer fikseringsstativet på et vandret skrivebord eller jord.
- Før nåleproceduren skal du fjerne pelsen omkring akupunkterne ved hjælp af en elektrisk barbermaskine for at sikre fuldstændig eksponering. Når akupunktet, der skal punkteres, er placeret på rottens underliv, såsom Guanyuan (CV4, ca. 25 mm under navlen), skal du forkorte bredden af rottetøj passende for at udsætte abdominale akupunkter.
- Find akupunktet fra mellemrummet på midterlinjen af maven, der ikke er dækket af rottejakken (se figur 3D), og injicer derefter nålen.
- Når akupunkterne, der skal punkteres, er på rottens hoved, såsom Baihui (GV20, placeret midt i parietalbenet), skal du lave et lille snit på den tilsvarende position på hovedet for fuldt ud at udsætte huden omkring GV20 (se figur 1C).
- Ved akupunktering af akupunkter på lemmerne af rotter, såsom Neiguan (PC6, på indersiden af forbenet, mellem radiale og ulnar suturer ca. 3 mm væk fra håndleddet) i overekstremiteten eller Zusanli (ST36, på den posterolaterale side af knæleddet, ca. 2 mm under fibulahovedet) i underbenet, På grund af den åbenlyse eksponering af akupunkterne skal du bruge den ene hånd til at hjælpe med at fastgøre lemmet, mens den anden direkte kan udføre akupunkturoperationen.
- Når akupunktet er placeret på ryggen eller taljen af en rotte, såsom Shenshu (BL23, under 2. lændehvirvler, 6 mm fra midterlinjen af ryggen), skal du skære en åbning ca. 2 cm bred i midten af rottens jakke for fuldt ud at udsætte huden på det tilsvarende sted (se figur 1C).
- Klæd rotten i jakken. Efter desinfektion af akupunkternes lokale hud med alkoholservietter skal du begynde akupunkturproceduren.
- Nåleteknik: Find akupunktet nøjagtigt. Indsæt en steril engangsakupunkturnål (0,16 mm x 7 mm) i rottens akupunkt i den passende dybde.
- Elektroakupunktur operation
- Sæt elektrodetråden rundt om den vandrette jernstang. Dette trin reducerer risikoen for, at nålen falder ud på grund af tyngdekraften, der virker på elektroakupunkturklemmen. Fastgør derefter enden af elektrodetråden sikkert på nålehåndtaget.
- Tænd for strømmen, og vælg de relevante frekvens-, strøm- og tidsparametre. I dette eksperiment blev parametrene indstillet til 2 Hz, 1 mA og 15 min. Når parametrene er justeret, påbegyndes elektroakupunkturbehandlingsprocessen (se video 2 og video 3).
- Samtidig elektroakupunktur på rotter: Under behandlingen suspenderes rotterne i samme gruppe sammen på jernpinden ved hjælp af de S-formede kroge og lade dem gennemgå elektroakupunkturintervention samtidigt.
- BEMÆRK: Jernpinden skal ikke kun være robust, men også lang nok til at behandle en gruppe rotter på samme tid. I dette forsøg kan 3-4 rotter behandles samtidigt, samtidig med at der sikres passende afstand og ingen interferens mellem rotterne (se figur 4C).
- Observation af rotteresponser under elektroakupunkturbehandling: Evaluer egnetheden af denne fikseringsmetode til elektroakupunktur hos rotter baseret på følgende faktorer, såsom antallet af medarbejdere, der kræves for at fuldføre operationen, den tid, det tager at fiksere en rotte, rotternes respons under elektroakupunkturbehandlingen, antallet af nåle, der faldt under proceduren, og eventuelle utilsigtede dødsfald, der måtte opstå under operationen.
- Fjernelse af nåle
- Når den forudindstillede tid er afsluttet, slukker elektroakupunkturapparatet automatisk. Fjern den lille klemme, der er forbundet til nålehåndtaget, og fjern forsigtigt akupunkturnålen under rottens hud, hvorved elektroakupunkturbehandlingsprocessen afsluttes.
