Summary
Qui, presentiamo un metodo di fissaggio della sospensione migliorato utilizzando una giacca di ratto per immobilizzare efficacemente i ratti durante gli esperimenti di agopuntura. Inoltre, viene chiarita la struttura e l'applicazione di questo apparecchio di fissazione, nonché le istruzioni e la valutazione per il suo utilizzo nella terapia di elettroagopuntura.
Abstract
Nella ricerca sperimentale di base sull'agopuntura, i ratti sono comunemente usati come animali da laboratorio. Tuttavia, è difficile per loro mantenere una postura fissa. Durante le procedure di elettroagopuntura, è essenziale una corretta immobilizzazione dei ratti. Attualmente vengono utilizzati vari metodi di fissazione dei ratti, tra cui la fissazione per anestesia, la fissazione a piattaforma alta, la fissazione vincolante e la fissazione con un cappotto per ratti autocostruito. Tuttavia, questi metodi hanno i loro limiti, che possono influenzare in una certa misura l'efficienza e l'operabilità dell'esperimento. Questo protocollo introduce un metodo per sospendere e fissare i ratti usando vestiti per topi. In primo luogo, i ratti sono vestiti con giacche da topo che si adattano alla forma del loro corpo, approfittando della loro preferenza per l'oscurità e la tana. L'operazione di agugliatura può quindi essere eseguita dopo che i ratti hanno indossato abiti per topi. Quando sono sospesi, i ratti sono relativamente immobili, poiché i loro arti non possono muoversi. Questo metodo di fissaggio offre non solo vantaggi economici e facili da usare, ma garantisce anche una fissazione stabile e affidabile dei ratti in una posizione comodamente rilassata. Inoltre, riduce al minimo il consumo di tempo, lo spazio sperimentale e le risorse di manodopera. Inoltre, questo metodo consente l'esposizione della maggior parte dei punti di agopuntura utilizzati per l'agopuntura nei ratti. Questo articolo si concentra principalmente sulla composizione del dispositivo, che comprende una giacca per topi appositamente progettata, un rack di fissaggio rialzato e le loro strutture di collegamento. Inoltre, verrà presentato un esempio illustrativo per dimostrare l'applicazione del metodo di fissazione della sospensione basato su indumenti per ratti nelle procedure di elettroagopuntura per ratti.
Introduction
L'agopuntura è una terapia tradizionale caratterizzata dall'agugliatura in punti di agopuntura specifici o in altre posizioni per prevenire e curare le malattie. L'elettroagopuntura combina aghi filiformi con la stimolazione elettrica1, che consente un controllo preciso sulla quantità di stimolazione regolando i parametri rilevanti, promuovendo la standardizzazione del trattamento di agopuntura2. Negli ultimi anni, la ricerca sui meccanismi dell'elettroagopuntura ha continuato ad espandersi e approfondire3,4, il che ha portato a un aumento annuale degli studi incentrati sui meccanismi dell'elettroagopuntura5.
Nella ricerca di base sull'elettroagopuntura, i ratti sono gli animali più comunemente usati. Durante il trattamento di elettroagopuntura, il ricevente deve rimanere fermo per garantire una procedura senza intoppi. A differenza degli studi clinici su soggetti umani, i piccoli animali utilizzati negli esperimenti sugli animali non possono seguire consapevolmente i comandi durante le procedure di elettroagopuntura della durata di 15-30 minuti. Ciò pone i ricercatori di fronte a una sfida primaria per ottenere una fissazione stabile e affidabile. Una fissazione impropria può portare a emozioni negative come ansia, depressione e paura negli animali6, il che non solo aumenta il rischio di lesioni per i ratti e la possibilità di essere morsi per il personale sperimentale, ma influisce anche sulla stabilità e sulla persuasività dei risultati della ricerca.
In studi precedenti, i ricercatori hanno spesso utilizzato la fissazione per anestesia7, la fissazione a piattaforma alta8, la fissazione vincolante 6,9 o la fissazione a cappotto di ratto10 prima delle operazioni di agopuntura o elettroagopuntura. Tuttavia, dati gli effetti dell'anestesia sul corpo11 e sulla funzione cerebrale12, e considerando che l'agopuntura viene eseguita su pazienti coscienti in casi clinici, l'anestesia può avere un impatto sui risultati della ricerca in una certa misura. Pertanto, rispetto alla fissazione dell'anestesia, la fissazione confortevole dei ratti in uno stato di veglia è un'opzione migliore.
