Summary
כאן, אנו מציגים שיטת קיבוע מתלים משופרת באמצעות מעיל חולדות כדי לשתק חולדות ביעילות במהלך ניסויי דיקור. יתר על כן, המבנה והיישום של מנגנון קיבוע זה, כמו גם הוראות והערכה לשימוש בו בטיפול אלקטרואקופונקטורה, מובהר.
Abstract
במחקר ניסיוני בסיסי בדיקור, חולדות משמשות בדרך כלל כחיות מעבדה. עם זאת, קשה להם לשמור על יציבה קבועה. במהלך הליכי אלקטרואקופונקטורה, אימוביליזציה נכונה של חולדות היא חיונית. כיום נעשה שימוש בשיטות שונות של קיבוע חולדות, כולל קיבוע בהרדמה, קיבוע פלטפורמה גבוהה, קיבוע קשירה וקיבוע עם מעיל חולדה מתוצרת עצמית. עם זאת, שיטות אלה יש מגבלות שלהם, אשר עשויים להשפיע על יעילות ויכולת ההפעלה של הניסוי במידה מסוימת. פרוטוקול זה מציג שיטה להשעיה ותיקון של חולדות באמצעות בגדי חולדות. ראשית, חולדות לבושות במעילי חולדות התואמים את צורת גופן, תוך ניצול העדפתן לחושך ולהתחפרות. פעולת המחט יכולה להתבצע לאחר שהחולדות לבשו בגדי חולדות. כאשר הן מושעות, החולדות דוממות יחסית, מכיוון שגפיהן אינן יכולות לזוז. שיטת קיבוע זו מציעה לא רק יתרונות חסכוניים וידידותיים למשתמש, אלא גם מבטיחה קיבוע יציב ואמין של החולדות במצב רגוע ונוח. זה גם ממזער ביעילות את צריכת הזמן, שטח ניסיוני ומשאבי כוח אדם. בנוסף, שיטה זו מאפשרת חשיפה של רוב נקודות הדיקור המשמשות לדיקור סיני בחולדות. מאמר זה מתרכז בעיקר בהרכב המכשיר, הכולל מעיל חולדה שעוצב במיוחד, מתלה קיבוע מוגבה ומבני החיבור ביניהם. בנוסף, תוצג דוגמה להמחשה כדי להדגים את היישום של שיטת קיבוע תרחיף המבוססת על בגדי חולדות בהליכי דיקור אלקטרואקופונקטורה של חולדות.
Introduction
דיקור סיני הוא טיפול מסורתי המאופיין על ידי מחט בנקודות דיקור ספציפיות או עמדות אחרות כדי למנוע ולטפל במחלות. אלקטרואקופונקטורה משלבת מחטי פיליפורם עם גירוי חשמלי1, המאפשר שליטה מדויקת על כמות הגירוי על ידי התאמת פרמטרים רלוונטיים, ומקדם סטנדרטיזציהשל טיפול בדיקור 2. בשנים האחרונות, המחקר על מנגנוני הדיקור האלקטרואקופונקטורי המשיך להתרחב ולהעמיק 3,4, מה שהוביל לעלייה שנתית במחקרים המתמקדים במנגנוני אלקטרואקופונקטורה5.
במחקר בסיסי על אלקטרואקופונקטורה, חולדות הן החיות הנפוצות ביותר. במהלך טיפול אלקטרואקופונקטורה, על המושתל להישאר ללא תזוזה כדי להבטיח הליך חלק. שלא כמו בניסויים קליניים עם בני אדם, בעלי חיים קטנים המשמשים בניסויים בבעלי חיים אינם יכולים לעקוב אחר פקודות באופן מודע במהלך הליכי אלקטרואקופונקטורה ארוכים של 15-30 דקות. זה מציב בפני החוקרים אתגר עיקרי של השגת קיבעון יציב ואמין. קיבעון לא נכון עלול להוביל לרגשות שליליים כגון חרדה, דיכאון ופחד אצל בעלי חיים6, מה שלא רק מגביר את הסיכון לפגיעה בחולדות ואת הסיכוי להינשך עבור צוות הניסוי, אלא גם משפיע על היציבות והשכנוע של תוצאות המחקר.
במחקרים קודמים, חוקרים השתמשו לעתים קרובות בקיבוע הרדמה7, קיבוע פלטפורמה גבוהה8, קיבוע קשירה6,9, או קיבוע מעיל חולדה10 לפני פעולות דיקור או אלקטרואקופונקטורה. עם זאת, בהתחשב בהשפעות ההרדמה על הגוף11 ותפקוד המוח12, ובהתחשב בכך שדיקור סיני מבוצע על חולים בהכרה במקרים קליניים, הרדמה עשויה להשפיע במידה מסוימת על תוצאות המחקר. לכן, בהשוואה לקיבוע בהרדמה, קיבוע נוח של חולדות במצב ער הוא אפשרות טובה יותר.
