Summary
Hier stellen wir eine verbesserte Suspensionsfixierungsmethode vor, bei der ein Rattenmantel verwendet wird, um Ratten während Akupunkturexperimenten effektiv zu immobilisieren. Des Weiteren wird der Aufbau und die Anwendung dieses Fixationsapparates sowie Anweisungen und Auswertungen für den Einsatz in der Elektroakupunkturtherapie erläutert.
Abstract
In der experimentellen Grundlagenforschung werden Ratten häufig als Versuchstiere verwendet. Allerdings fällt es ihnen schwer, eine feste Haltung einzunehmen. Bei Elektroakupunkturverfahren ist die richtige Immobilisierung von Ratten unerlässlich. Derzeit werden verschiedene Methoden der Rattenfixierung verwendet, darunter die Anästhesiefixierung, die Hochplattformfixierung, die Bindungsfixierung und die Fixierung mit einem selbstgemachten Rattenmantel. Diese Methoden haben jedoch ihre Grenzen, die die Effizienz und Funktionsfähigkeit des Experiments bis zu einem gewissen Grad beeinträchtigen können. Dieses Protokoll führt eine Methode zum Aufhängen und Fixieren von Ratten mit Rattenkleidung ein. Erstens werden Ratten mit Rattenjacken bekleidet, die zu ihrer Körperform passen, und machen sich ihre Vorliebe für Dunkelheit und Wühlen zunutze. Die Vernadelung kann dann durchgeführt werden, nachdem die Ratten Rattenkleidung getragen haben. In der Schwebe sind die Ratten relativ ruhig, da sich ihre Gliedmaßen nicht bewegen können. Diese Fixierungsmethode bietet nicht nur wirtschaftliche und benutzerfreundliche Vorteile, sondern sorgt auch für eine stabile und zuverlässige Fixierung der Ratten in einer angenehm entspannten Position. Es minimiert auch effektiv den Zeitaufwand, den Experimentierraum und die Personalressourcen. Darüber hinaus ermöglicht diese Methode die Exposition der meisten Akupunkturpunkte, die für die Akupunktur bei Ratten verwendet werden. Dieser Artikel konzentriert sich in erster Linie auf die Zusammensetzung des Geräts, das einen speziell entwickelten Rattenmantel, ein erhöhtes Befestigungsgestell und deren Verbindungsstrukturen umfasst. Darüber hinaus wird ein anschauliches Beispiel vorgestellt, um die Anwendung der auf Rattenkleidung basierenden Suspensionsfixationsmethode bei Elektroakupunkturverfahren bei Ratten zu demonstrieren.
Introduction
Akupunktur ist eine traditionelle Therapie, die durch Nadeln an bestimmten Akupunkturpunkten oder anderen Positionen zur Vorbeugung und Behandlung von Krankheiten gekennzeichnet ist. Die Elektroakupunktur kombiniert filiforme Nadeln mit elektrischer Stimulation1, was eine präzise Kontrolle über die Menge der Stimulation durch Anpassung relevanter Parameter ermöglicht und die Standardisierung der Akupunkturbehandlung2 fördert. In den letzten Jahren hat sich die Forschung zu den Mechanismen der Elektroakupunktur weiter ausgebaut und vertieft3,4, was zu einer jährlichen Zunahme von Studien geführt hat, die sich auf die Mechanismen der Elektroakupunktur konzentrieren5.
In der Grundlagenforschung zur Elektroakupunktur sind Ratten die am häufigsten verwendeten Tiere. Während der Elektroakupunkturbehandlung muss der Empfänger ruhig bleiben, um einen reibungslosen Ablauf zu gewährleisten. Anders als in klinischen Studien mit menschlichen Probanden können Kleintiere, die im Tierversuch verwendet werden, während 15-30 Minuten langwieriger Elektroakupunkturverfahren den Befehlen nicht bewusst folgen. Dies stellt die Forscher vor die größte Herausforderung, eine stabile und zuverlässige Fixierung zu erreichen. Eine falsche Fixierung kann bei Tieren zu negativen Emotionen wie Angstzuständen, Depressionen und Ängsten führen6, was nicht nur das Verletzungsrisiko für Ratten und die Wahrscheinlichkeit, gebissen zu werden, für das Versuchspersonal erhöht, sondern auch die Stabilität und Überzeugungskraft der Forschungsergebnisse beeinträchtigt.
In früheren Studien haben Forscher vor Akupunktur- oder Elektroakupunkturoperationen häufig die Anästhesiefixierung7, die Hochplattformfixierung8, die Bindungsfixierung 6,9 oder die Rattenfellfixierung10 verwendet. Angesichts der Auswirkungen der Anästhesie auf den Körper11 und die Gehirnfunktion12 und in Anbetracht der Tatsache, dass die Akupunktur in klinischen Fällen bei bewussten Patienten durchgeführt wird, kann die Anästhesie die Forschungsergebnisse jedoch bis zu einem gewissen Grad beeinflussen. Daher ist die komfortable Fixierung von Ratten im Wachzustand im Vergleich zur Anästhesiefixierung eine bessere Option.