Tuttavia, nello stato non anestetizzato, vari metodi di fissazione possiedono anche le rispettive limitazioni, tra cui l'esposizione limitata dei punti di agopuntura a causa della copertura del mantello del ratto sui ratti 10, la necessità di almeno due individui per eseguire l'operazione13, la dimensione del fissatore non regolabile14 o lo stato di stress dei ratti in posizione forzata6. Per risolvere questi problemi tecnici, abbiamo progettato una giacca per ratti e una rastrelliera di fissaggio adatta alla manipolazione dell'agopuntura nella maggior parte delle parti del corpo del ratto. Questo può aiutare i ricercatori a eseguire in modo efficiente le procedure di agopuntura con i ratti.
La logica di questo protocollo è la seguente: in primo luogo, il copricapo chiuso sulla giacca del ratto sfrutta la naturale inclinazione dei ratti per l'oscurità e la tanta, limitando così il loro raggio d'azione. In secondo luogo, le corde di legatura vicino alle articolazioni degli arti dei ratti forniscono un contenimento fisico della compressione, imponendo alcune limitazioni ai loro movimenti. Tuttavia, i ratti sono ancora in grado di saltare e muoversi orizzontalmente anche indossando la giacca. Infine, poiché i ratti non possono toccare il suolo senza un punto di forza fisso quando sono sospesi, abbiamo aggiunto un dispositivo di fissaggio della sospensione alla giacca del ratto, limitando ulteriormente i loro movimenti e garantendo la ritenzione dell'ago. La composizione del dispositivo di fissaggio è mostrata nella Figura 1.
Figura 1: Diagramma schematico della giacca di ratto e del fissaggio della sospensione. (A) L'aspetto generale della giacca di ratto in una vista piana. (B) Vista tridimensionale della giacca del ratto. (C) Giacca da ratto appositamente confezionata con un'incisione vicino ai punti di agopuntura sulla testa e sulla vita posteriore. (D) Illustrazione di più ratti sospesi simultaneamente sulla rastrelliera sopraelevata. 1: Vista d'insieme del tessuto; 2: Uscita degli arti anteriori; 3: Uscita degli arti posteriori; 4: Corda di legatura; 5: Cavità formatasi dopo la sutura; 6: Incisione per esporre i punti di agopuntura della testa; 7: Incisione per esporre i punti di agopuntura della schiena e della vita. 8: Posizione di sutura. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
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Protocol
Tutte le procedure condotte sui ratti in questo studio hanno aderito allo standard nazionale per il benessere degli animali da laboratorio e alle linee guida per la revisione dell'etica (2018) ufficialmente adottate dalla Repubblica popolare cinese e alla Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio della National Academies Press15. Questo protocollo è composto da tre fasi principali. In primo luogo, le giacche da ratto sono su misura e aderenti in base alle forme individuali del corpo dei ratti con pesi diversi. Successivamente, la manipolazione dell'agopuntura viene eseguita seguendo le procedure standard. Infine, i ratti sono sospesi nelle loro giacche mentre gli aghi rimangono in posizione per soddisfare la necessità di interventi simultanei tra i ratti all'interno dello stesso gruppo.
1. Preparazione pre-needling
- Produzione della giacca da topo
- Pesa i ratti e misura la loro forma del corpo prima di realizzare le loro giacche. Per verificare l'idoneità di questo protocollo per ratti di peso variabile, selezionare ratti di peso 220 g, 300 g, 400 g e 520 g per misurazioni indipendenti delle loro dimensioni corporee, comprese le misurazioni da a a f, come illustrato nella Figura 2.
NOTA: La correlazione tra le proporzioni corporee dei ratti e le corrispondenti taglie del rivestimento è presentata anche nella Figura 2. I parametri relativi alla lunghezza corporea per i ratti di peso diverso sono riportati nella tabella 1. - Taglia un pezzo rettangolare di tessuto spesso e scuro per creare una giacca da topo. Usa il tessuto con una larghezza spiegata uguale alla circonferenza misurata intorno alla parte più spessa dell'addome del ratto. La lunghezza del tessuto è uguale alla distanza dalla punta del naso del ratto alla base della coda (vedi Figura 2).
