Summary
Her presenterer vi en forbedret suspensjonsfikseringsmetode ved hjelp av en rottejakke for effektivt å immobilisere rotter under akupunktureksperimenter. Videre belyses strukturen og anvendelsen av dette fikseringsapparatet, samt instruksjoner og evaluering for bruk i elektroakupunkturbehandling.
Abstract
I grunnleggende eksperimentell akupunkturforskning brukes rotter ofte som laboratoriedyr. Det er imidlertid vanskelig for dem å opprettholde en fast holdning. Under elektroakupunkturprosedyrer er riktig immobilisering av rotter viktig. Ulike metoder for rottefiksering brukes for tiden, inkludert anestesifiksering, fiksering av høy plattform, bindingsfiksering og fiksering med et selvfremstillet rottebelegg. Disse metodene har imidlertid sine begrensninger, noe som til en viss grad kan påvirke eksperimentets effektivitet og brukbarhet. Denne protokollen introduserer en metode for å suspendere og fikse rotter ved hjelp av rotteklær. For det første er rotter kledd med rottejakker som matcher kroppsfasongen, og utnytter deres preferanse for mørke og graving. Nåleoperasjonen kan deretter utføres etter at rottene har brukt rotteklær. Når de er suspendert, er rottene relativt stille, da deres lemmer ikke kan bevege seg. Denne fikseringsmetoden gir ikke bare økonomiske og brukervennlige fordeler, men sikrer også en stabil og pålitelig fiksering av rottene i en komfortabelt avslappet stilling. Det minimerer også effektivt tidsforbruk, eksperimentell plass og arbeidskraftressurser. I tillegg tillater denne metoden eksponering av de fleste akupunkturer som brukes til akupunktur hos rotter. Denne artikkelen konsentrerer seg primært om enhetens sammensetning, som omfatter en spesialdesignet rottejakke, et forhøyet fikseringsstativ og deres tilkoblingsstrukturer. I tillegg vil et illustrerende eksempel bli presentert for å demonstrere anvendelsen av rotteklærbasert suspensjonsfikseringsmetode i rotteelektroakupunkturprosedyrer.
Introduction
Akupunktur er en tradisjonell terapi preget av nåling på bestemte akupunkter eller andre stillinger for å forebygge og behandle sykdommer. Elektroakupunktur kombinerer filiforme nåler med elektrisk stimulering1, noe som muliggjør presis kontroll over mengden stimulering ved å justere relevante parametere, fremme standardisering av akupunkturbehandling2. I de senere år har forskning på mekanismene for elektroakupunktur fortsatt å utvide og utdype3,4, noe som har ført til en årlig økning i studier som fokuserer på mekanismene for elektroakupunktur5.
I grunnforskning på elektroakupunktur er rotter de mest brukte dyrene. Under elektroakupunkturbehandling må mottakeren forbli stille for å sikre en jevn prosedyre. I motsetning til i kliniske forsøk med mennesker, kan små dyr som brukes i dyreforsøk ikke følge kommandoer bevisst under 15-30 min lange elektroakupunkturprosedyrer. Dette gir forskere en primær utfordring med å oppnå stabil og pålitelig fiksering. Feil fiksering kan føre til negative følelser som angst, depresjon og frykt hos dyr6, noe som ikke bare øker risikoen for skade for rotter og sjansen for å bli bitt for eksperimentelt personell, men også påvirker stabiliteten og overtalelsesevnen til forskningsresultater.
I tidligere studier har forskere ofte brukt anestesifiksering7, høy plattformfiksering8, bindingsfiksering 6,9 eller rottebeleggfiksering10 før akupunktur eller elektroakupunkturoperasjoner. Men gitt effekten av anestesi på kroppen11 og hjernefunksjon12, og med tanke på at akupunktur utføres på bevisste pasienter i kliniske tilfeller, kan anestesi til en viss grad påvirke forskningsresultatene. Derfor, sammenlignet med anestesifiksering, er komfortabel fiksering av rotter i våken tilstand et bedre alternativ.
I ikke-bedøvet tilstand har imidlertid forskjellige fikseringsmetoder også sine respektive begrensninger, inkludert begrenset akupunkteksponering på grunn av dekning av rottebelegget på rotter 10, nødvendigheten av minst to personer til å utføre operasjonen13, ikke-justerbar fikseringsstørrelse14 eller den stressede tilstanden til rotter i en tvungen stilling6. For å løse disse tekniske problemene designet vi en rottejakke og et festestativ som er egnet for akupunkturmanipulering i de fleste deler av rottekroppen. Dette kan hjelpe forskere effektivt å utføre akupunkturprosedyrer med rotter.
