Summary
Burada, akupunktur deneyleri sırasında sıçanları etkili bir şekilde hareketsiz hale getirmek için bir sıçan ceketi kullanarak geliştirilmiş bir süspansiyon fiksasyon yöntemi sunuyoruz. Ayrıca, bu fiksasyon aparatının yapısı ve uygulaması ile elektroakupunktur tedavisinde kullanımına ilişkin talimatlar ve değerlendirmeler açıklanmaktadır.
Abstract
Temel deneysel akupunktur araştırmalarında, sıçanlar genellikle laboratuvar hayvanları olarak kullanılır. Bununla birlikte, sabit bir duruş sürdürmeleri zordur. Elektroakupunktur prosedürleri sırasında, sıçanların uygun şekilde immobilizasyonu esastır. Şu anda anestezi fiksasyonu, yüksek platform fiksasyonu, bağlama fiksasyonu ve kendi kendine yapılan bir sıçan ceketi ile fiksasyon dahil olmak üzere çeşitli sıçan fiksasyon yöntemleri kullanılmaktadır. Bununla birlikte, bu yöntemlerin, deneyin verimliliğini ve çalışabilirliğini bir dereceye kadar etkileyebilecek sınırlamaları vardır. Bu protokol, sıçan giysileri kullanarak sıçanları askıya almak ve sabitlemek için bir yöntem sunar. İlk olarak, sıçanlar, karanlık ve oyuk tercihlerinden yararlanarak vücut şekillerine uygun sıçan ceketleri giydirilir. İğneleme işlemi daha sonra sıçanlar sıçan kıyafetleri giydikten sonra gerçekleştirilebilir. Askıya alındığında, sıçanlar uzuvları hareket edemediği için nispeten hareketsizdir. Bu fiksasyon yöntemi sadece ekonomik ve kullanıcı dostu faydalar sağlamakla kalmaz, aynı zamanda sıçanların rahat bir pozisyonda stabil ve güvenilir bir şekilde sabitlenmesini sağlar. Ayrıca zaman tüketimini, deneysel alanı ve insan gücü kaynaklarını etkili bir şekilde en aza indirir. Ek olarak, bu yöntem sıçanlarda akupunktur için kullanılan çoğu akupunktur noktasının açığa çıkmasına izin verir. Bu makale öncelikle, özel olarak tasarlanmış bir sıçan ceketi, yükseltilmiş bir sabitleme rafı ve bunların bağlantı yapılarını kapsayan cihazın bileşimine odaklanmaktadır. Ek olarak, sıçan elektroakupunktur prosedürlerinde sıçan giysisi bazlı süspansiyon fiksasyon yönteminin uygulanmasını göstermek için açıklayıcı bir örnek sunulacaktır.
Introduction
Akupunktur, hastalıkları önlemek ve tedavi etmek için belirli akupunktur noktalarında veya diğer pozisyonlarda iğneleme ile karakterize edilen geleneksel bir tedavidir. Elektroakupunktur, filiform iğneleri elektriksel stimülasyon1 ile birleştirir, bu da ilgili parametreleri ayarlayarak stimülasyon miktarı üzerinde hassas kontrol sağlar ve akupunktur tedavisininstandardizasyonunu teşvik eder 2. Son yıllarda, elektroakupunktur mekanizmaları üzerine yapılan araştırmalar genişlemeye ve derinleşmeye devam etmiştir3,4, bu da elektroakupunktur5 mekanizmalarına odaklanan çalışmalarda yıllık bir artışa yol açmıştır.
Elektroakupunktur ile ilgili temel araştırmalarda, sıçanlar en sık kullanılan hayvanlardır. Elektroakupunktur tedavisi sırasında, sorunsuz bir prosedür sağlamak için alıcı hareketsiz kalmalıdır. İnsan deneklerle yapılan klinik deneylerden farklı olarak, hayvan deneylerinde kullanılan küçük hayvanlar, 15-30 dakikalık uzun elektroakupunktur prosedürleri sırasında komutları bilinçli olarak takip edemezler. Bu, araştırmacılara istikrarlı ve güvenilir bir fiksasyon elde etme konusunda birincil bir zorluk sunar. Yanlış fiksasyon, hayvanlarda anksiyete, depresyon ve korku gibi olumsuz duygulara yol açabilir6, bu sadece sıçanlar için yaralanma riskini ve deney personeli için ısırılma şansını artırmakla kalmaz, aynı zamanda araştırma sonuçlarının istikrarını ve ikna ediciliğini de etkiler.
Önceki çalışmalarda, araştırmacılar akupunktur veya elektroakupunktur operasyonlarından önce sıklıkla anestezi fiksasyonu7, yüksek platform fiksasyonu8, bağlanma fiksasyonu 6,9 veya sıçan ceketi fiksasyonu10 kullandılar. Bununla birlikte, anestezinin vücut11 ve beyin fonksiyonu12 üzerindeki etkileri göz önüne alındığında ve klinik vakalarda bilinçli hastalara akupunktur yapıldığı göz önüne alındığında, anestezi araştırma sonuçlarını bir dereceye kadar etkileyebilir. Bu nedenle, anestezi fiksasyonu ile karşılaştırıldığında, sıçanların uyanık durumda rahat bir şekilde sabitlenmesi daha iyi bir seçenektir.