- Piega il tessuto a metà e taglia l'angolo in alto a sinistra con un angolo di circa 45°-65° per formare un trapezio destro (vedi Figura 3A).
- Cuci bene i due lati a sinistra con un filo di cotone. Fare riferimento alla Figura 1B e alla Figura 3B per indicazioni.
- Praticare due piccoli fori, uno su ciascun lato del tessuto, per far passare gli arti superiori e inferiori del ratto (vedi Figura 3C). La distanza tra i due arti superiori determina la distanza tra i fori superiori della giacca di ratto. La distanza tra i due arti inferiori determina la distanza tra i fori inferiori della giacca di ratto.
- Usa la distanza longitudinale tra l'ascella del ratto e la parte anteriore dell'ileo per fungere da distanza tra i fori superiore e inferiore della giacca del ratto. Usa la circonferenza dell'articolazione della spalla per determinare la circonferenza del foro superiore nella giacca del topo. Usa la circonferenza dell'articolazione dell'anca per la circonferenza del foro inferiore nella giacca del topo.
- Accanto a ogni foro, cuci una lunga cinghia di stoffa che può essere incrociata e avvolta strettamente intorno al corpo dall'estremità di apertura della giacca per fissare il topo.
- Pesa i ratti e misura la loro forma del corpo prima di realizzare le loro giacche. Per verificare l'idoneità di questo protocollo per ratti di peso variabile, selezionare ratti di peso 220 g, 300 g, 400 g e 520 g per misurazioni indipendenti delle loro dimensioni corporee, comprese le misurazioni da a a f, come illustrato nella Figura 2.
- Metodo di indossare la giacca del topo
- Indossa i guanti prima di procedere a vestire il topo con la giacca. Inizia tenendo la parte centrale e posteriore della giacca da topo con una mano sul tavolo. Con l'altra mano, tieni la coda del topo dalla sua gabbia di alimentazione e posizionala delicatamente nella giacca.
- Mentre il topo si muove in avanti, la sua testa raggiungerà il copricapo della giacca. A questo punto, usa entrambe le mani per estrarre con cautela gli arti superiori sinistro e destro dai fori della giacca.
- Prendi la corda da legare dall'estremità di apertura della giacca, incrociala da sinistra a destra e avvolgila saldamente attorno alla proboscide del topo. Legarlo saldamente sul lato opposto del tronco per garantire un corretto fissaggio. Dopo aver trattenuto gli arti superiori del ratto, ripetere la stessa procedura per fissare gli arti inferiori.
- Prendi precauzioni per evitare di essere morso o graffiato dagli artigli del ratto quando tiri fuori i suoi arti dai fori della giacca. Assicurarsi che la tenuta della corda sia regolata in modo appropriato, cioè non troppo tesa da causare ischemia locale degli arti e ipossia nei ratti, e non troppo allentata, consentendo al ratto di fuggire facilmente (vedi Video 1).
- Cremagliera di fissaggio e ganci in ferro a forma di S
- La rastrelliera di fissaggio è composta da due pesanti vassoi di ferro (24 cm di lunghezza, 12 cm di larghezza e 2 cm di altezza) e da una colonna di ferro (60 cm di lunghezza) saldamente saldata su ciascun vassoio. Fissare un solido bastone di ferro (145 cm di lunghezza) alla stessa altezza sulle due colonne di ferro utilizzando una struttura di collegamento a vite che può essere regolata e mantenuta ad un'altezza fissa (vedi Figura 4A).
- Per collegare il ratto che indossa la giacca al bastone di ferro, utilizzare i ganci a forma di S (11 cm di diametro). Avvolgi un'estremità del gancio attorno alla cinghia della giacca mentre l'altra estremità è appesa al bastoncino di ferro. Usa due ganci a forma di S per fissare il ratto al bastone. Fare riferimento alla Figura 1D e alla Figura 4B per la struttura complessiva.