Begrunnelsen for denne protokollen er som følger: For det første utnytter det lukkede hodeplagget på rottejakken rottenes naturlige tilbøyelighet til mørke og graving, og begrenser dermed deres aktivitetsområde. For det andre gir bindingstauene nær leddene i rotternes lemmer fysisk kompresjonsbegrensning, og pålegger visse begrensninger på bevegelsene deres. Imidlertid er rotter fortsatt i stand til å hoppe og bevege seg horisontalt selv mens de har på seg jakken. Til slutt, siden rotter ikke kan berøre bakken uten et fast kraftpunkt når de er suspendert, la vi til en opphengsfikseringsenhet til rottejakken, noe som ytterligere begrenset bevegelsene deres og sikret nåleretensjon. Sammensetningen av fikseringsanordningen er vist i figur 1.
Figur 1: Skjematisk diagram over rottejakke og fjæringsfiksering. (A) Det generelle utseendet til rottejakken i flat visning. (B) Tredimensjonalt bilde av rottejakken. (C) Spesialtilpasset rottejakke med snitt nær akupunktene på hodet og baksiden. (D) Illustrasjon av flere rotter som henger samtidig på den forhøyede stativet. 1: Stoff samlet visning; 2: Forbenet utløp; 3: Bakre lem utløp; 4: Binde tau; 5: Hulrom dannet etter suturering; 6: Snitt for å eksponere hodet akupunkter; 7: Snitt for å eksponere rygg og midje akupunkter. 8: Suturposisjon. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle prosedyrer utført på rotter i denne studien fulgte National Standard for Laboratory Animal Welfare and Ethics Review Guidelines (2018) offisielt vedtatt av Folkerepublikken Kina og Veiledning for omsorg og bruk av forsøksdyr fra National Academies Press15. Denne protokollen består av tre hovedtrinn. For det første skreddersys og monteres rottejakkene basert på de individuelle kroppsformene til rotter med ulik vekt. Deretter utføres akupunkturmanipulasjon etter standardprosedyrer. Til slutt henges rottene opp i jakkene sine mens nålene forblir på plass for å imøtekomme behovet for samtidige inngrep blant rotter i samme gruppe.
1. Forberedelse før nåling
- Produksjon av rottejakken
- Vei rottene og mål kroppsformen deres før du lager jakkene deres. For å verifisere denne protokollens egnethet for rotter med varierende vekt, velg rotter som veier 220 g, 300 g, 400 g og 520 g for uavhengige målinger av kroppslige dimensjoner, som omfatter målinger fra a til f, som vist i figur 2.
MERK: Korrelasjonen mellom kroppslige proporsjoner hos rotter og deres tilsvarende jakkestørrelser er også presentert i figur 2. De relevante kroppslengdeparametrene for rotter med ulik vekt er registrert i tabell 1. - Klipp et rektangulært stykke tykt, mørkt stoff for å lage en rottejakke. Bruk stoffet med utfoldet bredde lik omkretsen målt rundt den tykkeste delen av rottens mage. Lengden på stoffet er lik avstanden fra rottens nesespiss til bunnen av halen (se figur 2).
- Brett stoffet i to og klipp av øverste venstre hjørne i en vinkel på ca. 45°-65° for å danne en høyre trapes (se figur 3A).
- Sy de to sidene til venstre tett med bomullstråd. Se figur 1B og figur 3B for veiledning.
- Klipp to små hull, ett på hver side av stoffet, slik at rottens øvre og nedre lemmer kan passere gjennom (se figur 3C). Avstanden mellom de to øvre lemmer bestemmer avstanden mellom de øvre hullene på rottejakken. Avstanden mellom de to underekstremitetene bestemmer avstanden mellom de nedre hullene på rottejakken.
- Bruk den langsgående avstanden mellom rottens armhule og fronten av ilium for å tjene som avstand mellom de øvre og nedre hullene på rottejakken. Bruk omkretsen av skulderleddet til å bestemme omkretsen av det øvre hullet i rottejakken. Bruk omkretsen av hofteleddet til omkretsen av det nedre hullet i rottejakken.
- Ved siden av hvert hull, sy en lang tøystropp som kan krysses og vikles tett rundt kroppen fra åpningen av jakken for å fikse rotta.