Im nicht-anästhesierten Zustand besitzen jedoch auch verschiedene Fixationsmethoden ihre jeweiligen Grenzen, einschließlich einer eingeschränkten Akupunkturexposition aufgrund der Abdeckung des Rattenfells bei Ratten10, der Notwendigkeit von mindestens zwei Individuen zur Durchführung der Operation13, einer nicht einstellbaren Fixateurgröße14 oder des gestressten Zustands von Ratten in einer erzwungenen Position6. Um diese technischen Probleme zu lösen, haben wir einen Rattenmantel und ein Fixierungsgestell entwickelt, das für die Akupunkturmanipulation in den meisten Teilen des Rattenkörpers geeignet ist. Dies kann Forschern helfen, Akupunkturverfahren mit Ratten effizient durchzuführen.
Die Logik für dieses Protokoll ist folgende: Erstens nutzt die geschlossene Kopfbedeckung an der Jacke der Ratte die natürliche Neigung der Ratten zu Dunkelheit und Wühlen und schränkt so ihren Aktivitätsradius ein. Zweitens sorgen die Bindungsseile in der Nähe der Gelenke der Gliedmaßen der Ratten für eine physische Kompressionsfesselung und schränken ihre Bewegungen ein. Ratten sind jedoch auch dann noch in der Lage, zu springen und sich horizontal zu bewegen, wenn sie die Jacke tragen. Da Ratten den Boden nicht ohne einen festen Kraftpunkt berühren können, wenn sie aufgehängt sind, haben wir den Rattenmantel mit einer Aufhängungsvorrichtung versehen, die ihre Bewegungen weiter einschränkt und den Halt der Nadel gewährleistet. Die Zusammensetzung der Fixiervorrichtung ist in Abbildung 1 dargestellt.
Abbildung 1: Schematische Darstellung des Rattenmantels und der Aufhängungsfixierung. (A) Das allgemeine Erscheinungsbild der Rattenjacke in einer flachen Ansicht. (B) Dreidimensionale Ansicht des Rattenmantels. (C) Speziell zugeschnittene Rattenjacke mit einem Einschnitt in der Nähe der Akupunkturpunkte an Kopf und hinterer Taille. (D) Illustration mehrerer Ratten, die gleichzeitig auf dem erhöhten Gestell aufgehängt sind. 1: Gesamtansicht des Stoffes; 2: Ausgang der Vordergliedmaßen; 3: Auslass der hinteren Gliedmaßen; 4: Seil binden; 5: Hohlraum, der sich nach dem Nähen gebildet hat; 6: Inzision zur Freilegung von Kopfakupunkturpunkten; 7: Inzision zur Freilegung von Rücken- und Taillenakupunkturpunkten. 8: Position der Naht. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
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Protocol
Alle Verfahren, die in dieser Studie an den Ratten durchgeführt wurden, entsprachen dem National Standard for Laboratory Animal Welfare and Ethics Review Guidelines (2018), der offiziell von der Volksrepublik China verabschiedet wurde, und dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren von National Academies Press15. Dieses Protokoll besteht aus drei Hauptschritten. Zum einen werden die Rattenjacken auf die individuellen Körperformen von Ratten mit unterschiedlichem Gewicht zugeschnitten und angepasst. Als nächstes wird die Akupunkturmanipulation nach Standardverfahren durchgeführt. Schließlich werden die Ratten in ihren Jacken aufgehängt, während die Nadeln an Ort und Stelle bleiben, um der Notwendigkeit gleichzeitiger Eingriffe zwischen Ratten innerhalb derselben Gruppe gerecht zu werden.
1. Vorbereitung auf die Vernadelung
- Herstellung der Rattenjacke
- Wiegen Sie die Ratten und messen Sie ihre Körperform, bevor Sie ihre Jacken herstellen. Um die Eignung dieses Protokolls für Ratten mit unterschiedlichem Gewicht zu überprüfen, wählen Sie Ratten mit einem Gewicht von 220 g, 300 g, 400 g und 520 g für unabhängige Messungen ihrer Körpermaße aus, die Messungen von a bis f umfassen, wie in Abbildung 2 dargestellt.
HINWEIS: Die Korrelation zwischen den Körperproportionen von Ratten und ihren entsprechenden Mantelgrößen ist ebenfalls in Abbildung 2 dargestellt. Die relevanten Körperlängenparameter für Ratten unterschiedlichen Gewichts sind in Tabelle 1 aufgeführt. - Schneide ein rechteckiges Stück dicken, dunklen Stoffes zu, um eine Rattenjacke zu machen. Verwenden Sie den Stoff mit einer ungefalteten Breite, die dem Umfang entspricht, der um die dickste Stelle des Hinterleibs der Ratte gemessen wird. Die Länge des Gewebes entspricht dem Abstand von der Nasenspitze der Ratte bis zum Schwanzansatz (siehe Abbildung 2).