- Løsn stropperne, løft hoveddækslet på rottens jakke, og placer rotten over buret. Rotten vil derefter være fri til at frigøre sig fra jakken og komme ind i buret uafhængigt (se video 4).
Video 2. Needling akupunkter i lændehvirvelområdet. Denne video demonstrerer den omfattende og sammenhængende procedure, der omfatter rottens påklædning i jakken, indsættelse af akupunkturnåle i akupunkter i taljen og den efterfølgende tilslutning af et elektroakupunkturapparat. Klik her for at downloade denne video.
Video 3. Needling akupunkter i maven og underekstremiteten. Denne video demonstrerer den omfattende og sammenhængende procedure, der omfatter rottens påklædning i jakken, indsættelse af akupunkturnåle i akupunkter placeret i maven og underekstremiteten og den efterfølgende tilslutning af et elektroakupunkturapparat. Klik her for at downloade denne video.
Video 4. Fjernelse af rottejakken. Denne video viser den sædvanlige praksis med at fjerne jakken fra rotten. Klik her for at downloade denne video.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I dette forsøg blev i alt 12 rotter udvalgt til elektroakupunkturbehandling, og deres reaktioner under fikseringsmetoden blev observeret (som vist i tabel 2). Blandt de 12 rotter udviste kun 1 rotte intens kamp i løbet af den 15 minutters elektroakupunkturnåleretentionsperiode. Som et resultat af dets kraftige bevægelser kom nålen af midtvejs og tegnede sig for 8,33% af det samlede antal rotter. Dette resultat tyder på, at den anvendte fikseringsmetode generelt viser en bemærkelsesværdig grad af stabilitet og pålidelighed. På trods af den kamp, som en rotte udviste, opretholdt størstedelen af rotterne i gruppen korrekt nålefiksering under hele behandlingen. Desuden blev der i løbet af den 2-måneders eksperimentelle varighed, hvor denne metode blev anvendt til at immobilisere rotter til elektroakupunkturbehandling, ikke registreret tilfælde af rottedødelighed, hvilket tyder på sikkerheden ved denne fikseringsmetode for rotter.
Derudover sammenlignede vi i tabel 3 denne fikseringsmetode med fire andre metoder rapporteret i litteratur9,10,13,14. For det første opnåede de andre metoder med hensyn til stabilitet, bortset fra den lidt ringere stabilitet ved den femte metode ved hjælp af en nyfremstillet rotteholderfiksering, relativt sikker fiksering. Med hensyn til tid var den gennemsnitlige tid, der kræves for at fiksere en rotte ved hjælp af denne metode, kortere end den for rottepelsens svingfikseringsmetode. De resterende metoder specificerede ikke den tid, der kræves til fiksering i deres respektive papirer; Derfor er der ingen diskussion. Med hensyn til antallet af medarbejdere, der kræves for at fiksere en rotte, krævede både denne metode og rottebelægningssvingophængningsmetoden kun en person til at fuldføre operationen, hvilket forbedrede eksperimentel effektivitet. Med hensyn til det eksponerede akupunktområde kan den specialdesignede rottejakke i denne protokol imidlertid opfylde kravene til at udsætte de fleste akupunkter på kroppen, mens rottefrakken i svingophængsmetoden hovedsageligt udsætter lemmerne. Med hensyn til de materialer, der anvendes til fiksering, er de materialer, der kræves til denne metode, relativt lette at opnå i både laboratorie- og hverdagsindstillinger. Med hensyn til rottens position under fiksering er den naturlige position åbenbart mere behagelig end den tvungne position. Samlet set ligner denne metode rottefrakkens svingophængsfikseringsmetode, men den har målrettet forbedringer i stoffet og designet af rottejakken, hvilket giver mulighed for mere eksponering af kropsakupunkter. Sammenlignet med at være ophængt på en stofrem bruger denne protokol desuden mere robuste stålrør, hvilket reducerer de negative virkninger forårsaget af individuelle rotters voldsomme rystelser på andre rotter, når flere rotter samtidig gennemgår elektroakupunkturbehandling på fikseringsstativet. Dette sikrer stabiliteten og pålideligheden af eksperimentelle data.