Bununla birlikte, anestezi uygulanmamış durumda, sıçanlarda10 sıçan kürkünün kaplanması nedeniyle sınırlı akupunktur noktası maruziyeti, operasyonu gerçekleştirmek için en az iki kişinin gerekliliği 13, ayarlanamayan fiksatör boyutu14 veya zorunlu pozisyondasıçanların stresli durumu 6 dahil olmak üzere çeşitli fiksasyon yöntemleri de kendi sınırlamalarına sahiptir. Bu teknik sorunları ele almak için, sıçan vücudunun çoğu yerinde akupunktur manipülasyonu için uygun bir sıçan ceketi ve bir sabitleme rafı tasarladık. Bu, araştırmacıların sıçanlarla akupunktur prosedürlerini verimli bir şekilde gerçekleştirmelerine yardımcı olabilir.
Bu protokolün gerekçesi şu şekildedir: ilk olarak, sıçanların ceketindeki kapalı başlık, sıçanların karanlığa ve yuva açmaya olan doğal eğiliminden yararlanır ve böylece faaliyet alanlarını kısıtlar. İkincisi, sıçanların uzuvlarının eklemlerine yakın bağlama ipleri, hareketlerine belirli sınırlamalar getirerek fiziksel sıkıştırma kısıtlaması sağlar. Bununla birlikte, sıçanlar ceketi giyerken bile yatay olarak zıplayabilir ve hareket edebilir. Son olarak, sıçanlar asılı kaldıklarında sabit bir kuvvet noktası olmadan yere temas edemedikleri için, sıçan ceketine bir süspansiyon sabitleme cihazı ekleyerek hareketlerini daha da kısıtladık ve iğnenin tutulmasını sağladık. Sabitleme cihazının bileşimi Şekil 1'de gösterilmiştir.
Şekil 1: Sıçan ceketi ve süspansiyon fiksasyonunun şematik diyagramı. (A) Sıçan ceketinin düz görünümdeki genel görünümü. (B) Sıçan ceketinin üç boyutlu görünümü. (C) Baş ve arka beldeki akupunktur noktalarına yakın bir kesi ile özel olarak tasarlanmış sıçan ceketi. (D) Yükseltilmiş rafta aynı anda asılı duran birden fazla sıçanın çizimi. 1: Kumaşın genel görünümü; 2: Ön ayak çıkışı; 3: Arka bacak çıkışı; 4: İp bağlama; 5: Dikişten sonra oluşan boşluk; 6: Baş akupunktur noktalarını ortaya çıkarmak için kesi; 7: Sırt ve bel akupunktur noktalarını ortaya çıkarmak için kesi. 8: Dikiş pozisyonu. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bu çalışmada sıçanlar üzerinde yapılan tüm prosedürler, Çin Halk Cumhuriyeti tarafından resmi olarak kabul edilen Ulusal Laboratuvar Hayvanı Refahı ve Etik İnceleme Kılavuzları Standardı'na (2018) ve Ulusal Akademiler Yayınları'ndan Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na (15) bağlı kalmıştır. Bu protokol üç ana adımdan oluşmaktadır. İlk olarak, sıçan ceketleri, farklı ağırlıklara sahip sıçanların bireysel vücut şekillerine göre uyarlanır ve takılır. Daha sonra, akupunktur manipülasyonu standart prosedürler izlenerek gerçekleştirilir. Son olarak, sıçanlar ceketlerinde asılı kalırken, iğneler aynı gruptaki sıçanlar arasında eşzamanlı müdahale ihtiyacını karşılamak için yerinde kalır.
1. İğneleme öncesi hazırlık
- Sıçan ceketinin üretimi
- Ceketlerini yapmadan önce fareleri tartın ve vücut şekillerini ölçün. Bu protokolün farklı ağırlıklardaki sıçanlar için uygunluğunu doğrulamak için, Şekil 2'de gösterildiği gibi, a'dan f'ye ölçümleri kapsayan, vücut boyutlarının bağımsız ölçümleri için 220 g, 300 g, 400 g ve 520 g ağırlığındaki sıçanları seçin.
NOT: Sıçanların vücut oranları ile karşılık gelen ceket boyutları arasındaki korelasyon da Şekil 2'de sunulmaktadır. Farklı ağırlıktaki sıçanlar için ilgili vücut uzunluğu parametreleri Tablo 1'de kaydedilmiştir. - Sıçan ceketi yapmak için dikdörtgen bir kalın, koyu kumaş parçası kesin. Kumaşı, sıçanın karnının en kalın kısmı etrafında ölçülen çevreye eşit katlanmamış genişlikte kullanın. Kumaşın uzunluğu, sıçanın burun ucundan kuyruğunun tabanına kadar olan mesafeye eşittir (bkz. Şekil 2).
- Kumaşı ikiye katlayın ve sağ yamuk oluşturmak için sol üst köşeyi yaklaşık 45°-65° açıyla kesin (bkz. Şekil 3A).
- Soldaki iki tarafı pamuk ipliği ile sıkıca dikin. Rehberlik için Şekil 1B ve Şekil 3B'ye bakın.