- Falten Sie den Stoff in der Mitte und schneiden Sie die obere linke Ecke in einem Winkel von ca. 45°-65° ab, um ein rechtes Trapez zu bilden (siehe Abbildung 3A).
- Die beiden Seiten links mit Baumwollgarn festnähen. Eine Anleitung finden Sie in Abbildung 1B und Abbildung 3B .
- Schneiden Sie zwei kleine Löcher, eines auf jeder Seite des Stoffes, durch die die oberen und unteren Gliedmaßen der Ratte führen können (siehe Abbildung 3C). Der Abstand zwischen den beiden oberen Gliedmaßen bestimmt den Abstand zwischen den oberen Löchern des Rattenmantels. Der Abstand zwischen den beiden unteren Gliedmaßen bestimmt den Abstand zwischen den unteren Löchern des Rattenmantels.
- Verwenden Sie den Längsabstand zwischen der Achselhöhle der Ratte und der Vorderseite des Darmbeins als Abstand zwischen den oberen und unteren Löchern des Rattenmantels. Verwenden Sie den Umfang des Schultergelenks, um den Umfang des oberen Lochs in der Rattenjacke zu bestimmen. Verwenden Sie den Umfang des Hüftgelenks für den Umfang des unteren Lochs in der Rattenjacke.
- Nähen Sie neben jedem Loch einen langen Stoffriemen, der gekreuzt und vom zu öffnenden Ende der Jacke aus fest um den Körper gewickelt werden kann, um die Ratte zu fixieren.
- Wiegen Sie die Ratten und messen Sie ihre Körperform, bevor Sie ihre Jacken herstellen. Um die Eignung dieses Protokolls für Ratten mit unterschiedlichem Gewicht zu überprüfen, wählen Sie Ratten mit einem Gewicht von 220 g, 300 g, 400 g und 520 g für unabhängige Messungen ihrer Körpermaße aus, die Messungen von a bis f umfassen, wie in Abbildung 2 dargestellt.
- Methode zum Tragen von Rattenjacken
- Trage Handschuhe, bevor du der Ratte die Jacke anziehst. Beginne, indem du den mittleren und hinteren Teil der Rattenjacke mit einer Hand auf dem Tisch festhältst. Halten Sie mit der anderen Hand den Schwanz der Ratte aus dem Futterkäfig und legen Sie ihn vorsichtig in die Jacke.
- Wenn sich die Ratte vorwärts bewegt, erreicht ihr Kopf die Kopfbedeckung der Jacke. An dieser Stelle ziehst du mit beiden Händen vorsichtig die linken und rechten oberen Gliedmaßen aus den Löchern in der Jacke.
- Nimm das Bindeseil vom Ende der Jacke, kreuze es von links nach rechts und wickle es sicher um den Rumpf der Ratte. Binden Sie es fest auf der gegenüberliegenden Seite des Stammes, um eine ordnungsgemäße Fixierung zu gewährleisten. Nachdem Sie die oberen Gliedmaßen der Ratte gefesselt haben, wiederholen Sie den gleichen Vorgang, um die unteren Gliedmaßen zu fixieren.
- Treffen Sie Vorsichtsmaßnahmen, um zu vermeiden, dass Sie von den Krallen der Ratte gebissen oder gekratzt werden, wenn Sie ihre Gliedmaßen aus den Jackenlöchern ziehen. Stellen Sie sicher, dass die Straffheit des Seils entsprechend eingestellt ist, d. h. nicht zu eng, um bei Ratten eine lokale Ischämie und Hypoxie der Gliedmaßen zu verursachen, und nicht zu locker, damit die Ratte leicht entkommen kann (siehe Video 1).
- Befestigungsgestell und S-förmige Eisenhaken
- Das Fixiergestell besteht aus zwei schweren Eisenschalen (24 cm lang, 12 cm breit und 2 cm hoch) und einer Eisensäule (60 cm lang), die auf jedem Tablett fest verschweißt ist. Befestigen Sie einen massiven Eisenstab (145 cm Länge) auf gleicher Höhe an den beiden Eisensäulen mit einer verschraubbaren Verbindungsstruktur, die sich verstellen und auf einer festen Höhe halten lässt (siehe Abbildung 4A).
- Um die Ratte, die die Jacke trägt, mit dem Eisenstab zu verbinden, verwenden Sie die S-förmigen Haken (11 cm Durchmesser). Wickeln Sie ein Ende des Hakens um den Riemen der Jacke, während das andere Ende an den Eisenstab gehängt wird. Verwende zwei S-förmige Haken, um die Ratte am Stock zu befestigen. Die Gesamtstruktur entnehmen Sie bitte Abbildung 1D und Abbildung 4B .