עם זאת, במצב הלא מורדם, גם לשיטות קיבוע שונות יש מגבלות משלהן, כולל חשיפה מוגבלת לדיקור עקב כיסוי מעיל החולדה על חולדות 10, הצורך של לפחות שני פרטים לבצע את הפעולה13, קיבוע לא מתכוונן בגודל14, או מצב הלחץ של חולדות בתנוחה כפויה6. כדי לטפל בבעיות טכניות אלה, עיצבנו מעיל חולדה ומתלה קיבוע המתאים לטיפול בדיקור סיני ברוב חלקי גוף החולדה. זה יכול לעזור לחוקרים לבצע ביעילות הליכי דיקור עם חולדות.
הרציונל מאחורי פרוטוקול זה הוא כדלקמן: ראשית, כיסוי הראש הסגור על מעיל החולדה מנצל את הנטייה הטבעית של החולדות לחושך ולהתחפרות, ובכך מגביל את טווח פעילותן. שנית, חבלי הקשירה ליד מפרקי הגפיים של החולדות מספקים ריסון דחיסה פיזי, ומטילים מגבלות מסוימות על תנועותיהן. עם זאת, חולדות עדיין מסוגלות לקפוץ ולנוע אופקית אפילו בזמן שהן לובשות את הז'קט. לבסוף, מאחר שחולדות אינן יכולות לגעת בקרקע ללא נקודת כוח קבועה כאשר הן משעות, הוספנו מכשיר קיבוע מתלה למעיל החולדות, מה שהגביל עוד יותר את תנועותיהן והבטיח שימור מחטים. הרכב התקן הקיבוע מוצג באיור 1.
איור 1: תרשים סכמטי של מעיל החולדה וקיבוע התלייה. (A) המראה הכללי של מעיל החולדה במבט שטוח. (B) מבט תלת-ממדי על מעיל החולדה. (C) מעיל חולדה מותאם במיוחד עם חתך ליד נקודות הדיקור בראש ובגב. (D) איור של מספר חולדות התלויות בו זמנית על המדף המוגבה. 1: מבט כולל על בד; 2: שקע Forelimb; 3: מוצא גפיים אחוריות; 4: קשירת חבל; 5: חלל שנוצר לאחר תפירה; 6: חתך לחשיפת נקודות דיקור ראש; 7: חתך לחשיפת נקודות דיקור בגב ובמותניים. 8: תנוחת תפרים. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל ההליכים שנערכו על החולדות במחקר זה עמדו בתקן הלאומי להנחיות לרווחת חיות מעבדה ואתיקה (2018) שאומץ רשמית על ידי הרפובליקה העממית של סין והמדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה מהוצאת האקדמיות הלאומיות15. פרוטוקול זה מורכב משלושה שלבים עיקריים. ראשית, מעילי החולדות מותאמים ומותאמים על פי צורות הגוף האינדיבידואליות של חולדות במשקלים שונים. לאחר מכן, מניפולציה דיקור מתבצעת בעקבות הליכים סטנדרטיים. לבסוף, החולדות תלויות במעילים שלהן בזמן שהמחטים נשארות במקומן כדי לענות על הצורך בהתערבויות סימולטניות בקרב חולדות באותה קבוצה.
1. הכנה מראש מחט
- ייצור מעיל העכברוש
- שקלו את החולדות ומדדו את צורת הגוף שלהן לפני שאתם מכינים את המעילים שלהן. כדי לאמת את התאמתו של פרוטוקול זה לחולדות במשקלים שונים, בחרו חולדות במשקל 220 גרם, 300 גרם, 400 גרם ו-520 גרם למדידות עצמאיות של מידות הגוף שלהן, הכוללות מידות מ-a עד f, כפי שמתואר באיור 2.
הערה: המתאם בין פרופורציות הגוף של חולדות לבין מידות הז'קט התואמות שלהן מוצג גם באיור 2. הפרמטרים הרלוונטיים של אורך הגוף עבור חולדות במשקלים שונים נרשמים בטבלה 1. - גזרו פיסה מלבנית של בד עבה וכהה כדי ליצור מעיל עכברוש. השתמשו בבד ברוחב פתוח השווה להיקף הנמדד סביב החלק העבה ביותר של בטנה של החולדה. אורך הבד שווה למרחק שבין קצה האף של החולדה לבסיס הזנב שלה (ראו איור 2).
- קפלו את הבד לשניים וחתכו את הפינה השמאלית העליונה בזווית של כ-45°-65° ליצירת טרפז ימני (ראו איור 3A).
- תופרים את שני הצדדים משמאל בחוזקה עם חוט כותנה. עיינו באיור 1B ובאיור 3B לקבלת הדרכה.
- חתכו שני חורים קטנים, אחד בכל צד של הבד, כדי שהגפיים העליונות והתחתונות של החולדה יוכלו לעבור דרכם (ראו איור 3C). המרחק בין שתי הגפיים העליונות קובע את המרווח בין החורים העליונים של מעיל החולדה. המרחק בין שתי הגפיים התחתונות קובע את המרווח בין החורים התחתונים של מעיל החולדה.
- השתמש במרחק האורך בין בית השחי של החולדה לבין החלק הקדמי של האיליום כדי לשמש כמרווח בין החורים העליונים והתחתונים של מעיל החולדה. השתמש בהיקף של מפרק הכתף כדי לקבוע את היקף החור העליון במעיל החולדה. השתמש בהיקף של מפרק הירך עבור היקף החור התחתון במעיל החולדה.