- Sıçanın üst ve alt uzuvlarının geçmesi için kumaşın her iki tarafında birer tane olmak üzere iki küçük delik açın (bkz. Şekil 3C). İki üst ekstremite arasındaki mesafe, sıçan ceketinin üst delikleri arasındaki boşluğu belirler. İki alt ekstremite arasındaki mesafe, sıçan ceketinin alt delikleri arasındaki boşluğu belirler.
- Sıçan ceketinin üst ve alt delikleri arasındaki boşluk olarak hizmet etmek için sıçanın koltuk altı ile iliumun önü arasındaki uzunlamasına mesafeyi kullanın. Sıçan ceketindeki üst deliğin çevresini belirlemek için omuz ekleminin çevresini kullanın. Sıçan ceketindeki alt deliğin çevresi için kalça ekleminin çevresini kullanın.
- Her deliğin yanına, fareyi sabitlemek için ceketin açılış ucundan vücudun etrafına sıkıca sarılabilen ve sıkıca sarılabilen uzun bir bez kayış dikin.
- Ceketlerini yapmadan önce fareleri tartın ve vücut şekillerini ölçün. Bu protokolün farklı ağırlıklardaki sıçanlar için uygunluğunu doğrulamak için, Şekil 2'de gösterildiği gibi, a'dan f'ye ölçümleri kapsayan, vücut boyutlarının bağımsız ölçümleri için 220 g, 300 g, 400 g ve 520 g ağırlığındaki sıçanları seçin.
- Sıçan ceket giyme yöntemi
- Fareyi ceketin içine giydirmeye devam etmeden önce eldiven giyin. Sıçan ceketinin orta ve arka kısmını bir elinizle masanın üzerinde tutarak başlayın. Diğer elinizle farenin kuyruğunu beslenme kafesinden tutun ve yavaşça ceketin içine yerleştirin.
- Sıçan ileri doğru hareket ettikçe, başı ceketin başlığına ulaşacaktır. Bu noktada, sol ve sağ üst uzuvlarını ceketteki deliklerden dikkatlice çıkarmak için iki elinizi kullanın.
- Bağlama ipini ceketin açık ucundan alın, soldan sağa doğru çaprazlayın ve farenin gövdesine sıkıca sarın. Doğru sabitlemeyi sağlamak için gövdenin karşı tarafına sıkıca bağlayın. Sıçanın üst uzuvlarının kısıtlanmasının ardından, alt uzuvlarını sabitlemek için aynı prosedürü tekrarlayın.
- Uzuvlarını ceket deliklerinden çekerken farenin pençeleri tarafından ısırılmamak veya çizilmemek için önlem alın. İpin sıkılığının uygun şekilde ayarlandığından, yani sıçanlarda lokal uzuv iskemisi ve hipoksiye neden olacak kadar sıkı olmadığından ve sıçanın kolayca kaçmasına izin verecek kadar gevşek olmadığından emin olun (bkz. Video 1).
- Sabitleme rafı ve S-şekilli demir kancalar
- Sabitleme rafı, iki ağır demir tepsiden (24 cm uzunluğunda, 12 cm genişliğinde ve 2 cm yüksekliğinde) ve her tepsiye sıkıca kaynaklanmış bir demir sütundan (60 cm uzunluğunda) oluşur. Sabit bir yükseklikte ayarlanabilen ve muhafaza edilebilen bir vida bağlantı yapısı kullanarak iki demir kolona aynı yükseklikte sağlam bir demir çubuk (145 cm uzunluğunda) sabitleyin (bkz. Şekil 4A).
- Ceketi giyen fareyi demir çubuğa bağlamak için S şeklindeki kancaları (11 cm çapında) kullanın. Kancanın bir ucunu ceketin kayışının etrafına sarın, diğer ucunu demir çubuğa asın. Fareyi çubuğa sabitlemek için iki S şeklinde kanca kullanın. Genel yapı için lütfen Şekil 1D ve Şekil 4B'ye bakın.
Şekil 2: Sıçan vücut şekli ve eşleşen sıçan ceketi boyutunun karşılık gelen diyagramı. Diyagramda, a parametresi, üst ekstremiteler ile sıçanın gövdesi arasındaki eklemin arkasındaki enine mesafeyi temsil eder. Bu değer, sıçan ceketinin üst ekstremiteleri için penetran delikler arasındaki boşluk ölçümü olarak kullanılır. Benzer şekilde, b parametresi, sıçanın iki taraflı alt ekstremitelerinin gövdeye bağlandığı sırttaki enine mesafeyi temsil eder. Bu ölçüm, sıçan ceketinin alt ekstremiteleri için delici deliklerin aralığını belirler. C parametresi, sıçanın ceketinin kumaşı için genişlik ölçümü olarak kullanılabilen, sıçanın karnının en kalın kısmının çevresini belirtir. D parametresi, sıçanın koltuk altından iliumunun önüne kadar olan mesafeyi temsil eder ve ceketin üst ve alt delikleri arasındaki uzunlamasına mesafeyi belirler. E parametresi, sıçanın burun ucundan kuyruğunun tabanına kadar olan uzunlamasına mesafeye karşılık gelir ve sıçanın ceket bezi için uzunluk ölçümü görevi görür. F parametresi, üst ekstremite ile sıçanın gövdesini birbirine bağlayan artikülasyonun çevresini gösterir ve üst ekstremitelerin içinden geçtiği deliğin çevresi olarak hizmet eder. G parametresi, alt ekstremiteleri ve sıçanın gövdesini birbirine bağlayan eklemin çevresini temsil eder ve alt ekstremitelerin geçtiği deliğin çevresini belirler. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
| Vücut Ağırlığı (g) | Vücut Şekli Parametreleri (cm) | ||||||
| a | b | c | d | e | f | g | |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
Tablo 1. Farklı vücut ağırlıklarına sahip sıçanların vücut şekil parametrelerinin ölçüm sonuçları.