Figura 2: Diagramma corrispondente della forma del corpo del ratto e della dimensione del rivestimento del ratto abbinata. Nel diagramma, il parametro a rappresenta la distanza trasversale nella parte posteriore dell'articolazione tra gli arti superiori e il tronco del ratto. Questo valore viene utilizzato come misura della distanza tra i fori penetranti per gli arti superiori della giacca di ratto. Allo stesso modo, il parametro b rappresenta la distanza trasversale sulla schiena in cui gli arti inferiori bilaterali del ratto si collegano con il tronco. Questa misura determina la distanza tra i fori penetranti per gli arti inferiori della giacca del ratto. Il parametro c indica la circonferenza della parte più spessa dell'addome del ratto, che può essere utilizzata come misura della larghezza per il tessuto della giacca del ratto. Il parametro d rappresenta la distanza tra l'ascella del ratto e la parte anteriore del suo ileo, determinando la distanza longitudinale tra i fori superiore e inferiore della giacca. Il parametro e corrisponde alla distanza longitudinale dalla punta del naso del ratto alla base della coda, che funge da misura della lunghezza del tessuto della giacca del ratto. Il parametro f indica la circonferenza dell'articolazione che collega l'arto superiore e il tronco del ratto, fungendo da circonferenza del foro attraverso il quale passano gli arti superiori. Il parametro g rappresenta la circonferenza dell'articolazione che collega gli arti inferiori e il tronco del ratto, determinando la circonferenza del foro attraverso il quale passano gli arti inferiori. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
| Peso corporeo (g) | Parametri di forma del corpo (cm) | ||||||
| un | b | c | d | e | f | g | |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
Tabella 1. I risultati della misurazione dei parametri di forma corporea di ratti con peso corporeo diverso.
Figura 3: Diagramma che illustra l'aspetto fisico e l'uso della giacca per topi. (A) Vista esterna piana della giacca per topi. La forma della giacca del ratto ricorda un trapezio ad angolo retto, con aperture separate sui lati sinistro e destro per il passaggio degli arti superiori e inferiori del ratto. (B) Vista esterna spiegata della giacca di ratto. La chiusura del copricapo crea una cavità semichiusa, che funge da componente cruciale per invogliare i ratti ad entrare. (C) Vista laterale di un topo vestito con la giacca. Una volta che gli arti del ratto passano attraverso le aperture dell'abbigliamento, le cinghie vengono incrociate sulla superficie ventrale del tronco e fissate saldamente alla schiena con una tensione appropriata. Ciò garantisce che il ratto sia relativamente immobilizzato. (D) Vista addominale di un ratto vestito con la giacca da ratto. La superficie ventrale del rivestimento espone la pelle addominale del ratto, consentendo un comodo accesso per l'agopuntura nei punti ventrali. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Video 1: Indossare la giacca da topo. Questo video mostra un tipico processo di vestizione del topo nella giacca. Clicca qui per scaricare questo video.
Figura 4: Diagramma che illustra l'aspetto fisico e l'utilizzo del rack di fissaggio sopraelevato. (A) Cremagliera di fissaggio rialzata. Questa rastrelliera è costituita principalmente da due colonne verticali di ferro (60 cm di lunghezza) saldate a ciascun vassoio, insieme a un lungo bastone di ferro orizzontale (145 cm di lunghezza) posto parallelamente al terreno. Le viti vengono utilizzate per fissare il bastone orizzontale alla stessa altezza delle colonne verticali. (B) Sospensione di ratto sulla cremagliera di fissaggio. I ratti che indossano le giacche per ratti sono fissati saldamente alla rastrelliera di fissaggio utilizzando due ganci a forma di S per ratto. (C) Trattamento simultaneo di elettroagopuntura in più ratti. Per prevenire qualsiasi potenziale interferenza derivante dal movimento della coda, era necessario mantenere una distanza adeguata tra i ratti, equivalente alla lunghezza della coda di un ratto. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
2. Procedura di elettroagopuntura
- Preparazione di routine
- Posizionare il rack di fissaggio su una scrivania orizzontale o a terra.
- Prima della procedura di agugliatura, rimuovere il pelo intorno ai punti di agopuntura utilizzando un rasoio elettrico per garantire un'esposizione completa. Quando il punto di agopuntura da pungere si trova sull'addome del ratto, come Guanyuan (CV4, circa 25 mm sotto l'ombelico), accorciare la larghezza degli indumenti del ratto in modo appropriato per esporre i punti di agopuntura addominali.
- Individuare il punto di agopuntura dalla fessura sulla linea mediana dell'addome che non è coperta dalla giacca di ratto (vedere la Figura 3D) e quindi iniettare l'ago.
