Summary
Здесь мы представляем усовершенствованный метод фиксации суспензии с использованием крысиной куртки для эффективного обездвиживания крыс во время экспериментов с иглоукалыванием. Кроме того, выясняется структура и применение этого фиксирующего аппарата, а также инструкции и оценка его использования в электроакупунктурной терапии.
Abstract
В основных экспериментальных исследованиях иглоукалывания крысы обычно используются в качестве лабораторных животных. Однако им сложно сохранять фиксированную осанку. Во время процедур электроакупунктуры важное значение имеет правильная иммобилизация крыс. В настоящее время используются различные методы фиксации крыс, в том числе наркозная фиксация, высокоплатформенная фиксация, бинтовая фиксация и фиксация самодельной крысиной шубой. Однако эти методы имеют свои ограничения, которые могут в некоторой степени повлиять на эффективность и работоспособность эксперимента. Этот протокол вводит метод подвешивания и фиксации крыс с помощью крысиной одежды. Во-первых, крысы одеты в крысиные куртки, которые соответствуют форме их тела, пользуясь их предпочтением темноты и норы. Операцию по иглоукалыванию можно проводить после того, как крысы наденут крысиную одежду. В подвешенном состоянии крысы относительно неподвижны, так как их конечности не могут двигаться. Этот метод фиксации не только экономичен и удобен в использовании, но и обеспечивает стабильную и надежную фиксацию крыс в удобном расслабленном положении. Это также эффективно минимизирует затраты времени, экспериментального пространства и трудовых ресурсов. Кроме того, этот метод позволяет воздействовать на большинство акупунктурных точек, используемых для иглоукалывания у крыс. В этой статье основное внимание уделяется составу устройства, включающему в себя специально разработанную крысиную оболочку, приподнятую стойку фиксации и их соединительные конструкции. Кроме того, будет представлен наглядный пример, демонстрирующий применение метода фиксации суспензии на основе одежды крыс в процедурах электроакупунктуры у крыс.
Introduction
Иглоукалывание - это традиционная терапия, характеризующаяся уколами в определенных акупунктурных точках или других положениях для профилактики и лечения заболеваний. Электроакупунктура сочетает в себе нитевидные иглы с электростимуляцией1, что позволяет точно контролировать количество стимуляции путем регулировки соответствующих параметров, способствуя стандартизации лечения иглоукалыванием2. В последние годы исследования механизмов электроакупунктуры продолжали расширяться и углубляться3,4, что привело к ежегодному увеличению исследований, посвященных механизмам электроакупунктуры5.
В фундаментальных исследованиях по электроакупунктуре крысы являются наиболее часто используемыми животными. Во время лечения электроакупунктурой реципиент должен оставаться неподвижным, чтобы обеспечить плавную процедуру. В отличие от клинических испытаний на людях, мелкие животные, используемые в экспериментах на животных, не могут сознательно выполнять команды во время 15-30-минутных процедур электроакупунктуры. Это ставит перед исследователями первостепенную задачу достижения стабильной и надежной фиксации. Неправильная фиксация может привести к негативным эмоциям, таким как тревога, депрессия и страху животных, что не только увеличивает риск травм для крыс и вероятность укуса для экспериментального персонала, но и влияет на стабильность и убедительность результатов исследования.
В предыдущих исследованиях исследователи часто использовали анестезию7, высокую платформенную фиксацию8, связывающую фиксацию 6,9 или фиксацию крысиной шерсти10 перед операциями иглоукалывания или электроакупунктуры. Однако, учитывая воздействие анестезии на организм11 и функции мозга12, а также учитывая, что иглоукалывание проводится пациентам в сознании в клинических случаях, анестезия может в определенной степени повлиять на результаты исследований. Поэтому, по сравнению с наркозной фиксацией, комфортная фиксация крыс в бодрствующем состоянии является лучшим вариантом.