Şekil 3: Sıçan ceketinin fiziksel görünümünü ve kullanımını gösteren diyagram. (A) Sıçan ceketinin düzlem dış görünümü. Sıçanın ceketinin şekli, sıçanın üst ve alt uzuvlarının geçmesi için sol ve sağ taraflarda ayrı açıklıklar bulunan dik açılı bir yamuğu andırır. (B) Sıçan ceketinin katlanmamış dış görünümü. Başlığın kapatılması, fareleri girmeye ikna etmek için çok önemli bir bileşen görevi gören yarı kapalı bir boşluk oluşturur. (C) Ceket giymiş bir farenin yandan görünümü. Sıçanın uzuvları giysideki açıklıklardan geçtikten sonra, kayışlar gövdenin ventral yüzeyinden geçer ve uygun gerginlikle arkaya güvenli bir şekilde sabitlenir. Bu, sıçanın nispeten hareketsiz olmasını sağlar. (D) Sıçan ceketi giymiş bir sıçanın karın görünümü. Ceketin ventral yüzeyi, sıçanın karın derisini açığa çıkararak ventral noktalarda akupunktur için kolay erişim sağlar. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Video 1: Fare ceketini giyiyor. Bu video, sıçanı ceketin içine giydirmenin tipik bir sürecini göstermektedir. Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 4: Yükseltilmiş sabitleme rafının fiziksel görünümünü ve kullanımını gösteren şema. (A) Yükseltilmiş sabitleme rafı. Bu raf, esas olarak her tepsiye kaynaklanmış iki dikey demir sütundan (60 cm uzunluğunda) ve zemine paralel yerleştirilmiş uzun bir yatay demir çubuktan (145 cm uzunluğunda) oluşur. Yatay çubuğu dikey sütunlarla aynı yükseklikte sabitlemek için vidalar kullanılır. (B) Sabitleme rafında sıçan süspansiyonu. Sıçan ceketlerini giyen sıçanlar, sıçan başına iki S-şekilli kanca kullanılarak sabitleme rafına güvenli bir şekilde sabitlenir. (C) Birden fazla sıçanda eşzamanlı elektroakupunktur tedavisi. Kuyruk hareketinden kaynaklanan herhangi bir potansiyel paraziti önlemek için, sıçanlar arasında bir sıçanın kuyruğunun uzunluğuna eşdeğer uygun mesafenin korunması gerekiyordu. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
2. Elektroakupunktur prosedürü
- Rutin hazırlık
- Sabitleme rafını yatay bir masaüstüne veya zemine yerleştirin.
- İğneleme prosedüründen önce, tam maruz kalmayı sağlamak için elektrikli bir tıraş makinesi kullanarak akupunktur noktalarının etrafındaki kürkü çıkarın. Delinecek akupunktur noktası, Guanyuan (CV4, göbeğin yaklaşık 25 mm altında) gibi sıçanın karnına yerleştirildiğinde, karın akupunktur noktalarını ortaya çıkarmak için sıçan giysisinin genişliğini uygun şekilde kısaltın.
- Akupunktur noktasını, sıçan ceketi tarafından örtülmeyen karnın orta hattındaki boşluktan bulun (bkz. Şekil 3D) ve ardından iğneyi enjekte edin.
- Delinecek akupunktur noktaları, Baihui (parietal kemiğin ortasında bulunan GV20) gibi sıçanın kafasında olduğunda, GV20 çevresindeki cildi tamamen ortaya çıkarmak için kafadaki ilgili pozisyonda küçük bir kesi yapın (Bkz. Şekil 1C).
- Üst ekstremitede Neiguan (PC6, ön ekstremitenin iç tarafında, bilek ekleminden yaklaşık 3 mm uzakta radyal ve ulnar sütürler arasında) veya alt ekstremitede Zusanli (ST36, diz ekleminin posterolateral tarafında, fibula başının yaklaşık 2 mm altında) gibi sıçanların uzuvlarında akupunktur noktaları bulunurken, Akupunktur noktalarının bariz bir şekilde açığa çıkması nedeniyle, uzuvun sabitlenmesine yardımcı olmak için bir elinizi kullanın, diğeri ise doğrudan akupunktur işlemini gerçekleştirebilir.
- Akupunktur noktası, Shenshu gibi bir sıçanın sırtına veya beline yerleştirildiğinde (BL23, 2. bel omurlarının altında, sırtın orta hattından 6 mm uzakta), ilgili bölgenin derisini tamamen ortaya çıkarmak için sıçanın ceketinin ortasında yaklaşık 2 cm genişliğinde bir açıklık açın (Bkz. Şekil 1C).
- Sıçanı ceketin içine giydirin. Akupunktur noktalarının lokal cildini alkollü çubuklarla dezenfekte ettikten sonra akupunktur işlemine başlayın.