- ליד כל חור, תפרו רצועת בד ארוכה שניתן לחצות ולכרוך בחוזקה סביב הגוף מהקצה הפותח של הז'קט כדי לתקן את החולדה.
- שקלו את החולדות ומדדו את צורת הגוף שלהן לפני שאתם מכינים את המעילים שלהן. כדי לאמת את התאמתו של פרוטוקול זה לחולדות במשקלים שונים, בחרו חולדות במשקל 220 גרם, 300 גרם, 400 גרם ו-520 גרם למדידות עצמאיות של מידות הגוף שלהן, הכוללות מידות מ-a עד f, כפי שמתואר באיור 2.
- שיטת לבישת מעיל עכברוש
- לבשו כפפות לפני שתמשיכו להלביש את החולדה בז'קט. התחילו בהחזקת החלק האמצעי והאחורי של מעיל החולדה ביד אחת על השולחן. ביד השנייה, החזיקו את זנב החולדה מכלוב ההאכלה שלה והכניסו אותו בעדינות לתוך הז'קט.
- כשהחולדה נעה קדימה, ראשה יגיע לכיסוי הראש של הז'קט. בשלב זה, השתמש בשתי ידיו כדי למשוך בזהירות את גפיו העליונות השמאלית והימנית מתוך החורים במעיל.
- קחו את חבל הקשירה מקצה הפתיחה של הז'קט, חצו אותו משמאל לימין וכרכו אותו היטב סביב תא המטען של החולדה. קשרו אותו בחוזקה בצד הנגדי של תא המטען כדי להבטיח קיבוע נכון. לאחר ריסון הגפיים העליונות של החולדה, חזרו על אותו הליך כדי לתקן את הגפיים התחתונות שלה.
- נקטו אמצעי זהירות כדי להימנע מנשיכה או שריטה על ידי ציפורני החולדה בעת משיכת איבריה מתוך חורי המעיל. ודאו שהידוק החבל מותאם כראוי, כלומר לא הדוק מדי כדי לגרום לאיסכמיה מקומית של הגפיים והיפוקסיה בחולדות, ולא רופף מדי, מה שמאפשר לחולדה לברוח בקלות (ראו סרטון 1).
- מתלה קיבוע ווים מברזל בצורת S
- מתלה הקיבוע מורכב משני מגשי ברזל כבדים (24 ס"מ אורך, 12 ס"מ רוחב ו-2 ס"מ גובה) ועמוד ברזל (60 ס"מ אורך) המרותך היטב על כל מגש. קבע מקל ברזל מוצק (145 ס"מ אורך) באותו גובה על שני עמודי הברזל באמצעות מבנה חיבור בורג שניתן לכוונן ולתחזק בגובה קבוע (ראה איור 4A).
- לחיבור החולדה הלובשת את הז'קט למקל הברזל, השתמשו בווים בצורת S (בקוטר 11 ס"מ). כרך קצה אחד של הוו סביב הרצועה על הז'קט בעוד הקצה השני תלוי על מקל הברזל. השתמשו בשני ווים בצורת S כדי להצמיד את החולדה למקל. אנא עיינו באיור 1D ובאיור 4B עבור המבנה הכולל.
איור 2: תרשים תואם של צורת הגוף של חולדה וגודל מעיל חולדה תואם. בתרשים, הפרמטר a מייצג את המרחק הרוחבי בחלק האחורי של המפרק בין הגפיים העליונות לתא המטען של החולדה. ערך זה משמש כמדידת הריווח בין החורים החודרים לגפיים העליונות של מעיל החולדה. באופן דומה, פרמטר b מייצג את המרחק הרוחבי בגב שבו הגפיים התחתונות הדו-צדדיות של החולדה מתחברות עם תא המטען. מדידה זו קובעת את המרווח בין החורים החודרים לגפיים התחתונות של מעיל החולדה. הפרמטר c מסמל את היקף החלק העבה ביותר בבטנה של החולדה, שניתן להשתמש בו כמדידת רוחב לבד מעיל החולדה. הפרמטר d מייצג את המרחק מבית השחי של החולדה לקדמת האיליום שלה, וקובע את המרחק האורכי בין החורים העליונים והתחתונים של הז'קט. הפרמטר e מתאים למרחק האורכי מקצה אפה של החולדה לבסיס זנבה, ומשמש כמדידת האורך של בד הז'קט של החולדה. הפרמטר f מציין את היקף המפרק המחבר בין הגפה העליונה לגזע החולדה, ומשמש כהיקף החור שדרכו עוברות הגפיים העליונות. הפרמטר g מייצג את היקף המפרק המחבר בין הגפיים התחתונות לתא המטען של החולדה, וקובע את היקף החור שדרכו עוברות הגפיים התחתונות. לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
| משקל גוף (g) | פרמטרים של צורת גוף (cm) | ||||||
| a | b | c | d | e | f | g | |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
טבלה 1. תוצאות המדידה של פרמטרים של צורת גוף של חולדות עם משקלי גוף שונים.
