Summary
هنا ، نقدم طريقة تثبيت تعليق محسنة باستخدام سترة الفئران لشل حركة الفئران بشكل فعال أثناء تجارب الوخز بالإبر. علاوة على ذلك ، يتم توضيح هيكل وتطبيق جهاز التثبيت هذا ، وكذلك التعليمات والتقييم لاستخدامه في العلاج بالوخز بالإبر الكهربائية.
Abstract
في أبحاث الوخز بالإبر التجريبية الأساسية ، تستخدم الفئران بشكل شائع كحيوانات مختبرية. ومع ذلك ، من الصعب عليهم الحفاظ على وضع ثابت. أثناء إجراءات الوخز بالإبر الكهربائية ، يعد الشلل المناسب للفئران أمرا ضروريا. يتم حاليا استخدام طرق مختلفة لتثبيت الفئران ، بما في ذلك تثبيت التخدير ، والتثبيت عالي المنصة ، وتثبيت الربط ، والتثبيت بمعطف فأر عصامي. ومع ذلك ، فإن هذه الأساليب لها حدودها ، والتي قد تؤثر على كفاءة التجربة وقابليتها للتشغيل إلى حد ما. يقدم هذا البروتوكول طريقة لتعليق الفئران وتثبيتها باستخدام ملابس الفئران. أولا ، ترتدي الفئران سترات الفئران التي تتناسب مع شكل أجسامها ، مستفيدة من تفضيلها للظلام والختبئ. يمكن بعد ذلك إجراء عملية الوخز بالإبر بعد أن ترتدي الفئران ملابس الفئران. عند تعليقها ، تكون الفئران ثابتة نسبيا ، حيث لا تستطيع أطرافها التحرك. لا توفر طريقة التثبيت هذه فوائد اقتصادية وسهلة الاستخدام فحسب ، بل تضمن أيضا تثبيتا مستقرا وموثوقا للفئران في وضع مريح بشكل مريح. كما أنه يقلل بشكل فعال من استهلاك الوقت والمساحة التجريبية وموارد القوى العاملة. بالإضافة إلى ذلك ، تسمح هذه الطريقة بالتعرض لمعظم نقاط الوخز بالإبر المستخدمة في الوخز بالإبر في الفئران. تركز هذه المقالة بشكل أساسي على تكوين الجهاز ، بما في ذلك سترة الفئران المصممة خصيصا ، ورف التثبيت المرتفع ، وهياكل التوصيل الخاصة بها. بالإضافة إلى ذلك ، سيتم تقديم مثال توضيحي لتوضيح تطبيق طريقة تثبيت التعليق القائمة على ملابس الفئران في إجراءات الوخز بالإبر الكهربائية للفئران.
Introduction
الوخز بالإبر هو علاج تقليدي يتميز بالوخز بالإبر في نقاط وخز محددة أو أوضاع أخرى للوقاية من الأمراض وعلاجها. يجمع الوخز بالإبر الكهربائية بين الإبر الخيطية والتحفيز الكهربائي1 ، مما يسمح بالتحكم الدقيق في كمية التحفيز عن طريق ضبط المعلمات ذات الصلة ، وتعزيز توحيد علاج الوخز بالإبر2. في السنوات الأخيرة ، استمرت الأبحاث حول آليات الوخز بالإبر الكهربائية في التوسع والتعميق 3,4 ، مما أدى إلى زيادة سنوية في الدراسات التي تركز على آليات الوخز بالإبر الكهربائية5.
في الأبحاث الأساسية حول الوخز بالإبر الكهربائية ، الفئران هي الحيوانات الأكثر استخداما. أثناء العلاج بالوخز بالإبر الكهربائية ، يجب أن يظل المتلقي ثابتا لضمان إجراء سلس. على عكس التجارب السريرية مع البشر ، لا يمكن للحيوانات الصغيرة المستخدمة في التجارب على الحيوانات اتباع الأوامر بوعي خلال إجراءات الوخز بالإبر الكهربائية التي تستغرق 15-30 دقيقة. وهذا يمثل للباحثين تحديا أساسيا يتمثل في تحقيق تثبيت مستقر وموثوق. يمكن أن يؤدي التثبيت غير السليم إلى مشاعر سلبية مثل القلق والاكتئاب والخوف لدى الحيوانات6 ، مما لا يزيد فقط من خطر إصابة الفئران وفرصة التعرض للعض لموظفي التجربة ولكنه يؤثر أيضا على استقرار وإقناع نتائج البحث.
في الدراسات السابقة ، استخدم الباحثون في كثير من الأحيان تثبيت التخدير7 ، أو تثبيت المنصة العالية8 ، أو تثبيت الربط6،9 ، أو تثبيت معطف الفئران10 قبل عمليات الوخز بالإبر أو الوخز بالإبر الكهربائية. ومع ذلك ، نظرا لتأثيرات التخدير على الجسم11 ووظيفة المخ12 ، وبالنظر إلى أن الوخز بالإبر يتم إجراؤه على المرضى الواعين في الحالات السريرية ، فقد يؤثر التخدير على نتائج البحث إلى حد ما. لذلك ، بالمقارنة مع تثبيت التخدير ، فإن التثبيت المريح للفئران في حالة اليقظة هو خيار أفضل.