- İğneleme tekniği: Akupunktur noktasını doğru bir şekilde bulun. Steril tek kullanımlık bir akupunktur iğnesini (0.16 mm x 7 mm) sıçanın akupunktur noktasına uygun derinlikte yerleştirin.
- Elektroakupunktur operasyonu
- Elektrot telini yatay demir çubuğun etrafına sarın. Bu adım, elektroakupunktur klipsine etki eden yerçekimi kuvveti nedeniyle iğnenin düşme riskini azaltır. Ardından, elektrot telinin ucunu iğne sapına sağlam bir şekilde takın.
- Gücü açın ve uygun frekans, akım ve zaman parametrelerini seçin. Bu deneyde parametreler 2 Hz, 1 mA ve 15 dk olarak ayarlandı. Parametreler ayarlandıktan sonra elektroakupunktur tedavi sürecini başlatın (Bkz. Video 2 ve Video 3).
- Sıçanlarda eşzamanlı elektroakupunktur: Tedavi sırasında, aynı gruptaki sıçanları S-şekilli kancaları kullanarak demir çubuk üzerinde birlikte askıya alın ve aynı anda elektroakupunktur müdahalesine girmelerine izin verin.
- NOT: Demir çubuk sadece sağlam değil, aynı zamanda bir grup fareyi aynı anda tedavi edecek kadar uzun olmalıdır. Bu deneyde, sıçanlar arasında uygun aralık ve parazit olmaması sağlanırken, 3-4 sıçan aynı anda tedavi edilebilir (bkz. Şekil 4C).
- Elektroakupunktur tedavisi sırasında sıçan tepkilerinin gözlemlenmesi: Bu fiksasyon yönteminin sıçanlarda elektroakupunktur için uygunluğunu, operasyonu tamamlamak için gereken personel sayısı, bir sıçanı düzeltmek için geçen süre, sıçanların elektroakupunktur tedavisi sırasındaki tepkisi, işlem sırasında düşen iğne sayısı ve operasyon sırasında meydana gelebilecek kaza sonucu ölümler gibi aşağıdaki faktörlere göre değerlendirin.
- İğnelerin çıkarılması
- Önceden ayarlanan süre tamamlandığında, elektroakupunktur aparatı otomatik olarak kapanacaktır. İğne sapına bağlı küçük klipsi çıkarın ve akupunktur iğnesini sıçanın derisinin altından dikkatlice çıkarın, böylece elektroakupunktur tedavi işlemi tamamlansın.
- Kayışları gevşetin, farenin ceketinin baş kapağını kaldırın ve fareyi kafesin üzerine yerleştirin. Sıçan daha sonra kendini ceketten serbest bırakmakta ve kafese bağımsız olarak girmekte özgür olacaktır (bkz. Video 4).
Video 2. Bel bölgesinde iğneleme akupunktur noktaları. Bu video, sıçanın ceket içindeki giydirilmesini, akupunktur iğnelerinin beldeki akupunktur noktalarına yerleştirilmesini ve ardından bir elektroakupunktur aparatının bağlanmasını kapsayan kapsamlı ve tutarlı prosedürü göstermektedir. Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Video 3. Karın ve alt ekstremitede iğneleme akupunktur noktaları. Bu video, sıçanın ceket içindeki giydirilmesini, akupunktur iğnelerinin karın ve alt ekstremitede bulunan akupunktur noktalarına yerleştirilmesini ve ardından bir elektroakupunktur aparatının bağlanmasını kapsayan kapsamlı ve tutarlı prosedürü göstermektedir. Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Video 4. Sıçan ceketinin çıkarılması. Bu video, ceketi fareden çıkarmanın geleneksel uygulamasını göstermektedir. Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu deneyde, elektroakupunktur tedavisi için toplam 12 sıçan seçildi ve fiksasyon yöntemi altındaki reaksiyonları gözlendi ( Tablo 2'de gösterildiği gibi). 12 sıçan arasında sadece 1 sıçan, 15 dakikalık elektroakupunktur iğnesi tutma süresi boyunca yoğun mücadele sergiledi. Güçlü hareketlerinin bir sonucu olarak, iğne yarıda çıktı ve toplam sıçan sayısının% 8.33'ünü oluşturdu. Bu sonuç, kullanılan fiksasyon yönteminin genellikle kayda değer bir stabilite ve güvenilirlik derecesi gösterdiğini göstermektedir. Bir sıçanın sergilediği mücadeleye rağmen, gruptaki sıçanların çoğunluğu tedavi boyunca uygun iğne fiksasyonunu sürdürdü. Ayrıca, elektroakupunktur tedavisi için sıçanları hareketsiz hale getirmek için bu yöntemin kullanıldığı 2 aylık deney süresi boyunca, sıçan ölümleri vakası kaydedilmemiştir, bu da sıçanlar için bu fiksasyon yönteminin güvenliğini düşündürmektedir.