Abbildung 2: Entsprechendes Diagramm der Körperform der Ratte und der angepassten Größe des Rattenmantels. Im Diagramm stellt der Parameter a den Querabstand an der Rückseite des Gelenks zwischen den oberen Gliedmaßen und dem Rumpf der Ratte dar. Dieser Wert wird als Abstandsmaß zwischen den Eindringlöchern für die oberen Gliedmaßen des Rattenmantels verwendet. In ähnlicher Weise stellt Parameter b den Querabstand auf dem Rücken dar, an dem die bilateralen unteren Gliedmaßen der Ratte mit dem Rumpf verbunden sind. Diese Messung bestimmt den Abstand der Eindringlöcher für die unteren Gliedmaßen des Rattenmantels. Der Parameter c bezeichnet den Umfang des dicksten Teils des Hinterleibs der Ratte, der als Breitenmaß für den Stoff der Rattenjacke verwendet werden kann. Der Parameter d stellt den Abstand von der Achselhöhle der Ratte zur Vorderseite ihres Darmbeins dar und bestimmt den Längsabstand zwischen den oberen und unteren Löchern des Mantels. Der Parameter e entspricht dem Längsabstand von der Nasenspitze der Ratte bis zum Schwanzansatz und dient als Längenmaß für das Manteltuch der Ratte. Der Parameter f bezeichnet den Umfang des Gelenks, das die obere Extremität mit dem Rumpf der Ratte verbindet, und dient als Umfang des Lochs, durch das die oberen Gliedmaßen verlaufen. Der Parameter g stellt den Umfang des Gelenks dar, das die unteren Gliedmaßen mit dem Rumpf der Ratte verbindet, und bestimmt den Umfang des Lochs, durch das die unteren Gliedmaßen verlaufen. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
| Körpergewicht (g) | Parameter der Körperform (cm) | ||||||
| ein | b | c | d | e | f | g | |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
Tabelle 1. Die Messergebnisse von Körperformparametern von Ratten mit unterschiedlichem Körpergewicht.
Abbildung 3: Diagramm zur Darstellung des physischen Erscheinungsbildes und der Verwendung des Rattenmantels. (A) Ebene: Außenansicht des Rattenmantels. Die Form des Mantels der Ratte ähnelt einem rechtwinkligen Trapez, mit separaten Öffnungen auf der linken und rechten Seite, durch die die oberen und unteren Gliedmaßen der Ratte hindurchgehen können. (B) Ungefaltete Außenansicht des Rattenmantels. Durch den Verschluss der Kopfbedeckung entsteht ein halbgeschlossener Hohlraum, der als entscheidende Komponente dient, um Ratten zum Eindringen zu verleiten. (C) Seitenansicht einer Ratte, die mit der Jacke bekleidet ist. Sobald die Gliedmaßen der Ratte durch die Öffnungen in der Kleidung gehen, werden die Gurte über die Bauchfläche des Rumpfes gekreuzt und am Rücken mit entsprechender Spannung sicher befestigt. Dadurch wird sichergestellt, dass die Ratte relativ bewegungsunfähig ist. (D) Bauchansicht einer Ratte, die mit der Rattenjacke bekleidet ist. Die ventrale Oberfläche des Mantels legt die Bauchhaut der Ratte frei, was einen bequemen Zugang für die Akupunktur an ventralen Punkten ermöglicht. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Video 1: Anziehen der Rattenjacke. Dieses Video zeigt einen typischen Prozess, bei dem die Ratte in die Jacke gekleidet wird. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video herunterzuladen.
Abbildung 4: Diagramm zur Darstellung des physischen Erscheinungsbildes und der Verwendung des erhöhten Befestigungsgestells (A) Erhöhtes Befestigungsgestell. Dieses Gestell besteht im Wesentlichen aus zwei vertikalen Eisensäulen (60 cm lang), die an jedes Tablett geschweißt sind, sowie einem langen horizontalen Eisenstab (145 cm lang), der parallel zum Boden platziert ist. Schrauben werden verwendet, um den horizontalen Stab auf der gleichen Höhe wie die vertikalen Säulen zu befestigen. (B) Rattenaufhängung auf dem Fixiergestell. Ratten, die die Rattenjacken tragen, werden mit zwei S-förmigen Haken pro Ratte sicher am Fixierungsgestell befestigt. (C) Gleichzeitige Elektroakupunkturbehandlung bei mehreren Ratten. Um mögliche Interferenzen durch Schwanzbewegungen zu vermeiden, war es notwendig, einen angemessenen Abstand zwischen den Ratten einzuhalten, der der Länge des Schwanzes einer Ratte entspricht. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
2. Elektroakupunktur-Verfahren
- Routinemäßige Vorbereitung
- Platzieren Sie das Befestigungsgestell auf einem horizontalen Schreibtisch oder Boden.
- Entfernen Sie vor dem Needling-Verfahren das Fell um die Akupunkturpunkte herum mit einem elektrischen Rasierer, um eine vollständige Belichtung zu gewährleisten. Wenn sich der zu punktierende Akupunkturpunkt am Bauch der Ratte befindet, wie z. B. Guanyuan (CV4, ca. 25 mm unterhalb des Bauchnabels), kürzen Sie die Breite der Rattenkleidung entsprechend, um die abdominalen Akupunkturpunkte freizulegen.