- Quando i punti di agopuntura da pungere si trovano sulla testa del ratto, come Baihui (GV20, situato al centro dell'osso parietale), praticare una piccola incisione nella posizione corrispondente sulla testa per esporre completamente la pelle intorno a GV20 (vedere la figura 1C).
- Quando si agopuntura sugli arti dei ratti, come Neiguan (PC6, sul lato interno dell'arto anteriore, tra le suture radiale e ulnare a circa 3 mm di distanza dall'articolazione del polso) nell'arto superiore o Zusanli (ST36, sul lato posterolaterale dell'articolazione del ginocchio, circa 2 mm sotto la testa del perone) nell'arto inferiore, A causa dell'evidente esposizione dei punti di agopuntura, utilizzare una mano per aiutare a fissare l'arto, mentre l'altra può eseguire direttamente l'operazione di agopuntura.
- Quando il punto di agopuntura si trova sulla schiena o sulla vita di un ratto, come Shenshu (BL23, sotto la seconda vertebra lombare, a 6 mm di distanza dalla linea mediana della schiena), tagliare un'apertura larga circa 2 cm al centro della giacca del ratto per esporre completamente la pelle del sito corrispondente (vedere la figura 1C).
- Vesti il topo con la giacca. Dopo aver disinfettato la pelle locale dei punti di agopuntura con tamponi imbevuti di alcol, iniziare la procedura di agopuntura.
- Tecnica di agugliatura: individua con precisione il punto di agopuntura. Inserire un ago sterile monouso per agopuntura (0,16 mm x 7 mm) nel punto di agopuntura del ratto alla profondità appropriata.
- Operazione di elettroagopuntura
- Avvolgere il filo dell'elettrodo attorno all'asta di ferro orizzontale. Questo passaggio riduce il rischio che l'ago cada a causa della forza gravitazionale che agisce sulla clip per elettroagopuntura. Quindi, fissare saldamente l'estremità del filo dell'elettrodo sull'impugnatura dell'ago.
- Accendere l'alimentazione e selezionare i parametri di frequenza, corrente e tempo appropriati. In questo esperimento, i parametri sono stati impostati su 2 Hz, 1 mA e 15 min. Una volta regolati i parametri, iniziare il processo di trattamento di elettroagopuntura (vedere video 2 e video 3).
- Elettroagopuntura simultanea sui ratti: durante il trattamento, sospendere i ratti dello stesso gruppo insieme sul bastoncino di ferro utilizzando i ganci a forma di S e lasciarli subire contemporaneamente l'intervento di elettroagopuntura.
- NOTA: Il bastone di ferro non dovrebbe essere solo robusto, ma anche abbastanza lungo da trattare un gruppo di ratti contemporaneamente. In questo esperimento, pur garantendo una distanza appropriata e nessuna interferenza tra i ratti, è possibile trattare contemporaneamente 3-4 ratti (vedi Figura 4C).
- Osservazione delle risposte dei ratti durante il trattamento di elettroagopuntura: valutare l'idoneità di questo metodo di fissazione per l'elettroagopuntura nei ratti in base ai seguenti fattori, come il numero di personale necessario per completare l'operazione, il tempo impiegato per riparare un ratto, la risposta dei ratti durante il trattamento di elettroagopuntura, il numero di aghi caduti durante la procedura e eventuali morti accidentali che potrebbero verificarsi durante l'operazione.
- Rimozione degli aghi
- Una volta completato il tempo preimpostato, l'apparecchio di elettroagopuntura si spegnerà automaticamente. Rimuovere la piccola clip collegata all'impugnatura dell'ago e rimuovere con cautela l'ago per agopuntura da sotto la pelle del ratto, concludendo così il processo di trattamento dell'elettroagopuntura.
- Allenta le cinghie, solleva il copricapo della giacca del ratto e posiziona il ratto sopra la gabbia. Il ratto sarà quindi libero di sganciarsi dalla giacca ed entrare autonomamente nella gabbia (vedi Video 4).
Video 2. Punti di agopuntura nella regione lombare. Questo video mostra la procedura completa e coerente che comprende l'abbigliamento del ratto con la giacca, l'inserimento di aghi per agopuntura nei punti di agopuntura in vita e il successivo collegamento di un apparecchio di elettroagopuntura. Clicca qui per scaricare questo video.