- Vei rottene og mål kroppsformen deres før du lager jakkene deres. For å verifisere denne protokollens egnethet for rotter med varierende vekt, velg rotter som veier 220 g, 300 g, 400 g og 520 g for uavhengige målinger av kroppslige dimensjoner, som omfatter målinger fra a til f, som vist i figur 2.
- Metode for bruk av rottejakke
- Bruk hansker før du fortsetter å kle rotta i jakken. Begynn med å holde den midtre og bakre delen av rottejakken med en hånd på bordet. Med den andre hånden, hold rottens hale fra fôringsburet og legg den forsiktig inn i jakken.
- Når rotta beveger seg fremover, vil hodet nå hodeplagget på jakken. På dette tidspunktet bruker du begge hender til å forsiktig trekke venstre og høyre øvre lemmer ut av hullene i jakken.
- Ta bindetauet fra åpningsenden av jakken, kryss det over fra venstre til høyre, og pakk det sikkert rundt rottens koffert. Bind den tett på motsatt side av bagasjerommet for å sikre riktig fiksering. Etter begrensningen av rottens øvre lemmer, gjenta samme prosedyre for å fikse underekstremitetene.
- Ta forholdsregler for å unngå å bli bitt eller riper av rottens klør når du trekker lemmene ut av jakkehullene. Sørg for at tauets tetthet er riktig justert, dvs. ikke for stramt til å forårsake lokal lemmeriskemi og hypoksi hos rotter, og ikke for løs, slik at rotta lett kan unnslippe (se video 1).
- Festestativ og S-formede jernkroker
- Fikseringsstativet består av to tunge jernbrett (24 cm i lengden, 12 cm i bredden og 2 cm i høyden) og en jernsøyle (60 cm i lengden) som er godt sveiset på hvert brett. Fest en solid jernpinne (145 cm lang) i samme høyde på de to jernsøylene ved hjelp av en skrueforbindelsesstruktur som kan justeres og vedlikeholdes i fast høyde (se figur 4A).
- For å koble rotta på jakken til jernpinnen, bruk de S-formede krokene (11 cm i diameter). Vikle den ene enden av kroken rundt stroppen på jakken mens den andre enden er hengt på jernpinnen. Bruk to S-formede kroker for å feste rotta på pinnen. Se figur 1D og figur 4B for den overordnede strukturen.
Figur 2: Tilsvarende diagram over rottekroppsform og matchet rottejakkestørrelse. I diagrammet representerer parameteren a den tverrgående avstanden på baksiden av leddet mellom øvre lemmer og rottens koffert. Denne verdien brukes som avstandsmåling mellom de gjennomtrengende hullene for rottejakkens øvre lemmer. På samme måte representerer parameter b den tverrgående avstanden på ryggen der rottens bilaterale underekstremiteter forbinder med stammen. Denne målingen bestemmer avstanden mellom de gjennomtrengende hullene for rottejakkens nedre lemmer. Parameteren c betyr omkretsen av den tykkeste delen av rottens mage, som kan brukes som breddemål for stoffet i rottens jakke. Parameteren d representerer avstanden fra rottens armhule til forsiden av iliumet, og bestemmer lengdeavstanden mellom jakkens øvre og nedre hull. Parameteren e tilsvarer den langsgående avstanden fra rottens nesespiss til bunnen av halen, og fungerer som lengdemåling for rottens jakkeduk. Parameteren f angir omkretsen av artikulasjonen som forbinder overekstremiteten og rottens stamme, som tjener som omkretsen av hullet gjennom hvilket øvre lemmer passerer. Parameteren g representerer omkretsen av leddet som forbinder underdelene og rottens stamme, og bestemmer omkretsen av hullet gjennom hvilket underekstremitetene passerer. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
| Kroppsvekt (g) | Parametere for kroppsform (cm) | ||||||
| en | b | c | d | e | f | g | |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
Tabell 1. Måleresultatene av kroppsformparametere hos rotter med forskjellig kroppsvekt.