ومع ذلك ، في الحالة غير المخدرة ، تمتلك طرق التثبيت المختلفة أيضا حدودها الخاصة ، بما في ذلك التعرض المقيد لنقاط الوخز بسبب تغطية معطف الفئران على الفئران10 ، وضرورة وجود شخصين على الأقل لإجراء العملية 13 ، أو حجم المثبت غير القابل للتعديل14 ، أو الحالة المجهدة للفئران في وضع قسري6. لمعالجة هذه المشكلات الفنية ، قمنا بتصميم سترة فأر ورف تثبيت مناسب للتلاعب بالوخز بالإبر في معظم أجزاء جسم الفئران. هذا يمكن أن يساعد الباحثين على تنفيذ إجراءات الوخز بالإبر بكفاءة مع الفئران.
الأساس المنطقي لهذا البروتوكول هو كما يلي: أولا ، يستفيد غطاء الرأس المغلق على سترة الفئران من ميل الفئران الطبيعي للظلام والحفر ، وبالتالي تقييد نطاق أنشطتها. ثانيا ، توفر حبال الربط بالقرب من مفاصل أطراف الفئران ضبط النفس للضغط الجسدي ، مما يفرض قيودا معينة على تحركاتها. ومع ذلك ، لا تزال الفئران قادرة على القفز والتحرك أفقيا حتى أثناء ارتداء السترة. أخيرا ، نظرا لأن الفئران لا يمكنها لمس الأرض بدون نقطة قوة ثابتة عند تعليقها ، فقد أضفنا جهاز تثبيت معلق إلى سترة الفئران ، مما زاد من تقييد تحركاتها وضمان الاحتفاظ بالإبرة. يظهر تكوين جهاز التثبيت في الشكل 1.
الشكل 1: رسم تخطيطي لسترة الفئران وتثبيت التعليق. (أ) المظهر العام لسترة الجرذ في منظر مسطح. (ب) منظر ثلاثي الأبعاد لسترة الفئران. (ج) سترة فأر مصممة خصيصا مع شق بالقرب من نقاط الوخز في الرأس والخصر الخلفي. (د) رسم توضيحي لعدة فئران معلقة في وقت واحد على الرف المرتفع. 1: عرض النسيج العام. 2: منفذ الأطراف الأمامية. 3: منفذ طرف هند. 4: ربط الحبل. 5: تجويف تشكل بعد خياطة. 6: شق لفضح نقاط الوخز في الرأس. 7: شق لفضح نقاط الوخز في الظهر والخصر. 8: موقف خياطة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
التزمت جميع الإجراءات التي أجريت على الفئران في هذه الدراسة بالمعيار الوطني لرعاية المختبر وإرشادات مراجعة الأخلاقيات (2018) المعتمدة رسميا من قبل جمهورية الصين الشعبية ودليل رعاية واستخدام المختبر من مطبعةالأكاديميات الوطنية 15. يتكون هذا البروتوكول من ثلاث خطوات رئيسية. أولا ، تم تصميم سترات الفئران وتركيبها بناء على أشكال الجسم الفردية للفئران ذات الأوزان المختلفة. بعد ذلك ، يتم إجراء التلاعب بالوخز بالإبر باتباع الإجراءات القياسية. أخيرا ، يتم تعليق الفئران في ستراتها بينما تظل الإبر في مكانها لاستيعاب الحاجة إلى التدخلات المتزامنة بين الفئران داخل نفس المجموعة.
1. التحضير قبل الوخز بالإبر
- إنتاج سترة الفئران
- وزن الفئران وقياس شكل أجسامهم قبل صنع ستراتهم. للتحقق من ملاءمة هذا البروتوكول للفئران ذات الأوزان المختلفة ، حدد الفئران التي تزن 220 جم و 300 جم و 400 جم و 520 جم لإجراء قياسات مستقلة لأبعادها الجسدية ، بما في ذلك القياسات من a إلى f ، كما هو موضح في الشكل 2.
ملاحظة: يتم أيضا عرض العلاقة بين النسب الجسدية للفئران وأحجام السترات المقابلة لها في الشكل 2. يتم تسجيل معلمات طول الجسم ذات الصلة للفئران ذات الأوزان المختلفة في الجدول 1. - قطع قطعة مستطيلة من القماش السميك الداكن لصنع سترة الفئران. استخدم القماش بعرض مكشوف يساوي المحيط المقاس حول الجزء السميك من بطن الفئران. طول النسيج يساوي المسافة من طرف أنف الجرذ إلى قاعدة ذيله (انظر الشكل 2).
- قم بطي القماش إلى نصفين وقطع الزاوية اليسرى العليا بزاوية حوالي 45 درجة -65 درجة لتشكيل شبه منحرف يمين (انظر الشكل 3 أ).
- خياطة الجانبين على اليسار بإحكام بخيط القطن. راجع الشكل 1B والشكل 3B للحصول على إرشادات.
- اقطع فتحتين صغيرتين ، واحدة على كل جانب من القماش ، حتى تمر الأطراف العلوية والسفلية للفأر (انظر الشكل 3C). تحدد المسافة بين الطرفين العلويين التباعد بين الثقوب العلوية لسترة الفئران. تحدد المسافة بين الطرفين السفليين التباعد بين الثقوب السفلية لسترة الفئران.