Video 3. Punti di agopuntura nell'addome e nell'arto inferiore. Questo video mostra la procedura completa e coerente che comprende l'abbigliamento del ratto nella giacca, l'inserimento di aghi per agopuntura nei punti di agopuntura situati nell'addome e nell'arto inferiore e il successivo collegamento di un apparecchio di elettroagopuntura. Clicca qui per scaricare questo video.
Video 4. Rimozione della giacca di ratto. Questo video mostra la pratica consueta di rimuovere la giacca dal topo. Clicca qui per scaricare questo video.
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Representative Results
In questo esperimento, un totale di 12 ratti sono stati selezionati per il trattamento di elettroagopuntura e sono state osservate le loro reazioni con il metodo di fissazione (come mostrato nella Tabella 2). Tra i 12 ratti, solo 1 ratto ha mostrato una lotta intensa durante il periodo di ritenzione dell'ago di elettroagopuntura di 15 minuti. Come risultato dei suoi movimenti vigorosi, l'ago si è staccato a metà, rappresentando l'8,33% del numero totale di ratti. Questo risultato suggerisce che il metodo di fissazione utilizzato dimostra generalmente un notevole grado di stabilità e affidabilità. Nonostante la lotta esibita da un ratto, la maggior parte dei ratti del gruppo ha mantenuto una corretta fissazione dell'ago durante tutto il trattamento. Inoltre, durante la durata sperimentale di 2 mesi in cui questo metodo è stato impiegato per immobilizzare i ratti per il trattamento di elettroagopuntura, non sono stati registrati casi di mortalità dei ratti, suggerendo la sicurezza di questo metodo di fissazione per i ratti.
Inoltre, nella Tabella 3, abbiamo confrontato questo metodo di fissazione con altri quattro metodi riportati in letteratura 9,10,13,14. In primo luogo, in termini di stabilità, a parte la stabilità leggermente inferiore del quinto metodo che utilizza una fissazione del porta ratto di nuova creazione, gli altri metodi hanno raggiunto una fissazione relativamente sicura. In termini di tempo, il tempo medio necessario per fissare un ratto utilizzando questo metodo è stato più breve di quello del metodo di fissazione dell'oscillazione del mantello di ratto. I metodi rimanenti non specificavano il tempo necessario per la fissazione nei rispettivi documenti; pertanto, non è prevista alcuna discussione. In termini di numero di personale necessario per fissare un ratto, sia questo metodo che il metodo di sospensione dell'oscillazione del cappotto di ratto richiedevano solo una persona per completare l'operazione, migliorando così l'efficienza sperimentale. Tuttavia, in termini di gamma di punti di agopuntura esposti, la giacca per ratti appositamente progettata in questo protocollo può soddisfare i requisiti per l'esposizione della maggior parte dei punti di agopuntura sul corpo, mentre il cappotto per ratti nel metodo di sospensione oscillante espone principalmente gli arti. Per quanto riguarda i materiali utilizzati per il fissaggio, i materiali necessari per questo metodo sono relativamente facili da ottenere sia in laboratorio che in ambienti quotidiani. Inoltre, per quanto riguarda la posizione del ratto durante la fissazione, la posizione naturale è evidentemente più comoda della posizione forzata. Nel complesso, questo metodo è simile al metodo di fissaggio della sospensione dell'oscillazione del cappotto di ratto, ma ha miglioramenti mirati nel tessuto e nel design della giacca da ratto, consentendo una maggiore esposizione dei punti di agopuntura del corpo. Inoltre, rispetto all'essere sospeso su una cinghia di tessuto, questo protocollo utilizza tubi d'acciaio più robusti, che riducono gli effetti negativi causati dal violento scuotimento dei singoli ratti su altri ratti quando più ratti sono sottoposti contemporaneamente a trattamento di elettroagopuntura sul rack di fissaggio. Ciò garantisce la stabilità e l'affidabilità dei dati sperimentali.