Figur 3: Diagram som viser rottejakkens fysiske utseende og bruk . (A) Plane utvendig visning av rottejakken. Formen på rottens jakke ligner en rettvinklet trapesformet, med separate åpninger på venstre og høyre side for rottens øvre og nedre lemmer å passere gjennom. (B) Utfoldet utvendig bilde av rottejakken. Lukkingen av hodeplagget skaper et semi-lukket hulrom, som fungerer som en avgjørende komponent for å lokke rotter til å komme inn. (C) Sett fra siden av en rotte kledd med jakken. Når rottens lemmer passerer gjennom åpningene i klærne, krysses stroppene over den ventrale overflaten av stammen og festes sikkert på baksiden med passende spenning. Dette sikrer at rotta er relativt immobilisert. (D) Magebilde av en rotte kledd med rottejakke. Den ventrale overflaten på jakken eksponerer rottens magehud, noe som gir praktisk tilgang til akupunktur på ventrale punkter. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Video 1: Ta på rottejakken. Denne videoen viser en typisk prosess for å kle rotta i jakken. Vennligst klikk her for å laste ned denne videoen.
Figur 4: Diagram som viser det fysiske utseendet og bruken av det forhøyede fikseringsstativet. (A) Forhøyet festestativ. Dette stativet består hovedsakelig av to vertikale jernsøyler (60 cm lange) sveiset til hvert brett, sammen med en lang horisontal jernpinne (145 cm i lengde) plassert parallelt med bakken. Skruer brukes til å feste den horisontale pinnen i samme høyde som de vertikale kolonnene. (B) Rotteoppheng på festestativet. Rotter iført rottejakker er forsvarlig festet til fikseringsstativet ved hjelp av to S-formede kroker per rotte. (C) Samtidig elektroakupunkturbehandling hos flere rotter. For å forhindre potensiell interferens som følge av halebevegelse, var det nødvendig å opprettholde riktig avstand mellom rottene, tilsvarende lengden på en rottehale. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
2. Elektroakupunktur prosedyre
- Rutinemessig forberedelse
- Plasser festestativet på et horisontalt skrivebord eller bakken.
- Før nåleprosedyren, fjern pelsen rundt akupunktene ved hjelp av en elektrisk barbermaskin for å sikre fullstendig eksponering. Når akupunktet som skal punkteres er plassert på magen til rotten, for eksempel Guanyuan (CV4, ca. 25 mm under navlen), forkort bredden på rotteklær på riktig måte for å eksponere abdominale akupunkter.
- Finn akupunktet fra åpningen på midtlinjen av magen som ikke er dekket av rottejakken (se figur 3D), og injiser deretter nålen.
- Når akupunkteringspunktene er på rottehodet, for eksempel Baihui (GV20, plassert midt på parietalbenet), gjør du et lite snitt i tilsvarende posisjon på hodet for å eksponere huden rundt GV20 (se figur 1C).
- Når akupunkturering akupunkter på lemmer av rotter, slik som Neiguan (PC6, på innsiden av forbenet, mellom radiale og ulnar suturer ca. 3 mm fra håndleddet) i øvre lem eller Zusanli (ST36, på posterolateral side av kneleddet, ca. 2 mm under fibula hodet) i underbenet, På grunn av den åpenbare eksponeringen av akupunktene, bruk den ene hånden til å hjelpe til med å fikse lemmen, mens den andre direkte kan utføre akupunkturoperasjonen.
- Når akupunktet er plassert på ryggen eller midjen til en rotte, slik som Shenshu (BL23, under 2. lumbale ryggvirvler, 6 mm fra midtlinjen på ryggen), kutt en åpning ca 2 cm bred i midten av rottejakken for å fullstendig eksponere huden på det tilsvarende stedet (se figur 1C).
- Kle rotta i jakken. Etter desinfisering av den lokale huden av akupunkturer med alkoholpinner, start akupunkturprosedyren.
- Needling teknikk: Finn acupoint nøyaktig. Sett en steril akupunkturnål (0,16 mm x 7 mm) inn i rottens akupunkt i riktig dybde.
- Elektroakupunktur drift
- Fest elektrodetråden rundt den horisontale jernstangen. Dette trinnet reduserer risikoen for at nålen faller ut på grunn av gravitasjonskraften som virker på elektroakupunkturklemmen. Fest deretter enden av elektrodetråden godt på kanylehåndtaket.
- Slå på strømmen og velg riktig frekvens-, strøm- og tidsparametere. I dette eksperimentet ble parametrene satt til 2 Hz, 1 mA og 15 min. Når parametrene er justert, starter elektroakupunkturbehandlingsprosessen (se Video 2 og Video 3).
- Samtidig elektroakupunktur på rotter: Under behandlingen, suspender rottene i samme gruppe sammen på jernpinnen ved hjelp av de S-formede krokene og la dem gjennomgå elektroakupunkturintervensjon samtidig.