- استخدم المسافة الطولية بين إبط الجرذ ومقدمة الحرقفة لتكون بمثابة تباعد بين الثقوب العلوية والسفلية لسترة الفئران. استخدم محيط مفصل الكتف لتحديد محيط الثقب العلوي في سترة الفئران. استخدم محيط مفصل الورك لمحيط الفتحة السفلية في سترة الفئران.
- بجانب كل ثقب ، قم بخياطة حزام قماش طويل يمكن عبوره ولفه بإحكام حول الجسم من الطرف الافتتاحي للسترة لإصلاح الفأر.
- وزن الفئران وقياس شكل أجسامهم قبل صنع ستراتهم. للتحقق من ملاءمة هذا البروتوكول للفئران ذات الأوزان المختلفة ، حدد الفئران التي تزن 220 جم و 300 جم و 400 جم و 520 جم لإجراء قياسات مستقلة لأبعادها الجسدية ، بما في ذلك القياسات من a إلى f ، كما هو موضح في الشكل 2.
- طريقة ارتداء سترة الفئران
- ارتداء القفازات قبل الشروع في ارتداء الفئران في سترة. ابدأ بإمساك الجزء الأوسط والخلفي من سترة الفئران بيد واحدة على الطاولة. من ناحية أخرى ، أمسك ذيل الجرذ من قفص التغذية وضعه برفق في السترة.
- عندما يتحرك الجرذ للأمام ، سيصل رأسه إلى غطاء الرأس للسترة. في هذه المرحلة ، استخدم كلتا يديك لسحب الأطراف العلوية اليسرى واليمنى بعناية من الثقوب الموجودة في السترة.
- خذ حبل الربط من الطرف الافتتاحي للسترة ، واعبره من اليسار إلى اليمين ، ولفه بإحكام حول جذع الفأر. اربطه بإحكام على الجانب الآخر من الجذع لضمان التثبيت المناسب. بعد ضبط النفس من الأطراف العلوية للفأر ، كرر نفس الإجراء لإصلاح أطرافه السفلية.
- اتخذ الاحتياطات اللازمة لتجنب التعرض للعض أو الخدش من مخالب الفئران عند سحب أطرافه من ثقوب السترة. تأكد من ضبط شد الحبل بشكل مناسب ، أي ليس ضيقا جدا بحيث لا يسبب نقص تروية الأطراف المحلية ونقص الأكسجة في الفئران ، وليس فضفاضا جدا ، مما يسمح للفأر بالهروب بسهولة (انظر الفيديو 1).
- رف تثبيت وخطافات حديدية على شكل حرف S
- يتكون رف التثبيت من صينيتين من الحديد الثقيل (طولها 24 سم وعرضها 12 سم وارتفاعها 2 سم) وعمود حديدي (طوله 60 سم) ملحوم بإحكام على كل صينية. ثبت عصا حديدية صلبة (طولها 145 سم) على نفس الارتفاع على عمودين حديديين باستخدام هيكل توصيل لولبي يمكن ضبطه وصيانته على ارتفاع ثابت (انظر الشكل 4 أ).
- لتوصيل الجرذ الذي يرتدي السترة بالعصا الحديدية ، استخدم الخطافات على شكل حرف S (قطرها 11 سم). لف أحد طرفي الخطاف حول الشريط الموجود على السترة بينما يتم تعليق الطرف الآخر على العصا الحديدية. استخدم خطافين على شكل حرف S لتثبيت الجرذ على العصا. يرجى الرجوع إلى الشكل 1D والشكل 4B للاطلاع على الهيكل العام.
الشكل 2: الرسم البياني المقابل لشكل جسم الجرذ وحجم سترة الفئران المطابق. في الرسم البياني ، تمثل المعلمة a المسافة المستعرضة في الجزء الخلفي من المفصل بين الأطراف العلوية وجذع الفأر. يتم استخدام هذه القيمة كقياس تباعد بين الثقوب المخترقة للأطراف العلوية لسترة الفئران. وبالمثل ، تمثل المعلمة b المسافة المستعرضة على الظهر حيث تتصل الأطراف السفلية الثنائية للفأر بالجذع. يحدد هذا القياس تباعد الثقوب المخترقة للأطراف السفلية لسترة الفئران. تشير المعلمة c إلى محيط الجزء السميك من بطن الجرذ ، والذي يمكن استخدامه كقياس عرض لنسيج سترة الفئران. تمثل المعلمة d المسافة من إبط الجرذ إلى مقدمة الحرقفة ، مما يحدد المسافة الطولية بين الثقوب العلوية والسفلية للسترة. تتوافق المعلمة e مع المسافة الطولية من طرف أنف الجرذ إلى قاعدة ذيله ، حيث تعمل كقياس لطول قماش سترة الفئران. تشير المعلمة f إلى محيط المفصل الذي يربط الطرف العلوي وجذع الفئران ، حيث يعمل كمحيط للفتحة التي تمر من خلالها الأطراف العلوية. تمثل المعلمة g محيط المفصل الذي يربط الأطراف السفلية وجذع الفئران ، مما يحدد محيط الفتحة التي تمر من خلالها الأطراف السفلية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
| وزن الجسم (جم) | معلمات شكل الجسم (سم) | ||||||
| a | b | c | d | e | f | g | |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
الجدول 1. نتائج قياس معلمات شكل الجسم للفئران ذات أوزان الجسم المختلفة.