Considerando i fattori di cui sopra collettivamente, questo approccio presenta i vantaggi di stabilità, efficienza, convenienza e relativo comfort per i ratti, rendendolo un'opzione preziosa per la fissazione dell'inserimento dell'ago.
| Metodo di fissazione | Numero di ratti in difficoltà | Percentuale di ratti in difficoltà (%) | Numero di ratti con caduta dell'ago durante il trattamento | Percentuale di ratti con caduta dell'ago durante il trattamento (%) | Numero di ratti morti durante l'operazione | Percentuale di ratti morti durante l'operazione (%) |
| Fissaggio della sospensione legato al gruppo del rivestimento | 1 | 8.33 | 1 | 8.33 | 0 | 0 |
Tabella 2. Risposta dei ratti fissi durante il trattamento di elettroagopuntura (n=12).
| Numero di serie | Metodo di fissazione | La fissazione dei ratti è stabile e sicura | Il tempo necessario per riparare un ratto | Numero di personale necessario per riparare un ratto | La posizione e la gamma dei punti di agopuntura che possono essere esposti | Accessibilità di infissi o materiali | Comfort dei metodi fissi per i ratti: posizione naturale o forzata | Referenze | |||||||||||||||
| 1 | Fissaggio della sospensione legato con rivestimento nel nostro esperimento | √ | 50-63 secondi | 1 | Addome, testa, schiena e vita, arti | Prontamente disponibile | Posizione naturale | ||||||||||||||||
| 2 | Un telaio di fissaggio per agopuntura e moxibustione per la combinazione di punti di agopuntura Shu-Mu (una selezione di punti di agopuntura che combina i punti di allarme con i punti di trasporto posteriori) | √ | / | / | Testa, arti, schiena e vita | Il telaio di fissaggio deve essere personalizzato | Posizione forzata | 9 | |||||||||||||||
| 3 | Metodo di fissazione dei ratti oscillanti legati con il cappotto | √ | 85-93 secondi | 1 | Parti degli arti | Prontamente disponibile | Posizione naturale | 10 | |||||||||||||||
| 4 | Un dispositivo di fissaggio per ratti ricavato da una vecchia gabbia di meshy | √ | / | ≥2 | La gamma di punti di agopuntura non è limitata | Prontamente disponibile | Posizione forzata | 13 | |||||||||||||||
| 5 | Un porta ratti appena fatto | Dopo la fissazione, gli arti anteriori e posteriori dei ratti hanno ancora un certo grado di mobilità. Inoltre, c'è un certo rischio che il punto di intersezione dell'asta di fissaggio del collo nei ratti possa essere troppo alto, il che può portare al soffocamento nei ratti. Se è troppo basso, il fissaggio della testa dei ratti potrebbe essere instabile. | / | / | La gamma di punti di agopuntura non è limitata | Il supporto per ratti richiede una personalizzazione speciale | Posizione naturale | 14 | |||||||||||||||
Tabella 3. Risultati di confronto di diversi metodi di fissazione nell'esperimento di agopuntura e moxibustione del ratto.
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Discussion
È stato dimostrato che l'elettroagopuntura ha buoni effetti terapeutici su varie malattie come il deterioramento cognitivo 16,17, il danno miocardico18 e il dolore infiammatorio19. Per comprendere il suo meccanismo d'azione, sono stati condotti esperimenti sugli animali utilizzando principalmente i ratti. La fissazione degli animali durante le procedure è fondamentale per ottenere risultati accurati. Mentre molti studi hanno somministrato l'elettroagopuntura dopo l'anestesia animale, questa pratica può ostacolare la funzione cerebrale e compromettere l'accuratezza sperimentale. Inoltre, la somministrazione a lungo termine dell'anestesia allunga la procedura di agugliatura e aumenta le possibilità di mortalità per gli animali. Tuttavia, i metodi di fissazione non anestetici riportati presentano anche delle limitazioni, che sono state attentamente discusse nella Tabella 3.
Questo studio presenta un nuovo protocollo che introduce una giacca per ratti su misura in combinazione con una rastrelliera di fissaggio rialzata. L'aspetto cruciale di questo protocollo prevede la creazione di giacche per ratti con dimensioni appropriate in base alle forme del corpo dei ratti e l'ulteriore personalizzazione in base alla posizione specifica dei punti di agopuntura da agugliare. Un consiglio utile per indossare la giacca del topo è quello di utilizzare l'inclinazione naturale del ratto per l'oscurità e la tana per incoraggiarlo a entrare nel copricapo. Una volta fissata la testa del ratto, le successive procedure di fissazione diventano molto più semplici.