- MERK: Jernpinnen skal ikke bare være solid, men også lang nok til å behandle en gruppe rotter samtidig. I dette eksperimentet, samtidig som det sikres passende avstand og ingen interferens mellom rottene, kan 3-4 rotter behandles samtidig (se figur 4C).
- Observasjon av rotteresponser under elektroakupunkturbehandling: Evaluer egnetheten til denne fikseringsmetoden for elektroakupunktur hos rotter basert på følgende faktorer, for eksempel antall personell som kreves for å fullføre operasjonen, tid det tar å fikse en rotte, rotternes respons under elektroakupunkturbehandlingen, antall nåler som slippes under prosedyren og eventuelle utilsiktede dødsfall som kan oppstå under operasjonen.
- Fjerning av nålene
- Når den forhåndsinnstilte tiden er fullført, slås elektroakupunkturapparatet automatisk av. Fjern den lille klipsen som er koblet til nålehåndtaket og fjern akupunkturnålen forsiktig fra under rottens hud, og avslutt dermed elektroakupunkturbehandlingsprosessen.
- Løsne stroppene, løft hodedekselet på rottens jakke og plasser rotta over buret. Rotta vil da være fri til å frigjøre seg fra jakken og gå inn i buret uavhengig (se Video 4).
Video 2. Needling akupunkter i lumbalområdet. Denne videoen demonstrerer den omfattende og sammenhengende prosedyren som omfatter attiring av rotte i jakken, innsetting av akupunkturnåler i akupunkturer i midjen og den påfølgende tilkoblingen av et elektroakupunkturapparat. Vennligst klikk her for å laste ned denne videoen.
Video 3. Needling akupunkter i magen og underekstremiteten. Denne videoen demonstrerer den omfattende og sammenhengende prosedyren som omfatter attiring av rotte i jakken, innsetting av akupunkturnåler i akupunkturer i magen og underekstremiteten, og den påfølgende tilkoblingen av et elektroakupunkturapparat. Vennligst klikk her for å laste ned denne videoen.
Video 4. Fjerne rottejakken. Denne videoen viser den vanlige praksisen med å fjerne jakken fra rotta. Vennligst klikk her for å laste ned denne videoen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I dette forsøket ble totalt 12 rotter valgt for elektroakupunkturbehandling, og deres reaksjoner under fikseringsmetoden ble observert (som vist i tabell 2). Blant de 12 rottene viste bare 1 rotte intens kamp i løpet av 15 min elektroakupunkturnålretensjonsperioden. Som et resultat av sine kraftige bevegelser kom nålen av midtveis, og utgjorde 8,33% av det totale antall rotter. Dette resultatet antyder at fikseringsmetoden som brukes generelt demonstrerer en betydelig grad av stabilitet og pålitelighet. Til tross for kampen som ble vist av en rotte, opprettholdt flertallet av rottene i gruppen riktig nålfiksering gjennom hele behandlingen. Videre, i løpet av den 2-måneders eksperimentelle varigheten hvor denne metoden ble brukt til å immobilisere rotter for elektroakupunkturbehandling, ble det ikke registrert tilfeller av rottedødelighet, noe som tyder på sikkerheten til denne fikseringsmetoden for rotter.
I tabell 3 sammenlignet vi i tillegg denne fikseringsmetoden med fire andre metoder rapportert i litteraturen 9,10,13,14. For det første, når det gjelder stabilitet, bortsett fra den litt dårligere stabiliteten til den femte metoden ved bruk av en nylaget rotteholderfiksering, oppnådde de andre metodene relativt sikker fiksering. Når det gjelder tid, var gjennomsnittstiden som kreves for å fikse en rotte ved hjelp av denne metoden kortere enn for fikseringsmetoden for rottebelegg. De resterende metodene spesifiserte ikke tiden som kreves for fiksering i deres respektive papirer; Derfor er det ikke gitt noen diskusjon. Når det gjelder antall personell som kreves for å fikse en rotte, krevde både denne metoden og rottebeleggsopphengsmetoden bare en person for å fullføre operasjonen, og dermed øke eksperimentell effektivitet. Når det gjelder det eksponerte acupoint-området, kan imidlertid den spesialdesignede rottejakken i denne protokollen oppfylle kravene for å eksponere de fleste akupunkter på kroppen, mens rottebelegget i svingfjæringsmetoden hovedsakelig eksponerer lemmer. Når det gjelder materialene som brukes til fiksering, er materialene som kreves for denne metoden relativt enkle å skaffe i både laboratorie- og hverdagsinnstillinger. Videre, når det gjelder rottens posisjon under fiksering, er den naturlige posisjonen tydeligvis mer komfortabel enn den tvungne stillingen. Samlet sett ligner denne metoden på fikseringsmetoden for rottebelegg, men den har målrettede forbedringer i stoffet og utformingen av rottejakken, noe som muliggjør mer eksponering av kroppsakupunkter. Dessuten, sammenlignet med å være suspendert på en stoffstropp, bruker denne protokollen kraftigere stålrør, noe som reduserer bivirkningene forårsaket av individuelle rotters voldsomme risting på andre rotter når flere rotter samtidig gjennomgår elektroakupunkturbehandling på fikseringsstativet. Dette sikrer stabiliteten og påliteligheten til eksperimentelle data.