איור 3: דיאגרמה המתארת את המראה הפיזי של מעיל החולדה ואת השימוש בו . (A) מבט חיצוני מישורי על מעיל החולדה. צורת המעיל של החולדה דומה לטרפז ישר זווית, עם פתחים נפרדים בצד שמאל ובצד ימין כדי שהגפיים העליונות והתחתונות של החולדה יוכלו לעבור דרכם. (B) מבט חיצוני פתוח על מעיל החולדה. סגירת כיסוי הראש יוצרת חלל סגור למחצה, המשמש מרכיב חיוני לפיתוי חולדות להיכנס. (C) מבט מהצד על חולדה לבושה במעיל. ברגע שגפי החולדה עוברות דרך פתחי הבגדים, הרצועות מוצלבות על פני השטח הגחוני של תא המטען ומהודקות היטב מאחור במתח מתאים. זה מבטיח שהחולדה משותקת יחסית. (D) מבט בטני של חולדה לבושה במעיל חולדה. המשטח הגחוני של הז'קט חושף את עור הבטן של החולדה, ומאפשר גישה נוחה לדיקור סיני בנקודות הגחון. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
סרטון 1: לבישת מעיל העכברושים. סרטון זה מראה תהליך אופייני של הלבשת החולדה בז'קט. אנא לחץ כאן כדי להוריד סרטון זה.
איור 4: דיאגרמה המתארת את המראה הפיזי והשימוש במתלה הקיבוע המוגבה. (A) מתלה קיבוע מוגבה. מתלה זה מורכב בעיקר משני עמודי ברזל אנכיים (60 ס"מ אורך) המרותכים לכל מגש, יחד עם מוט ברזל אופקי ארוך (145 ס"מ אורך) הממוקם במקביל לקרקע. ברגים משמשים לאבטחת המקל האופקי באותו גובה כמו העמודים האנכיים. (B) מתלה חולדה על מתלה הקיבוע. חולדות שלובשות את מעילי החולדות מהודקות היטב למתלה הקיבוע באמצעות שני ווים בצורת S לכל חולדה. (C) טיפול סימולטני בדיקור חשמלי במספר חולדות. כדי למנוע הפרעות פוטנציאליות כתוצאה מתנועת הזנב, היה צורך לשמור על ריווח נכון בין החולדות, שווה ערך לאורך זנבה של חולדה. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
2. הליך אלקטרואקופונקטורה
- הכנה שגרתית
- הנח את מדף הקיבוע על שולחן עבודה אופקי או על הארקה.
- לפני הליך המחט, הסר את הפרווה סביב נקודות הדיקור באמצעות מכונת גילוח חשמלית כדי להבטיח חשיפה מלאה. כאשר נקודת הדיקור שיש לנקב ממוקמת על בטנה של החולדה, כגון Guanyuan (CV4, כ-25 מ"מ מתחת לטבור), קצרו את רוחב בגדי החולדה כראוי כדי לחשוף נקודות דיקור בבטן.
- אתרו את נקודת הדיקור מהרווח בקו האמצע של הבטן שאינו מכוסה על-ידי מעיל החולדה (ראו איור 3D) ואז הזריקו את המחט.
- כאשר נקודות הדיקור שיש לנקב נמצאות על ראשה של חולדה, כמו למשל Baihui (GV20, הממוקם במרכז עצם הקודקוד), בצעו חתך קטן במיקום המתאים על הראש כדי לחשוף באופן מלא את העור סביב GV20 (ראו איור 1C).
- בעת דיקור נקודות דיקור בגפיים של חולדות, כגון Neiguan (PC6, בצד הפנימי של הגפה הקדמית, בין התפרים הרדיאליים והאולנאריים במרחק של כ-3 מ"מ ממפרק שורש כף היד) בגפה העליונה או Zusanli (ST36, בצד האחורי של מפרק הברך, כ-2 מ"מ מתחת לראש הפיבולה) בגפה התחתונה, בשל החשיפה הברורה של נקודות הדיקור, השתמש ביד אחת כדי לסייע בקיבוע האיבר, בעוד היד השנייה יכולה לבצע ישירות את פעולת הדיקור.
- כאשר נקודת הדיקור ממוקמת על הגב או המותניים של חולדה, כמו שנשו (BL23, מתחת לחוליות המותניות ה-2, במרחק של 6 מ"מ מקו האמצע של הגב), חתכו פתח ברוחב של כ-2 ס"מ במרכז הז'קט של החולדה כדי לחשוף באופן מלא את העור של האתר המתאים (ראו איור 1C).
- הלבישו את החולדה בז'קט. לאחר חיטוי העור המקומי של נקודות דיקור עם מקלוני אלכוהול, להתחיל את הליך הדיקור.
- טכניקת מחטים: אתר את נקודת הדיקור במדויק. הכנס מחט דיקור חד פעמית סטרילית (0.16 מ"מ x 7 מ"מ) לתוך נקודת הדיקור של החולדה בעומק המתאים.
- פעולת אלקטרואקופונקטורה
- עטפו את חוט האלקטרודה סביב מוט הברזל האופקי. שלב זה מפחית את הסיכון לנשירת המחט עקב כוח הכבידה הפועל על תפס הדיקור החשמלי. לאחר מכן, חבר את קצה חוט האלקטרודה בבטחה לידית המחט.