Dopo l'addestramento adattivo, i ratti hanno dimostrato un disagio minimo durante l'utilizzo di questa tecnica. I materiali necessari per l'attrezzatura, come tessuti, ganci a forma di S, bastoncini di ferro e altri materiali, sono facilmente accessibili ed economici, facilitando così una riduzione delle spese sperimentali. Un altro vantaggio è che la tenuta delle cinghie della giacca del ratto può essere regolata in base alle dimensioni del ratto, rendendolo flessibile e controllabile. L'intera operazione di fissazione può essere completata da una persona in modo indipendente e la configurazione elevata del dispositivo consente ai ricercatori di trattare un gruppo di piccoli animali contemporaneamente, migliorando così significativamente l'efficienza sperimentale, riducendo il tempo dedicato all'intero esperimento e riducendo al minimo le discrepanze tra lo stesso gruppo di animali. Inoltre, la piattaforma sopraelevata ovvia alla necessità di un tavolo, in quanto può essere posizionato direttamente su un terreno pianeggiante, ottimizzando così l'utilizzo dello spazio. Inoltre, questi disegni possono essere modificati ed estesi per l'uso in altri animali da esperimento, come i porcellini d'India, e possono anche essere efficacemente impiegati nel trattamento della moxibustione.
Un potenziale limite di questo approccio è il requisito per i ricercatori di possedere un alto livello di competenza nella tecnica, nonché la necessità di creare giacche per ratti di dimensioni variabili su misura per la lunghezza del corpo e la distanza degli arti di ciascun ratto. Inoltre, è inevitabile che alcuni ratti possano provare un lieve disagio e stress dopo l'esposizione iniziale alla giacca per ratti e al fissaggio della sospensione. Di conseguenza, diventa imperativo implementare un allenamento adattivo per i ratti sottoposti a trattamento di elettroagopuntura. Inoltre, è imperativo maneggiare questi ratti con cautela durante la procedura, impiegando carezze delicate per calmarli e calmarli in caso di agitazione o non conformità. Vale la pena notare che per ridurre al minimo l'impatto dello stress inevitabile sulle condizioni fisiche e sugli esperimenti comportamentali dei ratti, il gruppo di controllo (compreso un gruppo di controllo in bianco e un gruppo di controllo modello) dovrebbe anche subire la stessa quantità di manipolazione, legatura del rivestimento del ratto e fissazione elevata contemporaneamente al gruppo di trattamento con elettroagopuntura. anche se non stanno ricevendo un trattamento di elettroagopuntura.
In sintesi, questo metodo di fissazione ci fornisce un'opzione comoda ed efficace per immobilizzare i ratti, che assicura una garanzia affidabile per un'operazione di agopuntura stabile e regolare e un processo di ritenzione dell'ago.
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Disclosures
Tutti gli autori hanno dichiarato di non avere potenziali conflitti di interesse.
Acknowledgments
Gli autori desiderano esprimere la loro gratitudine alla piattaforma di disegno per la ricerca scientifica Figdraw della Home for Researchers per aver fornito il materiale utilizzato per creare la Figura 2 in questo documento, con ID licenza autorizzata: URUUO5699e. Questo lavoro ha ricevuto il sostegno di sovvenzioni fornite dalla National Natural Science Foundation of China (81873380, 82074566), dalla Natural Science Foundation della provincia di Hubei (2022CFCO43) e dal National Famous Traditional Chinese Medicine Heritage Studio Construction Project dell'Amministrazione Nazionale della Medicina Tradizionale Cinese ([2022] No.5, [2022] No.75).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 75% alcohol | Shandong Lircon medical technology co., ltd | 2002-0059 | Disinfection |
| acupuncture needles | Beijing Luo ya shan chuan medical equipment co., Ltd. | needling | |
| Adult Sprague-Dawley (SD) rats | Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd. | SCXK 2020-0001 | The recipient subjected to fixation |
| an elevated fixation rack | Taizhou shiai instruments and equipments for scientific and teaching research Co., ltd | / | Fix rats |
| Hans electronic acupuncture apparatus | Beijing Huayun Ante Science and Technology Co. Ltd. | HANS-200A | electroacupuncture |
| Medical cotton ball | Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd. | 20172142357 | Disinfection |
| Pet electric clipper | Fenghua Xikou Lubao Knives & Scissors Electrical Appliance Factory | / | Shave the hair of rats |
| Tweezers | Qingdao Schultz Biotechnology Co., ltd | Pinch cotton balls |
References
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