Однако в неанестезиологическом состоянии различные методы фиксации также имеют свои соответствующие ограничения, в том числе ограниченное воздействие на акупунктурные точки из-за покрытия крысиной шерсти крысами 10, необходимость по меньшей мере двух человек для выполнения операции13, нерегулируемый размер фиксатора14 или стрессовое состояние крыс в вынужденном положении6. Чтобы решить эти технические проблемы, мы разработали крысиную оболочку и фиксирующую стойку, подходящую для акупунктурных манипуляций в большинстве частей тела крысы. Это может помочь исследователям эффективно проводить процедуры иглоукалывания на крысах.
Обоснование этого протокола заключается в следующем: во-первых, закрытый головной убор на куртке крысы использует естественную склонность крыс к темноте и рытью нор, тем самым ограничивая диапазон их деятельности. Во-вторых, связывающие веревки возле суставов конечностей крыс обеспечивают физическое сдерживание сжатия, накладывая определенные ограничения на их движения. Тем не менее, крысы по-прежнему способны прыгать и перемещаться горизонтально, даже будучи одетыми в куртку. Наконец, поскольку крысы не могут касаться земли без фиксированной точки силы в подвешенном состоянии, мы добавили устройство фиксации подвески к куртке крысы, еще больше ограничивающее их движения и обеспечивающее удержание иглы. Состав фиксирующего устройства показан на рисунке 1.
Рисунок 1: Принципиальная схема крысиной оболочки и фиксации подвески. (А) Общий вид крысиной куртки в плоском виде. (Б) Трехмерный вид крысиной куртки. (C) Специально сшитая крысиная куртка с разрезом возле акупунктурных точек на голове и пояснице. (D) Иллюстрация нескольких крыс, одновременно подвешенных на приподнятой стойке. 1: Общий вид ткани; 2: Выходное отверстие передней конечности; 3: Выход задней конечности; 4: Веревка для обвязки; 5: Полость, образовавшаяся после наложения швов; 6: Разрез для обнажения акупунктурных точек головы; 7: Разрез для обнажения акупунктурных точек спины и поясницы. 8: Положение шва. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все процедуры, проведенные на крысах в этом исследовании, соответствовали Национальному стандарту благополучия лабораторных животных и руководству по этике (2018 г.), официально принятому Китайской Народной Республикой, и Руководству по уходу и использованию лабораторных животных от Национальной академии США15. Этот протокол состоит из трех основных этапов. Во-первых, крысиные куртки шьются и подгоняются на основе индивидуальных форм тела крыс с разным весом. Далее проводится акупунктурная манипуляция по стандартным процедурам. Наконец, крысы подвешены в своих куртках, в то время как иглы остаются на месте, чтобы удовлетворить потребность в одновременном вмешательстве среди крыс в одной группе.
1. Подготовка перед иглоукалыванием
- Изготовление крысиной куртки
- Взвесьте крыс и измерьте форму их тела, прежде чем делать им куртки. Чтобы проверить пригодность этого протокола для крыс различной массы, выберите крыс весом 220 г, 300 г, 400 г и 520 г для независимых измерений их телесных размеров, охватывающих измерения от a до f, как показано на рисунке 2.
Примечание: Корреляция между пропорциями тела крыс и соответствующими им размерами курток также представлена на рисунке 2. Соответствующие параметры длины тела крыс разной массы зафиксированы в таблице 1. - Отрежьте прямоугольный кусок плотной темной ткани, чтобы сделать крысиную куртку. Используйте ткань с развернутой шириной, равной окружности, измеренной вокруг самой толстой части живота крысы. Длина ткани равна расстоянию от кончика носа крысы до основания ее хвоста (см. рисунок 2).
- Сложите ткань пополам и отрежьте верхний левый угол под углом примерно 45°-65°, чтобы получилась правая трапеция (см. рисунок 3А).
- Плотно сшейте две стороны слева хлопчатобумажной нитью. Обратитесь к Рисунку 1B и Рисунку 3B для получения инструкций.
- Вырежьте два небольших отверстия, по одному с каждой стороны ткани, чтобы через них проходили верхние и нижние конечности крысы (см. рисунок 3C). Расстояние между двумя верхними конечностями определяет расстояние между верхними отверстиями крысиной оболочки. Расстояние между двумя нижними конечностями определяет расстояние между нижними отверстиями крысиной оболочки.