- הפעל את החשמל ובחר את פרמטרי התדר, הזרם והשעה המתאימים. בניסוי זה, הפרמטרים הוגדרו ל-2 הרץ, 1 mA ו-15 דקות. לאחר התאמת הפרמטרים, התחל בתהליך הטיפול באלקטרואקופונקטורה (ראה סרטון 2 וסרטון 3).
- דיקור אלקטרואקופונקטורי סימולטני בחולדות: במהלך הטיפול, השעו את החולדות באותה קבוצה יחד על מקל הברזל באמצעות ווים בצורת S ותנו להן לעבור התערבות אלקטרואקופונקטורה בו זמנית.
- הערה: מקל הברזל צריך להיות לא רק חסון, אלא גם ארוך מספיק כדי לטפל בקבוצה של חולדות בו זמנית. בניסוי הזה, תוך הבטחת ריווח מתאים וללא הפרעה בין החולדות, ניתן לטפל ב-3-4 חולדות בו זמנית (ראו איור 4C).
- תצפית על תגובות חולדות במהלך טיפול בדיקור חשמלי: להעריך את התאמתה של שיטת קיבוע זו לדיקור חשמלי בחולדות בהתבסס על הגורמים הבאים, כגון מספר אנשי הצוות הדרושים להשלמת הניתוח, הזמן שנדרש לתיקון חולדה, תגובת החולדות במהלך הטיפול באלקטרואקופונקטורה, מספר המחטים שנפלו במהלך ההליך וכל מוות מקרי שעלול להתרחש במהלך הניתוח.
- הסרת המחטים
- לאחר השלמת הזמן שנקבע מראש, מכשיר הדיקור החשמלי יכבה אוטומטית. הסירו את האטב הקטן המחובר לידית המחט והוציאו בזהירות את מחט הדיקור מתחת לעורה של החולדה, ובכך סיימו את תהליך הטיפול בדיקור חשמלי.
- שחררו את הרצועות, הרימו את כיסוי הראש של מעיל החולדה ומקמו את החולדה מעל הכלוב. לאחר מכן החולדה תהיה חופשייה להשתחרר מהמעיל ולהיכנס לכלוב באופן עצמאי (ראו סרטון 4).
וידאו 2. דיקור דיקור באזור המותני. סרטון זה מדגים את ההליך המקיף והקוהרנטי הכולל את לבוש החולדה בז'קט, החדרת מחטי דיקור לנקודות דיקור במותניים, והחיבור הבא של מכשיר אלקטרואקופונקטורה. אנא לחץ כאן כדי להוריד סרטון זה.
וידאו 3. דיקור נקודות דיקור בבטן ובגפה התחתונה. סרטון זה מדגים את ההליך המקיף והקוהרנטי הכולל את לבוש החולדה בז'קט, החדרת מחטי דיקור לנקודות דיקור הממוקמות בבטן ובגפה התחתונה, והחיבור הבא של מכשיר אלקטרואקופונקטורה. אנא לחץ כאן כדי להוריד סרטון זה.
וידאו 4. הסרת מעיל החולדה. סרטון זה מציג את המנהג המקובל להסיר את המעיל מהחולדה. אנא לחץ כאן כדי להוריד סרטון זה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
בניסוי זה נבחרו בסך הכל 12 חולדות לטיפול באלקטרואקופונקטורה, ונצפו תגובותיהן בשיטת הקיבוע (כפי שמוצג בטבלה 2). מבין 12 החולדות, רק חולדה אחת הפגינה מאבק עז במהלך תקופת שימור מחטי הדיקור החשמלי שנמשכה 15 דקות. כתוצאה מתנועותיה הנמרצות, המחט ירדה באמצע הדרך, והיוותה 8.33% מכלל החולדות. תוצאה זו מצביעה על כך ששיטת הקיבוע בה נעשה שימוש מפגינה בדרך כלל מידה ניכרת של יציבות ומהימנות. למרות המאבק שהפגינה חולדה אחת, רוב החולדות בקבוצה שמרו על קיבוע מחטים תקין לאורך כל הטיפול. יתר על כן, במהלך תקופת הניסוי בת החודשיים שבה נעשה שימוש בשיטה זו כדי לשתק חולדות לצורך טיפול בדיקור חשמלי, לא נרשמו מקרים של תמותת חולדות, דבר המצביע על הבטיחות של שיטת קיבוע זו עבור חולדות.