Ek olarak, Tablo 3'te bu fiksasyon yöntemini literatürde bildirilen diğer dört yöntemle karşılaştırdık 9,10,13,14. Birincisi, stabilite açısından, yeni yapılmış bir sıçan tutucu fiksasyonu kullanan beşinci yöntemin biraz daha düşük stabilitesinin yanı sıra, diğer yöntemler nispeten güvenli bir fiksasyon elde etti. Zaman açısından, bu yöntemi kullanarak bir sıçanı sabitlemek için gereken ortalama süre, sıçan ceketi salıncak fiksasyon yönteminden daha kısaydı. Kalan yöntemler, ilgili makalelerinde fiksasyon için gereken süreyi belirtmedi; Bu nedenle, herhangi bir tartışma sağlanmamıştır. Bir fareyi sabitlemek için gereken personel sayısı açısından, hem bu yöntem hem de sıçan ceketi salıncak süspansiyon yöntemi, operasyonu tamamlamak için yalnızca bir kişiye ihtiyaç duyuyordu, böylece deneysel verimliliği artırdı. Bununla birlikte, açıkta kalan akupunktur noktası aralığı açısından, bu protokoldeki özel olarak tasarlanmış sıçan ceketi, vücuttaki çoğu akupunktur noktasını açığa çıkarma gereksinimlerini karşılayabilirken, salıncak süspansiyon yöntemindeki sıçan ceketi esas olarak uzuvları ortaya çıkarır. Fiksasyon için kullanılan malzemelerle ilgili olarak, bu yöntem için gerekli malzemelerin hem laboratuvar hem de günlük ortamlarda elde edilmesi nispeten kolaydır. Ayrıca, sıçanın fiksasyon sırasındaki pozisyonu açısından, doğal pozisyon, zorlanmış pozisyondan açıkça daha rahattır. Genel olarak, bu yöntem sıçan ceketi salınım süspansiyon sabitleme yöntemine benzer, ancak sıçan ceketinin kumaşında ve tasarımında iyileştirmeleri hedefleyerek vücut akupunktur noktalarının daha fazla açığa çıkmasına izin verir. Ayrıca, bir kumaş kayış üzerinde asılı olmakla karşılaştırıldığında, bu protokol, birden fazla sıçan aynı anda sabitleme rafında elektroakupunktur tedavisine tabi tutulduğunda, bireysel sıçanların diğer sıçanlar üzerinde şiddetli sallanmasının neden olduğu olumsuz etkileri azaltan daha sağlam çelik borular kullanır. Bu, deneysel verilerin kararlılığını ve güvenilirliğini sağlar.
Yukarıda belirtilen faktörler toplu olarak göz önüne alındığında, bu yaklaşım, sıçanlar için stabilite, verimlilik, satın alınabilirlik ve göreceli konforun faydalarını sergileyerek onu iğne yerleştirme fiksasyonu için değerli bir seçenek haline getirir.
| Fiksasyon yöntemi | Mücadele eden sıçanların sayısı | Mücadele eden sıçanların yüzdesi (%) | Tedavi sırasında iğne damlası olan sıçan sayısı | Tedavi sırasında iğne damlası olan sıçanların yüzdesi (%) | Operasyon sırasında ölen sıçan sayısı | Operasyon sırasında ölen sıçanların yüzdesi (%) |
| Ceket grubu ile bağlı süspansiyon sabitleme | 1 | 8.33 | 1 | 8.33 | 0 | 0 |
Tablo 2. Elektroakupunktur tedavisi sırasında sabit sıçanların yanıtı (n = 12).
| Seri Numarası | Fiksasyon yöntemi | Sıçanların sabitlenmesi stabil ve güvenli midir? | Bir fareyi düzeltmek için gereken süre | Bir fareyi tamir etmek için gereken personel sayısı | Maruz kalabilecek akupunktur noktalarının yeri ve aralığı | Demirbaşların veya malzemelerin erişilebilirliği | Sıçanlar için sabit yöntemlerin rahatlığı: doğal veya zorunlu pozisyon | Referanslar | |||||||||||||||
| 1 | Deneyimizde, ceket ile bağlı süspansiyon fiksasyonu | √ | 50-63 Saniye | 1 | Karın, baş, sırt ve bel, uzuvlar | Hazır | Doğal pozisyon | ||||||||||||||||
| 2 | Shu-Mu akupunktur noktası kombinasyonu için akupunktur ve yakı için bir sabitleme çerçevesi (alarm noktalarını geri taşıma noktalarıyla birleştiren bir akupunktur noktası seçimi) | √ | / | / | Baş, uzuvlar, sırt ve bel | Sabitleme çerçevesinin özelleştirilmesi gerekiyor | Zorla pozisyon | 9 | |||||||||||||||
| 3 | Ceket ile bağlanmış sallanan sıçanların fiksasyon yöntemi | √ | 85-93 Saniye | 1 | Uzuv parçaları | Hazır | Doğal pozisyon | 10 | |||||||||||||||
| 4 | Eski bir kafes kafes kapağından yapılmış bir sıçan sabitleme cihazı | √ | / | ≥2 | Akupunktur noktası aralığı sınırlı değildir | Hazır | Zorla pozisyon | 13 | |||||||||||||||
| 5 | Yeni yapılmış bir fare tutucu | Sabitlemeden sonra, sıçanların ön ve arka uzuvları hala belirli bir hareket kabiliyetine sahiptir. Ayrıca, sıçanlarda boyun sabitleme çubuğunun kesişme noktasının çok yüksek olması ve sıçanlarda boğulmaya yol açması riski vardır. Çok düşükse, sıçanların kafa sabitlemesi kararsız olabilir. | / | / | Akupunktur noktası aralığı sınırlı değildir | Sıçan tutucu özel özelleştirme gerektirir | Doğal pozisyon | 14 | |||||||||||||||
Tablo 3. Sıçan akupunktur ve yakı deneyinde farklı fiksasyon yöntemlerinin karşılaştırma sonuçları.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Elektroakupunkturun bilişsel bozukluk16,17, miyokard hasarı18 ve inflamatuar ağrı 19 gibi çeşitli hastalıklar üzerinde iyi terapötik etkileri olduğu gösterilmiştir. Etki mekanizmasını anlamak için, öncelikle fareler kullanılarak hayvan deneyleri yapılmıştır. İşlemler sırasında hayvanların sabitlenmesi, doğru sonuçlar için çok önemlidir. Birçok çalışmada hayvan anestezisini takiben elektroakupunktur uygulanmış olsa da, bu uygulama beyin fonksiyonunu engelleyebilir ve deneysel doğruluğu tehlikeye atabilir. Ayrıca, uzun süreli anestezi uygulaması iğneleme prosedürünü uzatır ve hayvanlar için ölüm olasılığını artırır. Bununla birlikte, bildirilen anestezik olmayan fiksasyon yöntemlerinin de Tablo 3'te dikkatlice tartışılan sınırlamaları vardır.