- Используйте продольное расстояние между подмышкой крысы и передней частью подвздошной кости, чтобы служить расстоянием между верхним и нижним отверстиями крысиной оболочки. Используйте окружность плечевого сустава, чтобы определить окружность верхнего отверстия в крысиной куртке. Используйте обхват тазобедренного сустава для окружности нижнего отверстия в крысиной оболочке.
- Рядом с каждым отверстием пришейте длинный матерчатый ремешок, который можно скрестить и плотно обернуть вокруг тела с открывающегося конца куртки, чтобы зафиксировать крысу.
- Взвесьте крыс и измерьте форму их тела, прежде чем делать им куртки. Чтобы проверить пригодность этого протокола для крыс различной массы, выберите крыс весом 220 г, 300 г, 400 г и 520 г для независимых измерений их телесных размеров, охватывающих измерения от a до f, как показано на рисунке 2.
- Способ ношения крысиной куртки
- Наденьте перчатки, прежде чем приступить к одеванию крысы в куртку. Начните с того, что одной рукой возьмитесь за среднюю и заднюю часть крысиной куртки на стол. Другой рукой возьмите хвост крысы из клетки для кормления и аккуратно поместите его в куртку.
- По мере того, как крыса движется вперед, ее голова будет доставать до головного убора куртки. В этот момент обеими руками осторожно вытащите его левую и правую верхние конечности из отверстий в куртке.
- Возьмите веревку для завязывания с отверстия в конце куртки, перекрещивайте ее слева направо и надежно оберните вокруг туловища крысы. Плотно завяжите его с противоположной стороны ствола, чтобы обеспечить правильную фиксацию. После фиксации верхних конечностей крысы повторите ту же процедуру, чтобы зафиксировать ее нижние конечности.
- Примите меры предосторожности, чтобы не быть укушенным или поцарапанным когтями крысы, когда вытаскиваешь ее конечности из отверстий в куртке. Убедитесь, что натяжение веревки отрегулировано надлежащим образом, т. е. не слишком туго, чтобы вызвать локальную ишемию конечностей и гипоксию у крыс, и не слишком свободно, чтобы крыса могла легко вырваться (см. Видео 1).
- Стойка фиксации и S-образные железные крючки
- Стойка для фиксации состоит из двух тяжелых железных лотков (24 см в длину, 12 см в ширину и 2 см в высоту) и железной колонны (60 см в длину), которая прочно приварена к каждому лотку. Закрепите прочную железную палку (длиной 145 см) на одинаковой высоте на двух железных колоннах с помощью конструкции винтового соединения, которую можно регулировать и поддерживать на фиксированной высоте (см. Рисунок 4A).
- Для соединения крысы в куртке с железной палкой используйте S-образные крючки (диаметром 11 см). Оберните один конец крючка вокруг ремешка на куртке, а другой конец повесьте на железную палку. Используйте два S-образных крючка, чтобы закрепить крысу на палке. Пожалуйста, обратитесь к рисунку 1D и рисунку 4B для получения общей структуры.
Рисунок 2: Соответствующая диаграмма формы тела крысы и соответствующего размера крысиной куртки. На диаграмме параметр a представляет собой поперечное расстояние в задней части сустава между верхними конечностями и туловищем крысы. Эта величина используется в качестве измерения расстояния между проникающими отверстиями для верхних конечностей крысиной оболочки. Аналогично, параметр b представляет собой поперечное расстояние на спине, где двусторонние нижние конечности крысы соединяются с туловищем. Это измерение определяет расстояние между проникающими отверстиями для нижних конечностей крысиной оболочки. Параметр c обозначает окружность самой толстой части живота крысы, которая может быть использована в качестве измерения ширины ткани оболочки крысы. Параметр d представляет собой расстояние от подмышечной впадины крысы до передней части ее подвздошной кости, определяя продольное расстояние между верхним и нижним отверстиями оболочки. Параметр e соответствует продольному расстоянию от кончика носа крысы до основания ее хвоста, служащего мерой длины ткани куртки крысы. Параметр f обозначает окружность сочленения, соединяющего верхнюю конечность и туловище крысы, служащая окружностью отверстия, через которое проходят верхние конечности. Параметр g представляет собой окружность сустава, соединяющего нижние конечности и туловище крысы, определяя окружность отверстия, через которое проходят нижние конечности. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
| Масса тела (г) | Параметры формы тела (см) | ||||||
| a | b | c | d | e | f | g | |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
Таблица 1. Приведены результаты измерений параметров формы тела крыс с различной массой тела.