בנוסף, בטבלה 3 השווינו שיטת קיבוע זו לארבע שיטות אחרות שדווחו בספרות 9,10,13,14. ראשית, מבחינת יציבות, מלבד היציבות המעט נחותה של השיטה החמישית באמצעות קיבוע מחזיק חולדות שזה עתה נוצר, השיטות האחרות השיגו קיבוע בטוח יחסית. מבחינת זמן, הזמן הממוצע שנדרש כדי לתקן חולדה אחת בשיטה זו היה קצר יותר מזה של שיטת קיבוע מעיל החולדה. שאר השיטות לא ציינו את הזמן הדרוש לקיבוע במאמרים שלהן; לכן, לא מתקיים דיון. מבחינת מספר כוח האדם הנדרש לתיקון חולדה אחת, הן שיטה זו והן שיטת מתלה מעיל החולדה דרשו רק אדם אחד כדי להשלים את הפעולה, ובכך שיפרו את יעילות הניסוי. עם זאת, מבחינת טווח הדיקור החשוף, מעיל החולדה שעוצב במיוחד בפרוטוקול זה יכול לעמוד בדרישות לחשיפת רוב נקודות הדיקור בגוף, בעוד מעיל החולדה בשיטת מתלה הנדנדה חושף בעיקר את הגפיים. באשר לחומרים המשמשים לקיבוע, החומרים הדרושים לשיטה זו קלים יחסית להשגה הן בתנאי מעבדה והן בסביבה יומיומית. יתר על כן, מבחינת תנוחת החולדה בזמן הקיבוע, התנוחה הטבעית כנראה נוחה יותר מהתנוחה הכפויה. בסך הכל, שיטה זו דומה לשיטת קיבוע מתלי הנדנדה של מעיל חולדה, אך היא הביאה לשיפור ממוקד בבד ובעיצוב מעיל החולדה, מה שמאפשר חשיפה רבה יותר של נקודות דיקור בגוף. יתר על כן, בהשוואה לתלייה על רצועת בד, פרוטוקול זה משתמש בצינורות פלדה חזקים יותר, אשר מפחיתים את ההשפעות השליליות הנגרמות על ידי טלטול אלים של חולדות בודדות על חולדות אחרות כאשר חולדות מרובות עוברות בו זמנית טיפול אלקטרואקופונקטורה על מדף הקיבוע. זה מבטיח את היציבות והאמינות של נתונים ניסיוניים.
בהתחשב בגורמים הנ"ל באופן קולקטיבי, גישה זו מציגה את היתרונות של יציבות, יעילות, מחיר סביר ונוחות יחסית עבור חולדות, מה שהופך אותה לאפשרות בעלת ערך לקיבוע מחטים.
| שיטת קיבוע | מספר החולדות הנאבקות | אחוז החולדות הנאבקות (%) | מספר חולדות עם נפילת מחט במהלך הטיפול | אחוז החולדות עם נפילת מחט במהלך הטיפול (%) | מספר החולדות מתו במהלך המבצע | אחוז החולדות מתו במהלך הניתוח(%) |
| קיבוע מתלים קשור לקבוצת ז'קט | 1 | 8.33 | 1 | 8.33 | 0 | 0 |
טבלה 2. תגובה של חולדות קבועות במהלך טיפול אלקטרואקופונקטורה (n = 12).
| מספר סידורי | שיטת קיבוע | האם קיבוע חולדות יציב ובטוח | הזמן הדרוש כדי לתקן חולדה | מספר כוח האדם הדרוש לתיקון חולדה | המיקום והמגוון של נקודות הדיקור שניתן לחשוף | נגישות גופי תאורה או חומרים | נוחות של שיטות קבועות עבור חולדות: עמדה טבעית או מאולצת | הפניות | |||||||||||||||
| 1 | קיבוע מתלים קשור בז'קט בניסוי שלנו | √ | 50-63 שניות | 1 | בטן, ראש, גב ומותניים, גפיים | זמין | מיקום טבעי | ||||||||||||||||
| 2 | מסגרת קיבוע לדיקור ומוקסיבציה לשילוב נקודות דיקור Shu-Mu (בחירת אקופוינט המשלבת את נקודות האזעקה עם נקודות ההובלה האחוריות) | √ | / | / | ראש, גפיים, גב ומותניים | מסגרת הקיבוע צריכה להיות מותאמת אישית | עמדה מאולצת | 9 | |||||||||||||||
| 3 | שיטת קיבוע של חולדות מתנדנדות קשורות בפרווה | √ | 85-93 שניות | 1 | חלקי גפיים | זמין | מיקום טבעי | 10 | |||||||||||||||
| 4 | מתקן קיבוע חולדות עשוי מכיסוי כלוב ישן ומרושת | √ | / | ≥2 | טווח הדיקורים אינו מוגבל | זמין | עמדה מאולצת | 13 | |||||||||||||||
| 5 | מחזיק חולדות שזה עתה יוצר | לאחר הקיבוע, הגפיים הקדמיות והאחוריות של החולדות עדיין יש מידה מסוימת של ניידות. יתר על כן, קיים סיכון מסוים שנקודת ההצטלבות של מוט קיבוע הצוואר בחולדות עלולה להיות גבוהה מדי, מה שעלול להוביל לחנק בחולדות. אם הוא נמוך מדי, תיקון הראש של חולדות עשוי להיות לא יציב. | / | / | טווח הדיקורים אינו מוגבל | מחזיק חולדות דורש התאמה אישית מיוחדת | מיקום טבעי | 14 | |||||||||||||||
טבלה 3. תוצאות השוואה של שיטות קיבוע שונות בניסוי דיקור חולדות ומוקסיבציה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
אלקטרואקופונקטורה הוכחה כבעלת השפעות טיפוליות טובות על מחלות שונות כגון פגיעה קוגניטיבית 16,17, פגיעה בשריר הלב18 וכאב דלקתי19. כדי להבין את מנגנון הפעולה שלה, נערכו ניסויים בבעלי חיים בעיקר באמצעות חולדות. קיבוע בעלי החיים במהלך ההליכים הוא קריטי לתוצאות מדויקות. בעוד שמחקרים רבים נתנו אלקטרואקופונקטורה לאחר הרדמה של בעלי חיים, פרקטיקה זו עלולה לעכב את תפקוד המוח ולפגוע בדיוק הניסוי. יתר על כן, מתן ארוך טווח של הרדמה מאריך את הליך המחט ומגביר את סיכויי התמותה של בעלי חיים. עם זאת, לשיטות הקיבוע הלא-הרדמה המדווחות יש גם מגבלות, שנדונו בקפידה בטבלה 3.