الشكل 3: رسم تخطيطي يوضح المظهر الجسدي لسترة الفئران واستخدامها . (أ) منظر خارجي لسترة الفئران. يشبه شكل سترة الجرذ شبه منحرف بزاوية قائمة ، مع فتحات منفصلة على الجانبين الأيسر والأيمن لمرور الأطراف العلوية والسفلية للفأر. (ب) منظر خارجي مكشوف لسترة الفئران. يؤدي إغلاق غطاء الرأس إلى إنشاء تجويف شبه مغلق ، والذي يعمل كعنصر حاسم لإغراء الفئران بالدخول. (ج) منظر جانبي لفأر يرتدي سترة. بمجرد مرور أطراف الفئران عبر الفتحات الموجودة في الملابس ، يتم عبور الأشرطة على السطح البطني للجذع وتثبيتها بإحكام في الخلف بتوتر مناسب. هذا يضمن أن الفئران يجمد نسبيا. د: منظر بطن لفأر يرتدي سترة فأر. يكشف السطح البطني للسترة جلد بطن الفئران ، مما يتيح سهولة الوصول إلى الوخز بالإبر في النقاط البطنية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
فيديو 1: ارتداء سترة الفئران. يظهر هذا الفيديو عملية نموذجية لخلع الملابس الفئران في السترة. الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الفيديو.
الشكل 4: رسم تخطيطي يصور المظهر المادي واستخدام رف التثبيت المرتفع. (أ) رف تثبيت مرتفع. يتكون هذا الرف بشكل أساسي من عمودين حديديين عموديين (بطول 60 سم) ملحومين بكل صينية ، إلى جانب عصا حديدية أفقية طويلة (طولها 145 سم) موضوعة بالتوازي مع الأرض. تستخدم البراغي لتأمين العصا الأفقية بنفس ارتفاع الأعمدة الرأسية. (ب) تعليق الفئران على رف التثبيت. يتم تثبيت الفئران التي ترتدي سترات الفئران بإحكام على رف التثبيت باستخدام خطافين على شكل حرف S لكل فأر. (ج) العلاج المتزامن بالوخز بالإبر الكهربائية في فئران متعددة. لمنع أي تداخل محتمل ناتج عن حركة الذيل ، كان من الضروري الحفاظ على التباعد المناسب بين الفئران ، أي ما يعادل طول ذيل الفئران. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
2. إجراء الوخز بالإبر الكهربائية
- التحضير الروتيني
- ضع رف التثبيت على سطح مكتب أفقي أو أرضي.
- قبل إجراء الوخز بالإبر ، قم بإزالة الفراء حول نقاط الوخز باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية لضمان التعرض الكامل. عندما تقع نقطة الوخز المراد ثقبها على بطن الجرذ ، مثل Guanyuan (CV4 ، حوالي 25 مم تحت السرة) ، قم بتقصير عرض ملابس الفئران بشكل مناسب لكشف نقاط الوخز في البطن.
- حدد موقع نقطة الوخز من الفجوة الموجودة على خط الوسط للبطن والتي لا تغطيها سترة الفئران (انظر الشكل 3 د) ثم احقن الإبرة.
- عندما تكون نقاط الوخز المراد ثقبها على رأس الجرذ ، مثل Baihui (GV20 ، الموجود في منتصف العظم الجداري) ، قم بعمل شق صغير في الموضع المقابل على الرأس لكشف الجلد بالكامل حول GV20 (انظر الشكل 1C).
- عند الوخز بالإبر على أطراف الفئران ، مثل Neiguan (PC6 ، على الجانب الداخلي من الطرف الأمامي ، بين الغرز الشعاعية والزندية على بعد حوالي 3 مم من مفصل الرسغ) في الطرف العلوي أو Zusanli (ST36 ، على الجانب الخلفي الجانبي من مفصل الركبة ، حوالي 2 مم تحت رأس الشظية) في الطرف السفلي ، نظرا للتعرض الواضح لنقاط الوخز بالإبر ، استخدم إحدى اليدين للمساعدة في تثبيت الطرف ، بينما يمكن للآخر إجراء عملية الوخز بالإبر مباشرة.
- عندما تقع نقطة الوخز على ظهر أو خصر الجرذ ، مثل Shenshu (BL23 ، أسفل الفقرات القطنية الثانية ، على بعد 6 مم من خط الوسط في الظهر) ، قم بقطع فتحة بعرض 2 سم تقريبا في وسط سترة الجرذ لفضح جلد الموقع المقابل بالكامل (انظر الشكل 1C).
- اللباس الفئران في سترة. بعد تطهير الجلد المحلي لنقاط الوخز بالإبر باستخدام مسحات الكحول ، ابدأ إجراء الوخز بالإبر.
- تقنية الوخز بالإبر: حدد موقع نقطة الوخز بدقة. أدخل إبرة الوخز بالإبر المعقمة التي تستخدم لمرة واحدة (0.16 مم × 7 مم) في نقطة الوخز بالإبر للفأر على العمق المناسب.
- عملية الوخز بالإبر الكهربائية
- لف سلك القطب حول قضيب الحديد الأفقي. تقلل هذه الخطوة من خطر سقوط الإبرة بسبب قوة الجاذبية التي تعمل على مشبك الوخز بالإبر الكهربائية. بعد ذلك ، قم بتوصيل نهاية سلك القطب بإحكام بمقبض الإبرة.