I betragtning af de førnævnte faktorer samlet udviser denne tilgang fordelene ved stabilitet, effektivitet, overkommelighed og relativ komfort for rotter, hvilket gør det til en værdifuld mulighed for nålindsættelsesfiksering.
| Fastgørelse metode | Antal kæmpende rotter | Procent af kæmpende rotter (%) | Antal rotter med nålefald under behandlingen | Procent af rotter med nålefald under behandlingen(%) | Antal rotter døde under drift | Procent af rotter døde under drift(%) |
| Affjedringsfiksering bundet med jakkegruppe | 1 | 8.33 | 1 | 8.33 | 0 | 0 |
Tabel 2. Faste rotters respons under elektroakupunkturbehandling (n=12).
| Serienummer | Fastgørelse metode | Er fikseringen af rotter stabil og sikker | Den tid, der kræves for at fikse en rotte | Antal medarbejdere, der kræves for at fikse en rotte | Placeringen og rækkevidden af akupunkter, der kan udsættes | Adgang til inventar eller materialer | Komfort ved faste metoder til rotter: naturlig eller tvungen position | Referencer | |||||||||||||||
| 1 | Affjedringsfiksering bundet med jakke i vores eksperiment | √ | 50-63 s | 1 | Mave, hoved, ryg og talje, lemmer | Let tilgængelig | Naturlig position | ||||||||||||||||
| 2 | En fikseringsramme til akupunktur og moxibustion til Shu-Mu akupunktkombination (et akupunktvalg, der kombinerer alarmpunkterne med rygtransportpunkterne) | √ | / | / | Hoved, lemmer, ryg og talje | Fastgørelsesrammen skal tilpasses | Tvungen position | 9 | |||||||||||||||
| 3 | Fastgørelsesmetode til svingende rotter bundet med frakke | √ | 85-93 s | 1 | Lemmer dele | Let tilgængelig | Naturlig position | 10 | |||||||||||||||
| 4 | En rottefikseringsanordning lavet af et gammelt meshy burdæksel | √ | / | ≥2 | Udvalget af akupunkter er ikke begrænset | Let tilgængelig | Tvungen position | 13 | |||||||||||||||
| 5 | En nylavet rotteholder | Efter fiksering har rotternes for- og bagben stadig en vis grad af mobilitet. Desuden er der en vis risiko for, at skæringspunktet for halsfikseringsstangen hos rotter kan være for højt, hvilket kan føre til kvælning hos rotter. Hvis det er for lavt, kan hovedfiksering af rotter være ustabil. | / | / | Udvalget af akupunkter er ikke begrænset | Rotteholder kræver særlig tilpasning | Naturlig position | 14 | |||||||||||||||
Tabel 3. Sammenligning af resultater af forskellige fikseringsmetoder i rotteakupunktur og moxibustionseksperiment.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Elektroakupunktur har vist sig at have gode terapeutiske virkninger på forskellige sygdomme såsom kognitiv svækkelse 16,17, myokardieskade18 og inflammatorisk smerte19. For at forstå dets virkningsmekanisme er der udført dyreforsøg primært med rotter. Fastgørelse af dyrene under forsøgene er afgørende for nøjagtige resultater. Mens mange undersøgelser har administreret elektroakupunktur efter dyrebedøvelse, kan denne praksis hæmme hjernefunktionen og kompromittere eksperimentel nøjagtighed. Desuden forlænger langvarig administration af anæstesi nåleproceduren og øger chancerne for dødelighed for dyr. De rapporterede ikke-bedøvelsesmetoder har dog også begrænsninger, som er blevet diskuteret omhyggeligt i tabel 3.
Denne undersøgelse præsenterer en ny protokol, der introducerer en specialfremstillet rottejakke i forbindelse med et forhøjet fikseringsstativ. Det afgørende aspekt af denne protokol involverer at skabe rottejakker med passende størrelser baseret på rotternes kropsformer og yderligere tilpasse dem i henhold til den specifikke placering af de akupunkter, der skal nåles. Et nyttigt tip til montering af rottejakken er at udnytte rottens naturlige tilbøjelighed til mørke og gravning for at tilskynde den til at komme ind i hovedbeklædningen. Når rottens hoved er sikret, bliver de efterfølgende fikseringsprocedurer meget enklere.