Рисунок 3: Диаграмма, показывающая внешний вид и использование крысиной куртки. (A) Плоский внешний вид крысиной куртки. Форма оболочки крысы напоминает прямоугольную трапецию, с отдельными отверстиями с левой и правой сторон для прохождения верхних и нижних конечностей крысы. (B) Вид крысиной куртки в разложенном виде. Закрытие головного убора создает полузакрытую полость, которая служит важным компонентом для привлечения крыс внутрь. (C) Вид сбоку на крысу, одетую в куртку. Как только конечности крысы проходят через отверстия в одежде, ремни скрещиваются над брюшной поверхностью туловища и надежно закрепляются сзади с соответствующим натяжением. Это гарантирует, что крыса будет относительно обездвижена. (D) Вид брюшной полости крысы, одетой в крысиную куртку. Вентральная поверхность куртки обнажает кожу живота крысы, обеспечивая удобный доступ для иглоукалывания в вентральных точках. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Видео 1: Надеваем крысиную куртку. В этом видео показан типичный процесс одевания крысы в куртку. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать это видео.
Рисунок 4: Схема, показывающая внешний вид и использование приподнятой стойки фиксации. (A) Приподнятая стойка фиксации. Этот стеллаж состоит в основном из двух вертикальных железных колонн (60 см в длину), приваренных к каждому лотку, а также длинной горизонтальной железной палки (длиной 145 см), расположенной параллельно земле. Саморезы используются для крепления горизонтальной палки на той же высоте, что и вертикальные колонны. (B) Крысиный подвес на стойке фиксации. Крысы, одетые в крысиные куртки, надежно крепятся к стойке фиксации с помощью двух S-образных крючков на крысу. (C) Одновременное лечение электроакупунктурой у нескольких крыс. Чтобы предотвратить любые потенциальные помехи, возникающие в результате движения хвоста, необходимо было поддерживать надлежащее расстояние между крысами, эквивалентное длине хвоста крысы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
2. Процедура электроакупунктуры
- Рутинная подготовка
- Установите стойку фиксации на горизонтальный рабочий стол или грунт.
- Перед процедурой иглоукалывания удалите шерсть вокруг акупунктурных точек с помощью электробритвы, чтобы обеспечить полное обнажение. Когда акупунктурная точка, подлежащая проколу, расположена на животе крысы, например, Гуаньюань (CV4, примерно на 25 мм ниже пупка), соответственно укоротите ширину одежды крысы, чтобы обнажить акупунктурные точки живота.
- Найдите акупунктурную точку из щели на средней линии живота, которая не закрыта крысиной оболочкой (см. рисунок 3D), а затем введите иглу.
- Когда акупунктурные точки, подлежащие проколу, находятся на голове крысы, такие как Байхуэй (GV20, расположенная в середине теменной кости), сделайте небольшой разрез в соответствующем месте на голове, чтобы полностью обнажить кожу вокруг GV20 (см. рис. 1C).
- При иглоукалывании акупунктурных точек на конечностях крыс, таких как Нэйгуань (ПК6, на внутренней стороне передней конечности, между лучевыми и локтевыми швами на расстоянии около 3 мм от лучезапястного сустава) в верхней конечности или Зусанли (ST36, на задней боковой стороне коленного сустава, примерно на 2 мм ниже головки малоберцовой кости) в нижней конечности, Из-за очевидного воздействия акупунктурных точек используйте одну руку для помощи в фиксации конечности, в то время как другая может непосредственно выполнять операцию иглоукалывания.