- قم بتشغيل الطاقة وحدد معلمات التردد والتيار والوقت المناسبة. في هذه التجربة ، تم ضبط المعلمات على 2 هرتز و 1 مللي أمبير و 15 دقيقة. بمجرد ضبط المعلمات ، ابدأ عملية علاج الوخز بالإبر الكهربائية (انظر الفيديو 2 والفيديو 3).
- الوخز بالإبر الكهربائية في وقت واحد على الفئران: أثناء العلاج ، قم بتعليق الفئران في نفس المجموعة معا على العصا الحديدية باستخدام خطافات على شكل حرف S واتركها تخضع لتدخل الوخز بالإبر الكهربائية في وقت واحد.
- ملاحظة: يجب ألا تكون العصا الحديدية قوية فحسب ، بل يجب أن تكون طويلة بما يكفي لعلاج مجموعة من الفئران في نفس الوقت. في هذه التجربة ، مع ضمان التباعد المناسب وعدم التداخل بين الفئران ، يمكن معالجة 3-4 فئران في وقت واحد (انظر الشكل 4C).
- مراقبة استجابات الفئران أثناء العلاج بالوخز بالإبر الكهربائية: تقييم مدى ملاءمة طريقة التثبيت هذه للوخز بالإبر الكهربائية في الفئران بناء على العوامل التالية ، مثل عدد الأفراد المطلوبين لإكمال العملية ، والوقت المستغرق لإصلاح الفئران ، واستجابة الفئران أثناء العلاج بالوخز بالإبر الكهربائية ، وعدد الإبر التي تم إسقاطها أثناء الإجراء ، وأي وفيات عرضية قد تحدث أثناء العملية.
- إزالة الإبر
- بمجرد اكتمال الوقت المحدد مسبقا ، سيتم إيقاف تشغيل جهاز الوخز بالإبر الكهربائية تلقائيا. قم بإزالة المشبك الصغير المتصل بمقبض الإبرة وقم بإزالة إبرة الوخز بالإبر بعناية من تحت جلد الفئران ، وبالتالي اختتام عملية علاج الوخز بالإبر الكهربائية.
- قم بفك الأشرطة ، وارفع غطاء رأس سترة الجرذ ، وضع الجرذ فوق القفص. سيكون الجرذ بعد ذلك حرا في تحرير نفسه من الغلاف ودخول القفص بشكل مستقل (انظر الفيديو 4).
فيديو 2. نقاط الوخز بالإبر في منطقة أسفل الظهر. يوضح هذا الفيديو الإجراء الشامل والمتماسك الذي يشمل ارتداء ملابس الجرذ في السترة ، وإدخال إبر الوخز بالإبر في نقاط الوخز بالإبر عند الخصر ، والتوصيل اللاحق لجهاز الوخز بالإبر الكهربائية. الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الفيديو.
فيديو 3. نقاط الوخز بالإبر في البطن والطرف السفلي. يوضح هذا الفيديو الإجراء الشامل والمتماسك الذي يشمل ارتداء ملابس الفئران في الغلاف ، وإدخال إبر الوخز بالإبر في نقاط الوخز بالإبر الموجودة في البطن والطرف السفلي ، والتوصيل اللاحق لجهاز الوخز بالإبر الكهربائية. الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الفيديو.
فيديو 4. إزالة سترة الفئران. يعرض هذا الفيديو الممارسة المعتادة لإزالة السترة من الفئران. الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الفيديو.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
في هذه التجربة ، تم اختيار ما مجموعه 12 فأرا للعلاج بالوخز بالإبر الكهربائية ، ولوحظت تفاعلاتها تحت طريقة التثبيت (كما هو موضح في الجدول 2). من بين الفئران ال 12 ، أظهر فأر واحد فقط صراعا شديدا خلال فترة الاحتفاظ بإبرة الوخز بالإبر الكهربائية لمدة 15 دقيقة. نتيجة لحركاتها القوية ، خرجت الإبرة في منتصف الطريق ، وهو ما يمثل 8.33 ٪ من إجمالي عدد الفئران. تشير هذه النتيجة إلى أن طريقة التثبيت المستخدمة تظهر بشكل عام درجة ملحوظة من الاستقرار والموثوقية. على الرغم من النضال الذي أظهره فأر واحد ، حافظت غالبية الفئران في المجموعة على تثبيت الإبرة المناسب طوال فترة العلاج. علاوة على ذلك ، خلال المدة التجريبية لمدة 2 شهر حيث تم استخدام هذه الطريقة لشل حركة الفئران لعلاج الوخز بالإبر الكهربائية ، لم يتم تسجيل أي حالات لوفيات الفئران ، مما يشير إلى سلامة طريقة التثبيت هذه للفئران.