Bu çalışma, yükseltilmiş bir sabitleme rafı ile birlikte ısmarlama bir sıçan ceketi tanıtan yeni bir protokol sunmaktadır. Bu protokolün en önemli yönü, sıçanların vücut şekillerine göre uygun boyutlarda sıçan ceketleri oluşturmayı ve bunları iğnelenecek akupunktur noktalarının özel konumuna göre daha da özelleştirmeyi içerir. Sıçan ceketini takmak için yararlı bir ipucu, sıçanın karanlığa ve oyuğa olan doğal eğilimini kullanarak onu başlığa girmeye teşvik etmektir. Sıçanın kafası sabitlendikten sonra, sonraki sabitleme prosedürleri çok daha basit hale gelir.
Uyarlanabilir eğitimin ardından, sıçanlar bu tekniği kullanırken minimum rahatsızlık gösterdiler. Kumaşlar, S-şekilli kancalar, demir çubuklar ve diğer malzemeler gibi gerekli ekipman malzemeleri kolayca erişilebilir ve uygun maliyetlidir, böylece deney masraflarında bir azalma sağlanır. Diğer bir avantajı ise sıçan ceket kayışlarının sıkılığının sıçanın boyutuna göre ayarlanabilmesi, esnek ve kontrol edilebilir hale getirilmesidir. Tüm sabitleme işlemi bağımsız olarak bir kişi tarafından tamamlanabilir ve cihazın yükseltilmiş konfigürasyonu, araştırmacıların bir grup küçük hayvanı aynı anda tedavi etmesine olanak tanır, böylece deneysel verimliliği önemli ölçüde artırır, tüm deney için harcanan zamanı azaltır ve aynı hayvan grubu arasındaki tutarsızlıkları en aza indirir. Ayrıca, yükseltilmiş platform, doğrudan düz bir zemine yerleştirilebildiği için bir masa ihtiyacını ortadan kaldırır ve böylece mekansal kullanımı optimize eder. Ek olarak, bu tasarımlar kobaylar gibi diğer deney hayvanlarında kullanılmak üzere değiştirilebilir ve genişletilebilir ve ayrıca yakı tedavisinde de etkili bir şekilde kullanılabilir.
Bu yaklaşımın potansiyel bir kısıtlaması, araştırmacıların teknikte yüksek düzeyde yeterliliğe sahip olmaları ve ayrıca her bir sıçanın vücut uzunluğuna ve uzuv aralığına göre uyarlanmış çeşitli boyutlarda sıçan ceketleri oluşturma ihtiyacıdır. Ek olarak, bazı sıçanların, sıçan ceketine ve süspansiyon fiksasyonuna ilk maruz kaldıklarında hafif rahatsızlık ve stres yaşamaları kaçınılmazdır. Sonuç olarak, elektroakupunktur tedavisi gören sıçanlar için uyarlanabilir eğitim uygulamak zorunlu hale gelir. Ayrıca, bu sıçanları prosedür sırasında dikkatli bir şekilde ele almak, ajitasyon veya uyumsuzluk durumlarında onları yatıştırmak ve sakinleştirmek için hafifçe okşamak zorunludur. Kaçınılmaz stresin sıçanların fiziksel durumu ve davranışsal deneyleri üzerindeki etkisini en aza indirmek için, kontrol grubunun (boş bir kontrol grubu ve bir model kontrol grubu dahil) aynı miktarda elleçleme, sıçan ceketi bağlama ve elektroakupunktur tedavi grubu ile aynı anda yüksek fiksasyona tabi tutulması gerektiğini belirtmekte fayda var. elektroakupunktur tedavisi görmeseler bile.
Özetle, bu fiksasyon yöntemi bize fareleri hareketsiz hale getirmek için uygun ve etkili bir seçenek sunar, bu da istikrarlı ve pürüzsüz akupunktur işlemi ve iğne tutma işlemi için güvenilir bir garanti sağlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Tüm yazarlar potansiyel çıkar çatışması olmadığını beyan etmişlerdir.