Tatt i betraktning de nevnte faktorene samlet, viser denne tilnærmingen fordelene med stabilitet, effektivitet, overkommelig pris og relativ komfort for rotter, noe som gjør det til et verdifullt alternativ for nålinnsetting fiksering.
| Fikseringsmetode | Antall rotter som sliter | Prosent av rotter som sliter (%) | Antall rotter med nåledråpe under behandling | Prosent av rotter med nålefall under behandling(%) | Antall rotter døde under operasjon | Prosent av rottene døde under operasjon (%) |
| Suspensjonsfiksering bundet med jakkegruppe | 1 | 8.33 | 1 | 8.33 | 0 | 0 |
Tabell 2. Respons hos faste rotter under elektroakupunkturbehandling (n=12).
| Serienummer | Fikseringsmetode | Er fiksering av rotter stabil og sikker | Tiden det tar å fikse en rotte | Antall personell som kreves for å fikse en rotte | Plasseringen og omfanget av akupunkter som kan bli eksponert | Tilgjengelighet av inventar eller materialer | Komfort av faste metoder for rotter: naturlig eller tvungen stilling | Referanser | |||||||||||||||
| 1 | Suspensjonsfiksering bundet med jakke i vårt eksperiment | √ | 50-63 s | 1 | Mage, hode, rygg og midje, lemmer | Lett tilgjengelig | Naturlig posisjon | ||||||||||||||||
| 2 | En fikseringsramme for akupunktur og moxibustion for Shu-Mu acupoint kombinasjon (et akupunktvalg som kombinerer alarmpunktene med de bakre transportpunktene) | √ | / | / | Hode, lemmer, rygg og midje | Fikseringsrammen må tilpasses | Tvangsstilling | 9 | |||||||||||||||
| 3 | Fikseringsmetode for svingende rotter bundet med frakk | √ | 85-93 s | 1 | Limb deler | Lett tilgjengelig | Naturlig posisjon | 10 | |||||||||||||||
| 4 | En rottefikseringsenhet laget av et gammelt nettingburdeksel | √ | / | ≥2 | Utvalget av akupunkter er ikke begrenset | Lett tilgjengelig | Tvangsstilling | 13 | |||||||||||||||
| 5 | En nylaget rotteholder | Etter fiksering har rotternes fremre og bakre lemmer fortsatt en viss grad av mobilitet. Videre er det en viss risiko for at skjæringspunktet mellom halsfestestangen hos rotter kan være for høyt, noe som kan føre til kvelning hos rotter. Hvis det er for lavt, kan hodefikseringen av rotter være ustabil. | / | / | Utvalget av akupunkter er ikke begrenset | Rotteholder krever spesiell tilpasning | Naturlig posisjon | 14 | |||||||||||||||
Tabell 3. Sammenligningsresultater av ulike fikseringsmetoder i rotteakupunktur og moxibustion eksperiment.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Elektroakupunktur har vist seg å ha god terapeutisk effekt på ulike sykdommer som kognitiv svikt 16,17, myokardskade18 og betennelsessmerter19. For å forstå virkningsmekanismen er det utført dyreforsøk primært med rotter. Fiksering av dyrene under prosedyrene er avgjørende for nøyaktige resultater. Mens mange studier har administrert elektroakupunktur etter dyrebedøvelse, kan denne praksisen hindre hjernens funksjon og kompromittere eksperimentell nøyaktighet. Videre forlenger langvarig administrering av anestesi nålingsprosedyren og øker sjansene for dødelighet for dyr. De rapporterte ikke-anestetiske fikseringsmetodene har imidlertid også begrensninger, som er nøye omtalt i tabell 3.