Efter adaptiv træning viste rotterne minimalt ubehag, mens de brugte denne teknik. De nødvendige udstyrsmaterialer, såsom stoffer, S-formede kroge, jernpinde og andre materialer, er let tilgængelige og omkostningseffektive, hvilket letter en reduktion i eksperimentelle udgifter. En anden fordel er, at tætheden af rottejakkestropperne kan justeres i henhold til rottens størrelse, hvilket gør den fleksibel og kontrollerbar. Hele fikseringsoperationen kan udfyldes af en person uafhængigt, og den forhøjede konfiguration af enheden gør det muligt for forskere at behandle en gruppe små dyr samtidigt og derved forbedre eksperimentets effektivitet betydeligt, reducere tiden på hele eksperimentet og minimere uoverensstemmelser mellem samme gruppe dyr. Desuden undgår den forhøjede platform behovet for et bord, da det kan placeres direkte på plant underlag og derved optimere rumlig udnyttelse. Derudover kan disse designs modificeres og udvides til brug i andre forsøgsdyr, såsom marsvin, og kan også effektivt anvendes til moxibustionsbehandling.
En potentiel begrænsning ved denne tilgang er kravet om, at forskere skal have et højt niveau af færdigheder i teknikken, samt behovet for at skabe rottejakker af varierende dimensioner, der er skræddersyet til hver rottes kropslængde og lemmerafstand. Derudover er det uundgåeligt, at nogle rotter kan opleve mildt ubehag og stress ved første eksponering for rottejakken og suspensionsfiksering. Derfor bliver det bydende nødvendigt at implementere adaptiv træning for rotter, der gennemgår elektroakupunkturbehandling. Desuden er det bydende nødvendigt at håndtere disse rotter med forsigtighed under proceduren og anvende blide strøg for at berolige og berolige dem i tilfælde af agitation eller manglende overholdelse. Det er værd at bemærke, at for at minimere virkningen af uundgåelig stress på rotters fysiske tilstand og adfærdsmæssige eksperimenter, bør kontrolgruppen (herunder en tom kontrolgruppe og en modelkontrolgruppe) også gennemgå samme mængde håndtering, rottejakkebinding og forhøjet fiksering på samme tid som elektroakupunkturbehandlingsgruppen, selvom de ikke modtager elektroakupunkturbehandling.
Sammenfattende giver denne fikseringsmetode os en bekvem og effektiv mulighed for immobilisering af rotter, hvilket sikrer en pålidelig garanti for stabil og jævn akupunkturoperation og nåleretentionsproces.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Alle forfattere har erklæret ingen potentielle interessekonflikter.
Acknowledgments
Forfatterne vil gerne udtrykke deres taknemmelighed over for Figdraw videnskabelige forskningstegningsplatform for Home for Researchers for at levere det materiale, der bruges til at oprette figur 2 i dette papir, med autoriseret licens-id: URUUO5699e. Dette arbejde har modtaget støtte fra tilskud fra National Natural Science Foundation of China (81873380, 82074566), Natural Science Foundation of Hubei-provinsen (2022CFCO43) og National Famous Traditional Chinese Medicine Heritage Studio Construction Project of the National Administration of Traditional Chinese Medicine ([2022] No.5, [2022] No.75).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 75% alcohol | Shandong Lircon medical technology co., ltd | 2002-0059 | Disinfection |
| acupuncture needles | Beijing Luo ya shan chuan medical equipment co., Ltd. | needling | |
| Adult Sprague-Dawley (SD) rats | Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd. | SCXK 2020-0001 | The recipient subjected to fixation |
| an elevated fixation rack | Taizhou shiai instruments and equipments for scientific and teaching research Co., ltd | / | Fix rats |
| Hans electronic acupuncture apparatus | Beijing Huayun Ante Science and Technology Co. Ltd. | HANS-200A | electroacupuncture |
| Medical cotton ball | Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd. | 20172142357 | Disinfection |
| Pet electric clipper | Fenghua Xikou Lubao Knives & Scissors Electrical Appliance Factory | / | Shave the hair of rats |
| Tweezers | Qingdao Schultz Biotechnology Co., ltd | Pinch cotton balls |
References
- Liu, Z., et al. Effect of Electroacupuncture on Urinary Leakage Among Women With Stress Urinary Incontinence: A Randomized Clinical Trial. The Journal of the American Medical Association. 317 (24), 2493-2501 (2017).