- Когда акупунктурная точка расположена на спине или талии крысы, например, Шэньшу (BL23, ниже 2-го поясничного позвонка, на расстоянии 6 мм от средней линии спины), вырежьте отверстие шириной примерно 2 см в центре оболочки крысы, чтобы полностью обнажить кожу соответствующего участка (см. рисунок 1C).
- Оденьте крысу в куртку. Продезинфицировав местную кожу акупунктурных точек спиртовыми тампонами, приступают к процедуре иглоукалывания.
- Техника иглоукалывания: Точно определите местоположение акупунктурной точки. Введите стерильную одноразовую акупунктурную иглу (0,16 мм x 7 мм) в акупунктурную точку крысы на соответствующую глубину.
- Электроакупунктура
- Оберните электродную проволоку вокруг горизонтального железного стержня. Этот шаг снижает риск выпадения иглы из-за гравитационной силы, действующей на зажим для электроакупунктуры. Затем надежно прикрепите конец электродной проволоки к ручке иглы.
- Включите питание и выберите подходящие параметры частоты, тока и времени. В этом эксперименте параметры были установлены на 2 Гц, 1 мА и 15 мин. После настройки параметров приступайте к процессу электроакупунктурного лечения (см. Видео 2 и Видео 3).
- Одновременная электроакупунктура на крысах: Во время лечения подвешивайте крыс в одной группе вместе на железной палке с помощью S-образных крючков и дайте им одновременно подвергнуться электроакупунктурному вмешательству.
- ПРИМЕЧАНИЕ: Железная палка должна быть не только прочной, но и достаточно длинной, чтобы лечить группу крыс одновременно. В этом эксперименте, обеспечивая соответствующее расстояние между крысами и отсутствие интерференции между крысами, можно лечить 3-4 крыс одновременно (см. рис. 4C).
- Наблюдение за реакцией крыс во время лечения электроакупунктурой: Оцените пригодность этого метода фиксации для электроакупунктуры у крыс на основе следующих факторов, таких как количество персонала, необходимого для завершения операции, время, затраченное на фиксацию крысы, реакция крыс во время лечения электроакупунктурой, количество игл, брошенных во время процедуры, и любые случайные смерти, которые могут произойти во время операции.
- Удаление игл
- По истечении заданного времени аппарат для электроакупунктуры автоматически отключится. Снимите небольшой зажим, который соединен с ручкой иглы, и осторожно извлеките акупунктурную иглу из-под кожи крысы, тем самым завершив процесс лечения электроакупунктурой.
- Ослабьте ремни, поднимите головной чехол куртки крысы и расположите крысу над клеткой. После этого крыса сможет освободиться от куртки и самостоятельно войти в клетку (см. Видео 4).
Видео 2. Иглоукалывание акупунктурных точек в поясничном отделе. В этом видео демонстрируется комплексная и последовательная процедура, включающая в себя одевание крысы в куртку, введение акупунктурных игл в акупунктурные точки на талии и последующее подключение аппарата для электроакупунктуры. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать это видео.
Видео 3. Иглоукалывание акупунктурных точек в области живота и нижних конечностей. В этом видео демонстрируется комплексная и последовательная процедура, включающая в себя одевание крысы в куртку, введение акупунктурных игл в акупунктурные точки, расположенные в брюшной полости и нижней конечности, и последующее подключение электроакупунктурного аппарата. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать это видео.
Видео 4. Снимаем крысиную оболочку. В этом видео демонстрируется привычная практика снятия куртки с крысы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать это видео.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
В данном эксперименте для лечения электроакупунктурой было отобрано в общей сложности 12 крыс и наблюдались их реакции при методе фиксации (как показано в таблице 2). Среди 12 крыс только 1 крыса демонстрировала интенсивную борьбу в течение 15-минутного периода удержания иглы электроакупунктуры. В результате своих энергичных движений игла оторвалась на полпути, составив 8,33% от общего числа крыс. Этот результат говорит о том, что используемый метод фиксации в целом демонстрирует заметную степень стабильности и надежности. Несмотря на борьбу, продемонстрированную одной крысой, большинство крыс в группе сохраняли надлежащую фиксацию иглой на протяжении всего лечения. Более того, в течение 2-месячного периода эксперимента, в течение которого этот метод использовался для иммобилизации крыс для лечения электроакупунктурой, не было зарегистрировано ни одного случая смертности крыс, что свидетельствует о безопасности этого метода фиксации для крыс.