- Lokalisieren Sie den Akupunkturpunkt aus der Lücke auf der Mittellinie des Abdomens, die nicht durch den Rattenmantel bedeckt ist (siehe Abbildung 3D), und injizieren Sie dann die Nadel.
- Wenn sich die zu punktierenden Akupunkturpunkte auf dem Kopf der Ratte befinden, wie z. B. Baihui (GV20, befindet sich in der Mitte des Scheitelknochens), machen Sie einen kleinen Schnitt an der entsprechenden Position am Kopf, um die Haut um GV20 herum vollständig freizulegen (siehe Abbildung 1C).
- Bei der Akupunktur von Akupunkturpunkten an den Gliedmaßen von Ratten, wie z.B. Neiguan (PC6, auf der Innenseite der Vordergliedmaße, zwischen der radialen und ulnaren Naht ca. 3 mm vom Handgelenk entfernt) in der oberen Extremität oder Zusanli (ST36, auf der posterolateralen Seite des Kniegelenks, ca. 2 mm unterhalb des Wadenbeinkopfes) in der unteren Extremität, Aufgrund der offensichtlichen Freilegung der Akupunkturpunkte verwenden Sie eine Hand, um die Gliedmaße zu fixieren, während die andere die Akupunkturoperation direkt durchführen kann.
- Wenn sich der Akupunkturpunkt auf dem Rücken oder der Taille einer Ratte befindet, wie z. B. Shenshu (BL23, unterhalb des 2. Lendenwirbels, 6 mm von der Mittellinie des Rückens entfernt), schneiden Sie eine etwa 2 cm breite Öffnung in die Mitte des Mantels der Ratte, um die Haut der entsprechenden Stelle vollständig freizulegen (siehe Abbildung 1C).
- Ziehe der Ratte die Jacke an. Nachdem Sie die lokale Haut von Akupunkturpunkten mit Alkoholtupfern desinfiziert haben, beginnen Sie mit dem Akupunkturverfahren.
- Nadeltechnik: Lokalisieren Sie den Akupunkturpunkt genau. Führen Sie eine sterile Einweg-Akupunkturnadel (0,16 mm x 7 mm) in der entsprechenden Tiefe in den Akupunkturpunkt der Ratte ein.
- Elektroakupunktur-Operation
- Wickeln Sie den Elektrodendraht um die horizontale Eisenstange. Dieser Schritt verringert das Risiko, dass die Nadel aufgrund der auf den Elektroakupunkturclip einwirkenden Schwerkraft herausfällt. Befestigen Sie dann das Ende des Elektrodendrahtes sicher am Nadelgriff.
- Schalten Sie die Stromversorgung ein und wählen Sie die entsprechenden Frequenz-, Strom- und Zeitparameter. In diesem Experiment wurden die Parameter auf 2 Hz, 1 mA und 15 min eingestellt. Sobald die Parameter eingestellt sind, beginnen Sie mit der Elektroakupunkturbehandlung (siehe Video 2 und Video 3).
- Simultane Elektroakupunktur bei Ratten: Während der Behandlung hängen Sie die Ratten in der gleichen Gruppe zusammen mit den S-förmigen Haken am Eisenstab auf und lassen Sie sie gleichzeitig einer Elektroakupunkturintervention unterziehen.
- HINWEIS: Der Eisenstab sollte nicht nur stabil, sondern auch lang genug sein, um eine Gruppe von Ratten gleichzeitig zu behandeln. In diesem Experiment können 3-4 Ratten gleichzeitig behandelt werden, wobei ein angemessener Abstand und keine Interferenzen zwischen den Ratten gewährleistet sind (siehe Abbildung 4C).
- Beobachtung der Reaktionen von Ratten während der Elektroakupunkturbehandlung: Bewerten Sie die Eignung dieser Fixierungsmethode für die Elektroakupunktur bei Ratten auf der Grundlage der folgenden Faktoren, wie z. B. der Anzahl des Personals, das für die Durchführung der Operation erforderlich ist, der Zeit, die für die Fixierung einer Ratte benötigt wird, der Reaktion der Ratten während der Elektroakupunkturbehandlung, der Anzahl der während des Eingriffs fallengelassenen Nadeln und etwaigen versehentlichen Todesfällen, die während der Operation auftreten können.
- Entfernung der Nadeln
- Sobald die voreingestellte Zeit abgelaufen ist, schaltet sich das Elektroakupunkturgerät automatisch ab. Entfernen Sie den kleinen Clip, der mit dem Nadelgriff verbunden ist, und entfernen Sie die Akupunkturnadel vorsichtig unter der Haut der Ratte, um den Prozess der Elektroakupunkturbehandlung abzuschließen.
- Lockern Sie die Gurte, heben Sie die Kopfbedeckung der Rattenjacke an und positionieren Sie die Ratte über dem Käfig. Die Ratte kann sich dann frei aus der Jacke lösen und selbstständig in den Käfig gelangen (siehe Video 4).