מחקר זה מציג פרוטוקול חדשני המציג מעיל חולדות בהתאמה אישית בשילוב עם מתלה קיבוע מוגבה. ההיבט המכריע של פרוטוקול זה כרוך ביצירת מעילי חולדות בגדלים מתאימים המבוססים על צורות הגוף של החולדות והתאמה אישית נוספת שלהן בהתאם למיקום הספציפי של נקודות הדיקור שיש לחטב. טיפ מועיל להתאמת מעיל החולדה הוא לנצל את הנטייה הטבעית של החולדה לכהות ולהתחפרות כדי לעודד אותה להיכנס לכיסוי הראש. ברגע שראשה של החולדה מאובטח, הליכי הקיבוע הבאים הופכים לפשוטים הרבה יותר.
לאחר אימון הסתגלותי, החולדות הפגינו אי נוחות מינימלית בזמן השימוש בטכניקה זו. חומרי הציוד הנדרשים, כגון בדים, ווים בצורת S, מקלות ברזל וחומרים אחרים, נגישים וחסכוניים, ובכך מאפשרים הפחתה בהוצאות הניסוי. יתרון נוסף הוא שניתן לכוונן את ההידוק של רצועות מעיל החולדה בהתאם לגודל החולדה, מה שהופך אותו לגמיש וניתן לשליטה. פעולת הקיבוע כולה יכולה להסתיים על ידי אדם אחד באופן עצמאי, והתצורה המוגבהת של המכשיר מאפשרת לחוקרים לטפל בקבוצה של בעלי חיים קטנים בו זמנית, ובכך לשפר משמעותית את יעילות הניסוי, להפחית את הזמן המושקע בניסוי כולו, ולמזער פערים בין אותה קבוצת בעלי חיים. יתר על כן, הפלטפורמה המוגבהת מייתרת את הצורך בשולחן, שכן ניתן למקם אותה ישירות על קרקע מישורית, ובכך לייעל את הניצול המרחבי. בנוסף, עיצובים אלה יכולים להשתנות ולהיות מורחבים לשימוש בחיות ניסוי אחרות, כגון שרקנים, וניתן גם להשתמש בהם ביעילות בטיפול במוקסיבציה.
אחד האילוצים האפשריים של גישה זו הוא הדרישה מהחוקרים להיות בעלי רמה גבוהה של מיומנות בטכניקה, כמו גם הצורך ליצור מעילי חולדות בממדים שונים המותאמים לאורך הגוף של כל חולדה ולמרווח הגפיים שלה. בנוסף, זה בלתי נמנע שחלק מהחולדות עשויות לחוות אי נוחות קלה ולחץ עם החשיפה הראשונית למעיל החולדה וקיבוע התלייה. כתוצאה מכך, זה הופך להיות הכרחי ליישם אימון אדפטיבי עבור חולדות העוברות טיפול אלקטרואקופונקטורה. יתר על כן, חובה לטפל בחולדות אלה בזהירות במהלך ההליך, תוך שימוש בליטוף עדין כדי להרגיע ולהרגיע אותן במקרים של אי היענות או אי ציות. ראוי לציין כי כדי למזער את ההשפעה של לחץ בלתי נמנע על המצב הפיזי וניסויים התנהגותיים של חולדות, קבוצת הביקורת (כולל קבוצת ביקורת ריקה וקבוצת ביקורת מודל) צריכה גם לעבור את אותה כמות טיפול, קשירת מעיל חולדה, וקיבוע מוגבר במקביל לקבוצת הטיפול בדיקור חשמלי, גם אם הם לא מקבלים טיפול אלקטרואקופונקטורה.
לסיכום, שיטת קיבוע זו מספקת לנו אפשרות נוחה ויעילה להשתקת חולדות, מה שמבטיח ערובה אמינה לפעולת דיקור יציבה וחלקה ולתהליך שימור מחטים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
כל המחברים לא הצהירו על ניגודי עניינים פוטנציאליים.