بالإضافة إلى ذلك ، في الجدول 3 ، قارنا طريقة التثبيت هذه بأربع طرق أخرى تم الإبلاغ عنها في الأدبيات9،10،13،14. أولا ، من حيث الاستقرار ، بصرف النظر عن الاستقرار الأدنى قليلا للطريقة الخامسة باستخدام تثبيت حامل الفئران المصنوع حديثا ، حققت الطرق الأخرى تثبيتا آمنا نسبيا. من حيث الوقت ، كان متوسط الوقت اللازم لإصلاح فأر واحد باستخدام هذه الطريقة أقصر من طريقة تثبيت أرجوحة معطف الفئران. ولم تحدد الطرائق المتبقية الوقت اللازم للتثبيت في الأوراق الخاصة بكل منها؛ لذلك ، لم يتم تقديم أي مناقشة. من حيث عدد الأفراد المطلوبين لإصلاح فأر واحد ، فإن كل من هذه الطريقة وطريقة تعليق أرجوحة معطف الفئران تتطلب شخصا واحدا فقط لإكمال العملية ، وبالتالي تعزيز الكفاءة التجريبية. ومع ذلك ، من حيث نطاق نقطة الوخز المكشوفة ، يمكن لسترة الفئران المصممة خصيصا في هذا البروتوكول تلبية متطلبات تعريض معظم نقاط الوخز على الجسم ، في حين أن معطف الفئران في طريقة التعليق المتأرجح يكشف الأطراف بشكل أساسي. فيما يتعلق بالمواد المستخدمة للتثبيت ، من السهل نسبيا الحصول على المواد المطلوبة لهذه الطريقة في كل من المختبر والإعدادات اليومية. علاوة على ذلك ، من حيث وضع الجرذ أثناء التثبيت ، من الواضح أن الوضع الطبيعي أكثر راحة من الوضع القسري. بشكل عام ، تشبه هذه الطريقة طريقة تثبيت تعليق أرجوحة معطف الفئران ، لكنها استهدفت تحسينات في نسيج وتصميم سترة الفئران ، مما يسمح بمزيد من التعرض لنقاط الوخز في الجسم. علاوة على ذلك ، بالمقارنة مع التعليق على حزام من القماش ، يستخدم هذا البروتوكول أنابيب فولاذية أكثر ثباتا ، مما يقلل من الآثار الضارة الناجمة عن اهتزاز الفئران الفردية العنيف على الفئران الأخرى عندما تخضع فئران متعددة في وقت واحد لعلاج الوخز بالإبر الكهربائية على رف التثبيت. هذا يضمن استقرار وموثوقية البيانات التجريبية.
بالنظر إلى العوامل المذكورة أعلاه بشكل جماعي ، يظهر هذا النهج فوائد الاستقرار والكفاءة والقدرة على تحمل التكاليف والراحة النسبية للفئران ، مما يجعله خيارا قيما لتثبيت إدخال الإبرة.
| طريقة التثبيت | عدد الفئران التي تكافح | النسبة المئوية للفئران المتعثرة (٪) | عدد الفئران المصابة بانخفاض الإبرة أثناء العلاج | النسبة المئوية للفئران المصابة بانخفاض الإبرة أثناء العلاج (٪) | عدد الفئران التي ماتت أثناء العملية | النسبة المئوية للفئران ماتت أثناء العملية (٪) |
| تثبيت التعليق مرتبط بمجموعة السترة | 1 | 8.33 | 1 | 8.33 | 0 | 0 |
الجدول 2. استجابة الفئران الثابتة أثناء العلاج بالوخز بالإبر الكهربائية (ن = 12).
| الرقم التسلسلي | طريقة التثبيت | هل تثبيت الفئران مستقر وآمن | الوقت اللازم لإصلاح الفئران | عدد الموظفين المطلوبين لإصلاح الفئران | موقع ونطاق نقاط الوخز التي يمكن التعرض لها | إمكانية الوصول إلى التركيبات أو المواد | راحة الطرق الثابتة للفئران: الوضع الطبيعي أو القسري | المراجع | |||||||||||||||
| 1 | تثبيت التعليق المرتبط بالسترة في تجربتنا | √ | 50-63 ثانية | 1 | البطن والرأس والظهر والخصر والأطراف | متاحه | الوضع الطبيعي | ||||||||||||||||
| 2 | إطار تثبيت للوخز بالإبر والكي لمزيج نقطة الوخز بالإبر Shu-Mu (اختيار نقطة الوخز التي تجمع بين نقاط الإنذار ونقاط النقل الخلفية) | √ | / | / | الرأس والأطراف والظهر والخصر | يجب تخصيص إطار التثبيت | الموقف القسري | 9 | |||||||||||||||
| 3 | طريقة تثبيت الفئران المتأرجحة المربوطة بمعطف | √ | 85-93 ثانية | 1 | أجزاء الأطراف | متاحه | الوضع الطبيعي | 10 | |||||||||||||||
| 4 | جهاز تثبيت الفئران مصنوع من غطاء قفص شبكي قديم | √ | / | ≥2 | نطاق نقاط الوخز غير محدود | متاحه | الموقف القسري | 13 | |||||||||||||||
| 5 | حامل فئران حديث الصنع | بعد التثبيت ، لا تزال الأطراف الأمامية والخلفية للفئران تتمتع بدرجة معينة من الحركة. علاوة على ذلك ، هناك خطر معين من أن نقطة تقاطع قضيب تثبيت الرقبة في الفئران قد تكون عالية جدا ، مما قد يؤدي إلى الاختناق في الفئران. إذا كان منخفضا جدا ، فقد يكون تثبيت رأس الفئران غير مستقر. | / | / | نطاق نقاط الوخز غير محدود | حامل الفئران يتطلب التخصيص الخاص | الوضع الطبيعي | 14 | |||||||||||||||
الجدول 3. نتائج مقارنة طرق التثبيت المختلفة في تجربة الوخز بالإبر والكي للفئران.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ثبت أن الوخز بالإبر الكهربائية له آثار علاجية جيدة على أمراض مختلفة مثل الضعف الإدراكي 16,17 ، وإصابة عضلة القلب18 ، والألم الالتهابي19. لفهم آلية عملها ، أجريت تجارب على الحيوانات باستخدام الفئران في المقام الأول. تثبيت الحيوانات أثناء الإجراءات أمر بالغ الأهمية للحصول على نتائج دقيقة. في حين أن العديد من الدراسات قد أعطت الوخز بالإبر الكهربائية بعد تخدير الحيوانات ، فإن هذه الممارسة قد تعيق وظائف المخ وتعرض الدقة التجريبية للخطر. علاوة على ذلك ، فإن إدارة التخدير على المدى الطويل تطيل عملية الوخز بالإبر وتعزز فرص نفوق الحيوانات. ومع ذلك ، فإن طرق التثبيت غير المخدرة المبلغ عنها لها أيضا قيود ، والتي تمت مناقشتها بعناية في الجدول 3.