Video 2. Nadelung von Akupunkturpunkten im Lendenwirbelbereich. Dieses Video zeigt das umfassende und kohärente Verfahren, das das Einziehen der Ratte in die Jacke, das Einführen von Akupunkturnadeln in Akupunkturpunkte an der Taille und den anschließenden Anschluss eines Elektroakupunkturgeräts umfasst. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video herunterzuladen.
Video 3. Nadelpunkturpunkte im Bauch und in der unteren Extremität. Dieses Video zeigt das umfassende und kohärente Verfahren, das das Einziehen der Ratte in die Jacke, das Einführen von Akupunkturnadeln in Akupunkturpunkte im Bauch und in der unteren Extremität und den anschließenden Anschluss eines Elektroakupunkturgeräts umfasst. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video herunterzuladen.
Video 4. Entfernen des Rattenmantels. Dieses Video zeigt die übliche Praxis, der Ratte die Jacke abzunehmen. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video herunterzuladen.
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Representative Results
In diesem Experiment wurden insgesamt 12 Ratten für die Elektroakupunkturbehandlung ausgewählt und ihre Reaktionen unter der Fixierungsmethode beobachtet (wie in Tabelle 2 gezeigt). Von den 12 Ratten zeigte nur 1 Ratte während der 15-minütigen Retentionszeit der Elektroakupunkturnadel einen intensiven Kampf. Infolge ihrer kräftigen Bewegungen löste sich die Nadel auf halbem Weg, was 8,33 % der Gesamtzahl der Ratten ausmachte. Dieses Ergebnis deutet darauf hin, dass die verwendete Fixationsmethode im Allgemeinen ein bemerkenswertes Maß an Stabilität und Zuverlässigkeit aufweist. Trotz des Kampfes, den eine Ratte zeigte, behielt die Mehrheit der Ratten in der Gruppe während der gesamten Behandlung eine ordnungsgemäße Nadelfixierung bei. Darüber hinaus wurden während der 2-monatigen Versuchsdauer, in der diese Methode zur Immobilisierung von Ratten für die Elektroakupunkturbehandlung eingesetzt wurde, keine Fälle von Rattensterblichkeit aufgezeichnet, was auf die Sicherheit dieser Fixierungsmethode für Ratten hindeutet.
Darüber hinaus haben wir in Tabelle 3 diese Fixationsmethode mit vier anderen Methoden verglichen, über die in der Literatur berichtet wird 9,10,13,14. Erstens, in Bezug auf die Stabilität, abgesehen von der etwas schlechteren Stabilität der fünften Methode mit einer neu hergestellten Rattenhalterfixierung, erreichten die anderen Methoden eine relativ sichere Fixierung. In Bezug auf die Zeit war die durchschnittliche Zeit, die benötigt wurde, um eine Ratte mit dieser Methode zu fixieren, kürzer als die der Rattenfell-Swing-Fixierungsmethode. Die übrigen Methoden gaben die für die Fixierung erforderliche Zeit in ihren jeweiligen Arbeiten nicht an; Daher wird keine Diskussion angeboten. In Bezug auf die Anzahl des Personals, das für die Fixierung einer Ratte erforderlich ist, erforderten sowohl diese Methode als auch die Methode der Rattenfell-Swing-Suspension nur eine Person, um den Vorgang abzuschließen, wodurch die experimentelle Effizienz erhöht wurde. In Bezug auf den exponierten Akupunkturbereich kann der speziell entwickelte Rattenmantel in diesem Protokoll jedoch die Anforderungen für die Freilegung der meisten Akupunkturpunkte am Körper erfüllen, während der Rattenmantel bei der Swing-Suspension-Methode hauptsächlich die Gliedmaßen freilegt. Was die für die Fixierung verwendeten Materialien betrifft, so sind die für diese Methode erforderlichen Materialien sowohl im Labor als auch im Alltag relativ einfach zu beschaffen. Darüber hinaus ist die natürliche Position in Bezug auf die Position der Ratte während der Fixierung offensichtlich bequemer als die erzwungene Position. Im Großen und Ganzen ähnelt diese Methode der Fixierungsmethode der Rattenfell-Swing-Aufhängung, aber sie hat gezielte Verbesserungen im Stoff und Design der Rattenjacke vorgenommen, die eine stärkere Exposition von Körperakupunkturpunkten ermöglichen. Darüber hinaus verwendet dieses Protokoll im Vergleich zur Aufhängung an einem Stoffband stabilere Stahlrohre, die die nachteiligen Auswirkungen des heftigen Schüttelns einzelner Ratten auf andere Ratten reduzieren, wenn mehrere Ratten gleichzeitig auf dem Fixationsgestell einer Elektroakupunkturbehandlung unterzogen werden. Dies gewährleistet die Stabilität und Zuverlässigkeit der experimentellen Daten.