Acknowledgments
המחברים רוצים להביע את תודתם לפלטפורמת ציור המחקר המדעי Figdraw של הבית לחוקרים על שסיפקה את החומר ששימש ליצירת איור 2 במאמר זה, עם מזהה רישיון מורשה: URUUO5699e. עבודה זו קיבלה תמיכה ממענקים הניתנים על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81873380, 82074566), הקרן למדעי הטבע של מחוז חוביי (2022CFCO43), ופרויקט הבנייה הלאומי המפורסם של הסטודיו למורשת הרפואה הסינית המסורתית של המנהל הלאומי לרפואה סינית מסורתית ([2022] מס '5, [2022] מס '75).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 75% alcohol | Shandong Lircon medical technology co., ltd | 2002-0059 | Disinfection |
| acupuncture needles | Beijing Luo ya shan chuan medical equipment co., Ltd. | needling | |
| Adult Sprague-Dawley (SD) rats | Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd. | SCXK 2020-0001 | The recipient subjected to fixation |
| an elevated fixation rack | Taizhou shiai instruments and equipments for scientific and teaching research Co., ltd | / | Fix rats |
| Hans electronic acupuncture apparatus | Beijing Huayun Ante Science and Technology Co. Ltd. | HANS-200A | electroacupuncture |
| Medical cotton ball | Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd. | 20172142357 | Disinfection |
| Pet electric clipper | Fenghua Xikou Lubao Knives & Scissors Electrical Appliance Factory | / | Shave the hair of rats |
| Tweezers | Qingdao Schultz Biotechnology Co., ltd | Pinch cotton balls |
References
- Liu, Z., et al. Effect of Electroacupuncture on Urinary Leakage Among Women With Stress Urinary Incontinence: A Randomized Clinical Trial. The Journal of the American Medical Association. 317 (24), 2493-2501 (2017).
- Tsuei, J. J.
- Liu, S., et al. Somatotopic Organization and Intensity Dependence in Driving Distinct NPY-Expressing Sympathetic Pathways by Electroacupuncture. Neuron. 108 (3), 436-450 (2020).
- Liu, S., et al. A neuroanatomical basis for electroacupuncture to drive the vagal-adrenal axis. Nature. 598 (7882), 641-645 (2021).
- Li, X., Wei, W., Wang, Y., Wang, Q., Liu, Z. Global Trend in the Research and Development of Acupuncture Treatment on Parkinson's Disease From 2000 to 2021: A Bibliometric Analysis. Frontiers In Neurology. 13, 906317 (2022).
- Jiang, S., et al. Application Progress of fixation methods for rodents under non anesthesia in acupuncture and moxibustion experiments domestically and abroad. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 40 (12), 1509-1514 (2021).
- Jiang, H. Z., et al. Fixation method in the study of acupuncture intervention on rats. Journal of Shanxi College of Traditional Chinese Medicine. 20 (3), 169-171 (2019).
- Wang, Y., Ning, Y., Wang, P. Y., Yang, Y. Q. Method of Placing a Rat on an Elevated Platform for Acupuncture. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 31 (5), 289-292 (2012).
- Wang, F., Xiong, J., Zeng, F., He, Z. X. A fixation frame for acupuncture and moxibustion of Shu-Mu acupoint combination in rats. Acupuncture Research. 47 (10), 938-940 (2022).
- Tu, S., P, C., Y, Y. H. Fixation method for needle warming moxibustion treatment on swinging rats bound with coat. Chinese Journal of Comparative Medicine. 31 (5), 128-132 (2021).
- Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Influence of anesthetic agent, depth of anesthesia and body temperature on cardiovascular functional parameters in the rat. Laboratory Animals. 48 (1), 6-14 (2014).
- Kiyatkin, E. A., Brown, P. L. Brain and body temperature homeostasis during sodium pentobarbital anesthesia with and without body warming in rats. Physiology & Behavior. 84 (4), 563-570 (2005).
- He, C., Zhang, C., Zhou, S., Fan, Y. Using old meshy cage cover to make a rat fixating device for acupuncture study. Acupuncture Research. 46 (4), 348-350 (2021).
- Li, Y., Lin, N., Huang, Y., Xue, X., Liu, Q. A Newly-made Rat Holder for Convenient Acupuncture Needle Insertion. Acupuncture Research. 41 (5), 466-468 (2016).
- Bielitzki, J. T., Barbee, R. W., Garber, J. Guide for the care and use of laboratory animals. 85 (3), National Academies Press (U.S.). NIH Publication No 85-23(rev) 963-965 (2011).
- Zheng, X., et al. Electroacupuncture ameliorates beta-amyloid pathology and cognitive impairment in Alzheimer disease via a novel mechanism involving activation of TFEB (transcription factor EB). Autophagy. 17 (11), 3833-3847 (2021).
- Su, X., et al. Effectiveness and Safety of Acupuncture for Vascular Cognitive Impairment: A Systematic Review and Meta-Analysis. Frontiers In Aging Neuroscience. 13, 692508 (2021).
- Wang, Q., et al. Efficacy of electroacupuncture pretreatment for myocardial injury in patients undergoing percutaneous coronary intervention: A randomized clinical trial with a 2-year follow-up. International Journal of Cardiology. 194, 28-35 (2015).
- Zhang, R., Lao, L., Ren, K., Berman, B. M. Mechanisms of acupuncture-electroacupuncture on persistent pain. Anesthesiology. 120 (2), 482-503 (2014).