Denne studien presenterer en ny protokoll som introduserer en skreddersydd rottejakke i forbindelse med et forhøyet fikseringsstativ. Det avgjørende aspektet ved denne protokollen innebærer å lage rottejakker med passende størrelser basert på rottenes kroppsformer og tilpasse dem videre i henhold til den spesifikke plasseringen av akupunktene som skal nås. Et nyttig tips for å montere rottejakken er å utnytte rottens naturlige tilbøyelighet til mørke og graving for å oppmuntre den til å komme inn i hodeplagget. Når rottehodet er sikret, blir de etterfølgende fikseringsprosedyrene mye enklere.
Etter adaptiv trening viste rottene minimalt ubehag mens de brukte denne teknikken. De nødvendige utstyrsmaterialene, for eksempel stoffer, S-formede kroker, jernpinner og andre materialer, er lett tilgjengelige og kostnadseffektive, og letter dermed en reduksjon i eksperimentelle utgifter. En annen fordel er at tettheten til rottejakkestroppene kan justeres i henhold til rottens størrelse, noe som gjør den fleksibel og kontrollerbar. Hele fikseringsoperasjonen kan fullføres av en person uavhengig, og den forhøyede konfigurasjonen av enheten tillater forskere å behandle en gruppe små dyr samtidig, og dermed forbedre eksperimentell effektivitet betydelig, redusere tiden brukt på hele forsøket og minimere uoverensstemmelser blant samme gruppe dyr. Videre unngår den forhøyede plattformen behovet for et bord, da det kan plasseres direkte på jevnt underlag, og dermed optimalisere romlig utnyttelse. I tillegg kan disse designene modifiseres og utvides for bruk i andre eksperimentelle dyr, for eksempel marsvin, og kan også brukes effektivt i moxibustion-behandling.
En potensiell begrensning av denne tilnærmingen er kravet om at forskere skal ha et høyt nivå av ferdigheter i teknikken, samt behovet for å lage rottejakker av varierende dimensjoner skreddersydd for hver rottes kroppslengde og lemmeavstand. I tillegg er det uunngåelig at noen rotter kan oppleve mildt ubehag og stress ved første eksponering for rottejakke og opphengsfiksering. Derfor blir det viktig å implementere adaptiv trening for rotter som gjennomgår elektroakupunkturbehandling. Videre er det viktig å håndtere disse rottene med forsiktighet under prosedyren, ved å bruke forsiktig strøk for å berolige og roe dem i tilfeller av agitasjon eller manglende overholdelse. Det er verdt å merke seg at for å minimere virkningen av uunngåelig stress på rotters fysiske tilstand og atferdseksperimenter, bør kontrollgruppen (inkludert en tom kontrollgruppe og en modellkontrollgruppe) også gjennomgå samme mengde håndtering, rottejakkebinding og forhøyet fiksering samtidig som elektroakupunkturbehandlingsgruppen, selv om de ikke får elektroakupunkturbehandling.
Oppsummert gir denne fikseringsmetoden oss et praktisk og effektivt alternativ for immobilisering av rotter, noe som sikrer en pålitelig garanti for stabil og jevn akupunkturoperasjon og nåleretensjonsprosess.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Alle forfatterne har ikke oppgitt noen potensielle interessekonflikter.
Acknowledgments
Forfatterne ønsker å uttrykke sin takknemlighet til Figdraw vitenskapelig forskning tegning plattform av Home for Researchers for å gi materialet som brukes til å lage figur 2 i dette papiret, med autorisert lisens-ID: URUUO5699e. Dette arbeidet har mottatt støtte fra tilskudd fra National Natural Science Foundation of China (81873380, 82074566), Natural Science Foundation of Hubei Province (2022CFCO43), og National Famous Traditional Chinese Medicine Heritage Studio Construction Project of the National Administration of Traditional Chinese Medicine ([2022] No.5, [2022] No.75).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 75% alcohol | Shandong Lircon medical technology co., ltd | 2002-0059 | Disinfection |
| acupuncture needles | Beijing Luo ya shan chuan medical equipment co., Ltd. | needling | |
| Adult Sprague-Dawley (SD) rats | Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd. | SCXK 2020-0001 | The recipient subjected to fixation |
| an elevated fixation rack | Taizhou shiai instruments and equipments for scientific and teaching research Co., ltd | / | Fix rats |
| Hans electronic acupuncture apparatus | Beijing Huayun Ante Science and Technology Co. Ltd. | HANS-200A | electroacupuncture |
| Medical cotton ball | Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd. | 20172142357 | Disinfection |
| Pet electric clipper | Fenghua Xikou Lubao Knives & Scissors Electrical Appliance Factory | / | Shave the hair of rats |
| Tweezers | Qingdao Schultz Biotechnology Co., ltd | Pinch cotton balls |
References
- Liu, Z., et al. Effect of Electroacupuncture on Urinary Leakage Among Women With Stress Urinary Incontinence: A Randomized Clinical Trial. The Journal of the American Medical Association. 317 (24), 2493-2501 (2017).