تقدم هذه الدراسة بروتوكولا جديدا يقدم سترة فئران مصنوعة خصيصا جنبا إلى جنب مع رف تثبيت مرتفع. يتضمن الجانب الحاسم من هذا البروتوكول إنشاء سترات الفئران بأحجام مناسبة بناء على أشكال جسم الفئران وتخصيصها وفقا للموقع المحدد لنقاط الوخز المراد إبرة. نصيحة مفيدة لتركيب سترة الفئران هي الاستفادة من ميل الفئران الطبيعي للظلام والحفر لتشجيعه على دخول غطاء الرأس. بمجرد تأمين رأس الجرذ ، تصبح إجراءات التثبيت اللاحقة أبسط بكثير.
بعد التدريب التكيفي ، أظهرت الفئران الحد الأدنى من الانزعاج أثناء استخدام هذه التقنية. مواد المعدات المطلوبة ، مثل الأقمشة ، والخطافات على شكل حرف S ، والعصي الحديدية ، وغيرها من المواد ، يمكن الوصول إليها بسهولة وفعالة من حيث التكلفة ، مما يسهل تقليل النفقات التجريبية. ميزة أخرى هي أنه يمكن تعديل ضيق أحزمة سترة الفئران وفقا لحجم الفئران ، مما يجعلها مرنة ويمكن التحكم فيها. يمكن إكمال عملية التثبيت بأكملها بواسطة شخص واحد بشكل مستقل ، ويسمح التكوين المرتفع للجهاز للباحثين بمعالجة مجموعة من الحيوانات الصغيرة في وقت واحد ، وبالتالي تحسين الكفاءة التجريبية بشكل كبير ، وتقليل الوقت المستغرق في التجربة بأكملها ، وتقليل التناقضات بين نفس المجموعة من الحيوانات. علاوة على ذلك ، فإن المنصة المرتفعة تلغي الحاجة إلى طاولة ، حيث يمكن وضعها مباشرة على أرض مستوية ، وبالتالي تحسين الاستخدام المكاني. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن تعديل هذه التصاميم وتوسيعها للاستخدام في التجارب الأخرى ، مثل خنازير غينيا ، ويمكن أيضا استخدامها بشكل فعال في علاج الكي.
أحد القيود المحتملة لهذا النهج هو متطلبات امتلاك الباحثين لمستوى عال من الكفاءة في هذه التقنية ، فضلا عن الحاجة إلى إنشاء سترات الفئران ذات الأبعاد المختلفة المصممة خصيصا لطول جسم كل فأر وتباعد أطرافه. بالإضافة إلى ذلك ، لا مفر من أن بعض الفئران قد تعاني من إزعاج خفيف وإجهاد عند التعرض الأولي لسترة الفئران وتثبيت التعليق. وبالتالي ، يصبح من الضروري تنفيذ التدريب التكيفي للفئران التي تخضع للعلاج بالوخز بالإبر الكهربائية. علاوة على ذلك ، من الضروري التعامل مع هذه الفئران بحذر أثناء الإجراء ، واستخدام التمسيد اللطيف لتهدئتها وتهدئتها في حالات الهياج أو عدم الامتثال. تجدر الإشارة إلى أنه لتقليل تأثير الإجهاد الحتمي على الحالة البدنية والتجارب السلوكية للفئران ، يجب أن تخضع المجموعة الضابطة (بما في ذلك مجموعة تحكم فارغة ومجموعة تحكم نموذجية) لنفس القدر من المناولة ، وربط سترة الفئران ، والتثبيت المرتفع في نفس الوقت مع مجموعة علاج الوخز بالإبر الكهربائية ، حتى لو لم يتلقوا العلاج بالوخز بالإبر الكهربائية.
باختصار ، توفر لنا طريقة التثبيت هذه خيارا مناسبا وفعالا لشل حركة الفئران ، مما يضمن ضمانا موثوقا به لعملية الوخز بالإبر بشكل مستقر وسلس وعملية الاحتفاظ بالإبرة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
لم يعلن جميع المؤلفين عن أي تضارب محتمل في المصالح.