Acknowledgments
Yazarlar, bu belgede Şekil 2'yi oluşturmak için kullanılan materyali yetkili lisans kimliği: URUUO5699e ile sağladığı için Araştırmacılar Evi'nin Figdraw bilimsel araştırma çizim platformuna şükranlarını sunarlar. Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81873380, 82074566), Hubei Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (2022CFCO43) ve Ulusal Geleneksel Çin Tıbbı İdaresi'nin Ulusal Ünlü Geleneksel Çin Tıbbı Miras Stüdyosu İnşaat Projesi ([2022] No.5, [2022] No.75) tarafından sağlanan hibelerden destek almıştır.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 75% alcohol | Shandong Lircon medical technology co., ltd | 2002-0059 | Disinfection |
| acupuncture needles | Beijing Luo ya shan chuan medical equipment co., Ltd. | needling | |
| Adult Sprague-Dawley (SD) rats | Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd. | SCXK 2020-0001 | The recipient subjected to fixation |
| an elevated fixation rack | Taizhou shiai instruments and equipments for scientific and teaching research Co., ltd | / | Fix rats |
| Hans electronic acupuncture apparatus | Beijing Huayun Ante Science and Technology Co. Ltd. | HANS-200A | electroacupuncture |
| Medical cotton ball | Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd. | 20172142357 | Disinfection |
| Pet electric clipper | Fenghua Xikou Lubao Knives & Scissors Electrical Appliance Factory | / | Shave the hair of rats |
| Tweezers | Qingdao Schultz Biotechnology Co., ltd | Pinch cotton balls |
References
- Liu, Z., et al. Effect of Electroacupuncture on Urinary Leakage Among Women With Stress Urinary Incontinence: A Randomized Clinical Trial. The Journal of the American Medical Association. 317 (24), 2493-2501 (2017).
- Tsuei, J. J.
- Liu, S., et al. Somatotopic Organization and Intensity Dependence in Driving Distinct NPY-Expressing Sympathetic Pathways by Electroacupuncture. Neuron. 108 (3), 436-450 (2020).
- Liu, S., et al. A neuroanatomical basis for electroacupuncture to drive the vagal-adrenal axis. Nature. 598 (7882), 641-645 (2021).
- Li, X., Wei, W., Wang, Y., Wang, Q., Liu, Z. Global Trend in the Research and Development of Acupuncture Treatment on Parkinson's Disease From 2000 to 2021: A Bibliometric Analysis. Frontiers In Neurology. 13, 906317 (2022).
- Jiang, S., et al. Application Progress of fixation methods for rodents under non anesthesia in acupuncture and moxibustion experiments domestically and abroad. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 40 (12), 1509-1514 (2021).
- Jiang, H. Z., et al. Fixation method in the study of acupuncture intervention on rats. Journal of Shanxi College of Traditional Chinese Medicine. 20 (3), 169-171 (2019).
- Wang, Y., Ning, Y., Wang, P. Y., Yang, Y. Q. Method of Placing a Rat on an Elevated Platform for Acupuncture. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 31 (5), 289-292 (2012).
- Wang, F., Xiong, J., Zeng, F., He, Z. X. A fixation frame for acupuncture and moxibustion of Shu-Mu acupoint combination in rats. Acupuncture Research. 47 (10), 938-940 (2022).
- Tu, S., P, C., Y, Y. H. Fixation method for needle warming moxibustion treatment on swinging rats bound with coat. Chinese Journal of Comparative Medicine. 31 (5), 128-132 (2021).
- Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Influence of anesthetic agent, depth of anesthesia and body temperature on cardiovascular functional parameters in the rat. Laboratory Animals. 48 (1), 6-14 (2014).
- Kiyatkin, E. A., Brown, P. L. Brain and body temperature homeostasis during sodium pentobarbital anesthesia with and without body warming in rats. Physiology & Behavior. 84 (4), 563-570 (2005).
- He, C., Zhang, C., Zhou, S., Fan, Y. Using old meshy cage cover to make a rat fixating device for acupuncture study. Acupuncture Research. 46 (4), 348-350 (2021).
- Li, Y., Lin, N., Huang, Y., Xue, X., Liu, Q. A Newly-made Rat Holder for Convenient Acupuncture Needle Insertion. Acupuncture Research. 41 (5), 466-468 (2016).
- Bielitzki, J. T., Barbee, R. W., Garber, J. Guide for the care and use of laboratory animals. 85 (3), National Academies Press (U.S.). NIH Publication No 85-23(rev) 963-965 (2011).
- Zheng, X., et al. Electroacupuncture ameliorates beta-amyloid pathology and cognitive impairment in Alzheimer disease via a novel mechanism involving activation of TFEB (transcription factor EB). Autophagy. 17 (11), 3833-3847 (2021).
- Su, X., et al. Effectiveness and Safety of Acupuncture for Vascular Cognitive Impairment: A Systematic Review and Meta-Analysis. Frontiers In Aging Neuroscience. 13, 692508 (2021).
- Wang, Q., et al. Efficacy of electroacupuncture pretreatment for myocardial injury in patients undergoing percutaneous coronary intervention: A randomized clinical trial with a 2-year follow-up. International Journal of Cardiology. 194, 28-35 (2015).
- Zhang, R., Lao, L., Ren, K., Berman, B. M. Mechanisms of acupuncture-electroacupuncture on persistent pain. Anesthesiology. 120 (2), 482-503 (2014).