- Tsuei, J. J.
- Liu, S., et al. Somatotopic Organization and Intensity Dependence in Driving Distinct NPY-Expressing Sympathetic Pathways by Electroacupuncture. Neuron. 108 (3), 436-450 (2020).
- Liu, S., et al. A neuroanatomical basis for electroacupuncture to drive the vagal-adrenal axis. Nature. 598 (7882), 641-645 (2021).
- Li, X., Wei, W., Wang, Y., Wang, Q., Liu, Z. Global Trend in the Research and Development of Acupuncture Treatment on Parkinson's Disease From 2000 to 2021: A Bibliometric Analysis. Frontiers In Neurology. 13, 906317 (2022).
- Jiang, S., et al. Application Progress of fixation methods for rodents under non anesthesia in acupuncture and moxibustion experiments domestically and abroad. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 40 (12), 1509-1514 (2021).
- Jiang, H. Z., et al. Fixation method in the study of acupuncture intervention on rats. Journal of Shanxi College of Traditional Chinese Medicine. 20 (3), 169-171 (2019).
- Wang, Y., Ning, Y., Wang, P. Y., Yang, Y. Q. Method of Placing a Rat on an Elevated Platform for Acupuncture. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 31 (5), 289-292 (2012).
- Wang, F., Xiong, J., Zeng, F., He, Z. X. A fixation frame for acupuncture and moxibustion of Shu-Mu acupoint combination in rats. Acupuncture Research. 47 (10), 938-940 (2022).
- Tu, S., P, C., Y, Y. H. Fixation method for needle warming moxibustion treatment on swinging rats bound with coat. Chinese Journal of Comparative Medicine. 31 (5), 128-132 (2021).
- Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Influence of anesthetic agent, depth of anesthesia and body temperature on cardiovascular functional parameters in the rat. Laboratory Animals. 48 (1), 6-14 (2014).
- Kiyatkin, E. A., Brown, P. L. Brain and body temperature homeostasis during sodium pentobarbital anesthesia with and without body warming in rats. Physiology & Behavior. 84 (4), 563-570 (2005).
- He, C., Zhang, C., Zhou, S., Fan, Y. Using old meshy cage cover to make a rat fixating device for acupuncture study. Acupuncture Research. 46 (4), 348-350 (2021).
- Li, Y., Lin, N., Huang, Y., Xue, X., Liu, Q. A Newly-made Rat Holder for Convenient Acupuncture Needle Insertion. Acupuncture Research. 41 (5), 466-468 (2016).
- Bielitzki, J. T., Barbee, R. W., Garber, J. Guide for the care and use of laboratory animals. 85 (3), National Academies Press (U.S.). NIH Publication No 85-23(rev) 963-965 (2011).
- Zheng, X., et al. Electroacupuncture ameliorates beta-amyloid pathology and cognitive impairment in Alzheimer disease via a novel mechanism involving activation of TFEB (transcription factor EB). Autophagy. 17 (11), 3833-3847 (2021).
- Su, X., et al. Effectiveness and Safety of Acupuncture for Vascular Cognitive Impairment: A Systematic Review and Meta-Analysis. Frontiers In Aging Neuroscience. 13, 692508 (2021).
- Wang, Q., et al. Efficacy of electroacupuncture pretreatment for myocardial injury in patients undergoing percutaneous coronary intervention: A randomized clinical trial with a 2-year follow-up. International Journal of Cardiology. 194, 28-35 (2015).
- Zhang, R., Lao, L., Ren, K., Berman, B. M. Mechanisms of acupuncture-electroacupuncture on persistent pain. Anesthesiology. 120 (2), 482-503 (2014).