Acknowledgments
يود المؤلفون التعبير عن امتنانهم لمنصة رسم البحث العلمي Figdraw التابعة ل Home for Researchers لتوفير المواد المستخدمة لإنشاء الشكل 2 في هذه الورقة ، مع معرف الترخيص المصرح به: URUUO5699e. تلقى هذا العمل دعما من المنح المقدمة من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81873380 ، 82074566) ، ومؤسسة العلوم الطبيعية في مقاطعة هوبي (2022CFCO43) ، ومشروع بناء استوديو تراث الطب الصيني التقليدي الشهير التابع للإدارة الوطنية للطب الصيني التقليدي ([2022] رقم 5 ، [2022] رقم 75).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 75% alcohol | Shandong Lircon medical technology co., ltd | 2002-0059 | Disinfection |
| acupuncture needles | Beijing Luo ya shan chuan medical equipment co., Ltd. | needling | |
| Adult Sprague-Dawley (SD) rats | Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd. | SCXK 2020-0001 | The recipient subjected to fixation |
| an elevated fixation rack | Taizhou shiai instruments and equipments for scientific and teaching research Co., ltd | / | Fix rats |
| Hans electronic acupuncture apparatus | Beijing Huayun Ante Science and Technology Co. Ltd. | HANS-200A | electroacupuncture |
| Medical cotton ball | Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd. | 20172142357 | Disinfection |
| Pet electric clipper | Fenghua Xikou Lubao Knives & Scissors Electrical Appliance Factory | / | Shave the hair of rats |
| Tweezers | Qingdao Schultz Biotechnology Co., ltd | Pinch cotton balls |
References
- Liu, Z., et al. Effect of Electroacupuncture on Urinary Leakage Among Women With Stress Urinary Incontinence: A Randomized Clinical Trial. The Journal of the American Medical Association. 317 (24), 2493-2501 (2017).
- Tsuei, J. J.
- Liu, S., et al. Somatotopic Organization and Intensity Dependence in Driving Distinct NPY-Expressing Sympathetic Pathways by Electroacupuncture. Neuron. 108 (3), 436-450 (2020).
- Liu, S., et al. A neuroanatomical basis for electroacupuncture to drive the vagal-adrenal axis. Nature. 598 (7882), 641-645 (2021).
- Li, X., Wei, W., Wang, Y., Wang, Q., Liu, Z. Global Trend in the Research and Development of Acupuncture Treatment on Parkinson's Disease From 2000 to 2021: A Bibliometric Analysis. Frontiers In Neurology. 13, 906317 (2022).
- Jiang, S., et al. Application Progress of fixation methods for rodents under non anesthesia in acupuncture and moxibustion experiments domestically and abroad. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 40 (12), 1509-1514 (2021).
- Jiang, H. Z., et al. Fixation method in the study of acupuncture intervention on rats. Journal of Shanxi College of Traditional Chinese Medicine. 20 (3), 169-171 (2019).
- Wang, Y., Ning, Y., Wang, P. Y., Yang, Y. Q. Method of Placing a Rat on an Elevated Platform for Acupuncture. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 31 (5), 289-292 (2012).
- Wang, F., Xiong, J., Zeng, F., He, Z. X. A fixation frame for acupuncture and moxibustion of Shu-Mu acupoint combination in rats. Acupuncture Research. 47 (10), 938-940 (2022).
- Tu, S., P, C., Y, Y. H. Fixation method for needle warming moxibustion treatment on swinging rats bound with coat. Chinese Journal of Comparative Medicine. 31 (5), 128-132 (2021).
- Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Influence of anesthetic agent, depth of anesthesia and body temperature on cardiovascular functional parameters in the rat. Laboratory Animals. 48 (1), 6-14 (2014).
- Kiyatkin, E. A., Brown, P. L. Brain and body temperature homeostasis during sodium pentobarbital anesthesia with and without body warming in rats. Physiology & Behavior. 84 (4), 563-570 (2005).
- He, C., Zhang, C., Zhou, S., Fan, Y. Using old meshy cage cover to make a rat fixating device for acupuncture study. Acupuncture Research. 46 (4), 348-350 (2021).
- Li, Y., Lin, N., Huang, Y., Xue, X., Liu, Q. A Newly-made Rat Holder for Convenient Acupuncture Needle Insertion. Acupuncture Research. 41 (5), 466-468 (2016).
- Bielitzki, J. T., Barbee, R. W., Garber, J. Guide for the care and use of laboratory animals. 85 (3), National Academies Press (U.S.). NIH Publication No 85-23(rev) 963-965 (2011).
- Zheng, X., et al. Electroacupuncture ameliorates beta-amyloid pathology and cognitive impairment in Alzheimer disease via a novel mechanism involving activation of TFEB (transcription factor EB). Autophagy. 17 (11), 3833-3847 (2021).
- Su, X., et al. Effectiveness and Safety of Acupuncture for Vascular Cognitive Impairment: A Systematic Review and Meta-Analysis. Frontiers In Aging Neuroscience. 13, 692508 (2021).
- Wang, Q., et al. Efficacy of electroacupuncture pretreatment for myocardial injury in patients undergoing percutaneous coronary intervention: A randomized clinical trial with a 2-year follow-up. International Journal of Cardiology. 194, 28-35 (2015).
- Zhang, R., Lao, L., Ren, K., Berman, B. M. Mechanisms of acupuncture-electroacupuncture on persistent pain. Anesthesiology. 120 (2), 482-503 (2014).