- Tsuei, J. J.
- Liu, S., et al. Somatotopic Organization and Intensity Dependence in Driving Distinct NPY-Expressing Sympathetic Pathways by Electroacupuncture. Neuron. 108 (3), 436-450 (2020).
- Liu, S., et al. A neuroanatomical basis for electroacupuncture to drive the vagal-adrenal axis. Nature. 598 (7882), 641-645 (2021).
- Li, X., Wei, W., Wang, Y., Wang, Q., Liu, Z. Global Trend in the Research and Development of Acupuncture Treatment on Parkinson's Disease From 2000 to 2021: A Bibliometric Analysis. Frontiers In Neurology. 13, 906317 (2022).
- Jiang, S., et al. Application Progress of fixation methods for rodents under non anesthesia in acupuncture and moxibustion experiments domestically and abroad. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 40 (12), 1509-1514 (2021).
- Jiang, H. Z., et al. Fixation method in the study of acupuncture intervention on rats. Journal of Shanxi College of Traditional Chinese Medicine. 20 (3), 169-171 (2019).
- Wang, Y., Ning, Y., Wang, P. Y., Yang, Y. Q. Method of Placing a Rat on an Elevated Platform for Acupuncture. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 31 (5), 289-292 (2012).
- Wang, F., Xiong, J., Zeng, F., He, Z. X. A fixation frame for acupuncture and moxibustion of Shu-Mu acupoint combination in rats. Acupuncture Research. 47 (10), 938-940 (2022).
- Tu, S., P, C., Y, Y. H. Fixation method for needle warming moxibustion treatment on swinging rats bound with coat. Chinese Journal of Comparative Medicine. 31 (5), 128-132 (2021).
- Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Influence of anesthetic agent, depth of anesthesia and body temperature on cardiovascular functional parameters in the rat. Laboratory Animals. 48 (1), 6-14 (2014).
- Kiyatkin, E. A., Brown, P. L. Brain and body temperature homeostasis during sodium pentobarbital anesthesia with and without body warming in rats. Physiology & Behavior. 84 (4), 563-570 (2005).
- He, C., Zhang, C., Zhou, S., Fan, Y. Using old meshy cage cover to make a rat fixating device for acupuncture study. Acupuncture Research. 46 (4), 348-350 (2021).
- Li, Y., Lin, N., Huang, Y., Xue, X., Liu, Q. A Newly-made Rat Holder for Convenient Acupuncture Needle Insertion. Acupuncture Research. 41 (5), 466-468 (2016).
- Bielitzki, J. T., Barbee, R. W., Garber, J. Guide for the care and use of laboratory animals. 85 (3), National Academies Press (U.S.). NIH Publication No 85-23(rev) 963-965 (2011).
- Zheng, X., et al. Electroacupuncture ameliorates beta-amyloid pathology and cognitive impairment in Alzheimer disease via a novel mechanism involving activation of TFEB (transcription factor EB). Autophagy. 17 (11), 3833-3847 (2021).
- Su, X., et al. Effectiveness and Safety of Acupuncture for Vascular Cognitive Impairment: A Systematic Review and Meta-Analysis. Frontiers In Aging Neuroscience. 13, 692508 (2021).
- Wang, Q., et al. Efficacy of electroacupuncture pretreatment for myocardial injury in patients undergoing percutaneous coronary intervention: A randomized clinical trial with a 2-year follow-up. International Journal of Cardiology. 194, 28-35 (2015).
- Zhang, R., Lao, L., Ren, K., Berman, B. M. Mechanisms of acupuncture-electroacupuncture on persistent pain. Anesthesiology. 120 (2), 482-503 (2014).