Unter Berücksichtigung der oben genannten Faktoren zeigt dieser Ansatz die Vorteile von Stabilität, Effizienz, Erschwinglichkeit und relativem Komfort für Ratten, was ihn zu einer wertvollen Option für die Nadeleinführungsfixierung macht.
| Fixationsmethode | Anzahl der kämpfenden Ratten | Prozentsatz der kämpfenden Ratten (%) | Anzahl der Ratten, bei denen die Nadel während der Behandlung abfiel | Prozentsatz der Ratten mit Nadelabfall während der Behandlung (%) | Anzahl der Ratten, die während des Betriebs starben | Prozentsatz der Ratten, die während des Betriebs starben (%) |
| Aufhängungsfixierung mit Jackengruppe gebunden | 1 | 8.33 | 1 | 8.33 | 0 | 0 |
Tabelle 2. Reaktion fixierter Ratten während der Elektroakupunkturbehandlung (n=12).
| Seriennummer | Fixationsmethode | Ist die Fixierung von Ratten stabil und sicher? | Die Zeit, die benötigt wird, um eine Ratte zu reparieren | Anzahl des Personals, das für die Reparatur einer Ratte erforderlich ist | Die Position und der Bereich der Akupunkturpunkte, die exponiert werden können | Zugänglichkeit von Einbauten oder Materialien | Komfort von festen Methoden für Ratten: natürliche oder erzwungene Position | Referenzen | |||||||||||||||
| 1 | Aufhängungsfixierung mit Jacke gebunden in unserem Experiment | √ | 50-63 s | 1 | Bauch, Kopf, Rücken und Taille, Gliedmaßen | Sofort verfügbar | Natürliche Lage | ||||||||||||||||
| 2 | Ein Fixierungsrahmen für Akupunktur und Moxibustion für die Shu-Mu-Akupunkturpunkt-Kombination (eine Akupunkturauswahl, die die Alarmpunkte mit den Rücktransportpunkten kombiniert) | √ | / | / | Kopf, Gliedmaßen, Rücken und Taille | Der Befestigungsrahmen muss individuell angepasst werden | Erzwungene Stellung | 9 | |||||||||||||||
| 3 | Fixationsmethode von schwingenden Ratten, die mit Fell gefesselt sind | √ | 85-93 Sek. | 1 | Gliedmaßen-Teile | Sofort verfügbar | Natürliche Lage | 10 | |||||||||||||||
| 4 | Ein Rattenfixiergerät aus einem alten Käfigdeckel | √ | / | ≥2 | Der Bereich der Akupunkturpunkte ist nicht begrenzt | Sofort verfügbar | Erzwungene Stellung | 13 | |||||||||||||||
| 5 | Ein neu hergestellter Rattenhalter | Nach der Fixierung haben die vorderen und hinteren Gliedmaßen der Ratten noch eine gewisse Beweglichkeit. Des Weiteren besteht ein gewisses Risiko, dass der Schnittpunkt des Halsfixierstabes bei Ratten zu hoch sein kann, was bei Ratten zum Ersticken führen kann. Ist sie zu niedrig, kann die Kopffixierung von Ratten instabil sein. | / | / | Der Bereich der Akupunkturpunkte ist nicht begrenzt | Rattenhalter erfordert spezielle Anpassung | Natürliche Lage | 14 | |||||||||||||||
Tabelle 3. Vergleichende Ergebnisse verschiedener Fixationsmethoden im Rattenakupunktur- und Moxibustionsexperiment.
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Discussion
Es hat sich gezeigt, dass Elektroakupunktur gute therapeutische Wirkungen bei verschiedenen Krankheiten wie kognitiven Beeinträchtigungen 16,17, Herzmuskelverletzungen18 und entzündlichen Schmerzen19 hat. Um den Wirkmechanismus zu verstehen, wurden Tierversuche vor allem mit Ratten durchgeführt. Die Fixierung der Tiere während der Eingriffe ist entscheidend für genaue Ergebnisse. Während in vielen Studien Elektroakupunktur nach einer Tieranästhesie durchgeführt wurde, kann diese Praxis die Gehirnfunktion beeinträchtigen und die experimentelle Genauigkeit beeinträchtigen. Darüber hinaus verlängert die langfristige Verabreichung von Anästhesien das Needling-Verfahren und erhöht die Sterblichkeitswahrscheinlichkeit für Tiere. Die berichteten nicht-anästhetischen Fixationsmethoden weisen jedoch auch Einschränkungen auf, die in Tabelle 3 sorgfältig erörtert wurden.
In dieser Studie wird ein neuartiges Protokoll vorgestellt, das einen maßgeschneiderten Rattenmantel in Verbindung mit einem erhöhten Fixationsgestell einführt. Der entscheidende Aspekt dieses Protokolls besteht darin, Rattenjacken mit geeigneten Größen auf der Grundlage der Körperformen der Ratten herzustellen und sie entsprechend der spezifischen Position der zu nadelnden Akupunkturpunkte weiter anzupassen. Ein hilfreicher Tipp für das Anlegen der Rattenjacke ist, die natürliche Neigung der Ratte zur Dunkelheit und zum Wühlen zu nutzen, um sie zum Eindringen in die Kopfbedeckung zu ermutigen. Sobald der Kopf der Ratte gesichert ist, werden die nachfolgenden Fixierungsverfahren viel einfacher.
Nach adaptivem Training zeigten die Ratten minimale Beschwerden bei der Anwendung dieser Technik. Die erforderlichen Ausrüstungsmaterialien wie Stoffe, S-förmige Haken, Eisenstäbe und andere Materialien sind leicht zugänglich und kostengünstig, wodurch der Versuchsaufwand reduziert werden kann. Ein weiterer Vorteil ist, dass die Straffheit der Rattenjackengurte je nach Größe der Ratte angepasst werden kann, wodurch sie flexibel und kontrollierbar ist. Der gesamte Fixierungsvorgang kann von einer Person unabhängig durchgeführt werden, und die erhöhte Konfiguration des Geräts ermöglicht es den Forschern, eine Gruppe von Kleintieren gleichzeitig zu behandeln, wodurch die experimentelle Effizienz erheblich verbessert, der Zeitaufwand für das gesamte Experiment reduziert und Diskrepanzen zwischen derselben Gruppe von Tieren minimiert werden. Darüber hinaus macht die erhöhte Plattform einen Tisch überflüssig, da sie direkt auf ebenem Boden positioniert werden kann und so die Raumnutzung optimiert wird. Darüber hinaus können diese Designs für den Einsatz bei anderen Versuchstieren, wie z. B. Meerschweinchen, modifiziert und erweitert werden und können auch effektiv in der Moxibustionsbehandlung eingesetzt werden.
Eine mögliche Einschränkung dieses Ansatzes ist die Anforderung, dass die Forscher über ein hohes Maß an Kompetenz in dieser Technik verfügen müssen, sowie die Notwendigkeit, Rattenjacken mit unterschiedlichen Abmessungen herzustellen, die auf die Körperlänge und den Gliedmaßenabstand jeder Ratte zugeschnitten sind. Darüber hinaus ist es unvermeidlich, dass einige Ratten bei der ersten Exposition gegenüber dem Rattenmantel und der Aufhängungsfixierung leichte Beschwerden und Stress verspüren. Folglich ist es unerlässlich, ein adaptives Training für Ratten durchzuführen, die sich einer Elektroakupunkturbehandlung unterziehen. Darüber hinaus ist es unerlässlich, diese Ratten während des Eingriffs mit Vorsicht zu behandeln und sie bei Unruhe oder Nichteinhaltung sanft zu streicheln und zu beruhigen. Es ist erwähnenswert, dass, um die Auswirkungen des unvermeidlichen Stresses auf die körperliche Verfassung und die Verhaltensexperimente von Ratten zu minimieren, die Kontrollgruppe (einschließlich einer leeren Kontrollgruppe und einer Modellkontrollgruppe) zur gleichen Zeit wie die Elektroakupunktur-Behandlungsgruppe die gleiche Menge an Handhabung, Rattenmantelbindung und erhöhter Fixierung durchlaufen sollte. auch wenn sie keine Elektroakupunkturbehandlung erhalten.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass diese Fixationsmethode uns eine bequeme und effektive Möglichkeit zur Immobilisierung von Ratten bietet, die eine zuverlässige Garantie für einen stabilen und reibungslosen Akupunkturbetrieb und Nadelretentionsprozess gewährleistet.
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Disclosures
Alle Autoren haben erklärt, dass keine potenziellen Interessenkonflikte bestehen.
Acknowledgments
Die Autoren möchten sich bei der wissenschaftlichen Forschungszeichenplattform Figdraw des Home for Researchers für die Bereitstellung des Materials bedanken, das für die Erstellung von Abbildung 2 in diesem Artikel verwendet wurde, mit der autorisierten Lizenz-ID: URUUO5699e. Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse der National Natural Science Foundation of China (81873380, 82074566), der Natural Science Foundation of Hubei Province (2022CFCO43) und des National Famous Traditional Chinese Medicine Heritage Studio Construction Project der National Administration of Traditional Chinese Medicine ([2022] Nr. 5, [2022] Nr. 75) unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 75% alcohol | Shandong Lircon medical technology co., ltd | 2002-0059 | Disinfection |
| acupuncture needles | Beijing Luo ya shan chuan medical equipment co., Ltd. | needling | |
| Adult Sprague-Dawley (SD) rats | Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd. | SCXK 2020-0001 | The recipient subjected to fixation |
| an elevated fixation rack | Taizhou shiai instruments and equipments for scientific and teaching research Co., ltd | / | Fix rats |
| Hans electronic acupuncture apparatus | Beijing Huayun Ante Science and Technology Co. Ltd. | HANS-200A | electroacupuncture |
| Medical cotton ball | Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd. | 20172142357 | Disinfection |
| Pet electric clipper | Fenghua Xikou Lubao Knives & Scissors Electrical Appliance Factory | / | Shave the hair of rats |
| Tweezers | Qingdao Schultz Biotechnology Co., ltd | Pinch cotton balls |
References
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