Кроме того, в таблице 3 мы сравнили этот метод фиксации с четырьмя другими методами, описанными в литературе 9,10,13,14. Во-первых, с точки зрения стабильности, помимо несколько меньшей стабильности пятого метода с использованием недавно изготовленной фиксации крысодержателя, другие методы достигали относительно надежной фиксации. С точки зрения времени, среднее время, необходимое для фиксации одной крысы с помощью этого метода, было меньше, чем у метода фиксации свингом крысиной шерсти. В остальных методах не указывалось время, необходимое для фиксации, в соответствующих статьях; Поэтому никаких обсуждений не предусмотрено. С точки зрения количества персонала, необходимого для фиксации одной крысы, как этот метод, так и метод подвески на крысиной шерсти требовал только одного человека для завершения операции, что повышало эффективность эксперимента. Тем не менее, с точки зрения диапазона открытых акупунктурных точек, специально разработанная крысиная куртка в этом протоколе может удовлетворить требования для воздействия большинства акупунктурных точек на теле, в то время как крысиная шерсть в методе качающейся подвески в основном обнажает конечности. Что касается материалов, используемых для фиксации, материалы, необходимые для этого метода, относительно легко получить как в лабораторных, так и в повседневных условиях. Кроме того, с точки зрения положения крысы во время фиксации, естественное положение, очевидно, более удобно, чем принудительное. В целом, этот метод похож на метод фиксации подвесной подвески крысиной шерсти, но он имеет целенаправленные улучшения в ткани и дизайне крысиной куртки, что позволяет лучше воздействовать на акупунктурные точки тела. Более того, по сравнению с подвешиванием на тканевом ремне, в этом протоколе используются более прочные стальные трубы, что снижает неблагоприятные эффекты, вызванные сильным встряхиванием отдельных крыс на других крысах, когда несколько крыс одновременно проходят лечение электроакупунктурой на стойке фиксации. Это обеспечивает стабильность и достоверность экспериментальных данных.
Принимая во внимание вышеупомянутые факторы в совокупности, этот подход демонстрирует преимущества стабильности, эффективности, доступности и относительного комфорта для крыс, что делает его ценным вариантом для фиксации введения иглы.
| Способ фиксации | Количество борющихся крыс | Процент борющихся крыс (%) | Количество крыс с каплями иглы во время лечения | Процент крыс с выпадением иглы во время лечения (%) | Количество крыс, погибших во время операции | Процент крыс, погибших во время операции (%) |
| Фиксация подвески, связанная с группой куртки | 1 | 8.33 | 1 | 8.33 | 0 | 0 |
Таблица 2. Реакция неподвижных крыс на лечение электроакупунктурой (n=12).
| Порядковый номер | Способ фиксации | Стабильна и надежна ли фиксация крыс | Время, необходимое для починки крысы | Количество персонала, необходимого для починки крысы | Расположение и диапазон акупунктурных точек, которые могут быть подвергнуты воздействию | Доступность светильников или материалов | Комфортность фиксированных методов для крыс: естественное или принудительное положение | Список литературы | |||||||||||||||
| 1 | Фиксация подвеса с курткой в нашем эксперименте | √ | 50-63 с | 1 | Живот, голова, спина и поясница, конечности | Легкодоступность | Естественное положение | ||||||||||||||||
| 2 | Фиксирующая рама для акупунктуры и прижигания для комбинации акупунктурных точек Шу-Му (выбор акупунктурных точек, который сочетает в себе точки тревоги с точками обратной транспортировки) | √ | / | / | Голова, конечности, спина и поясница | Фиксирующая рама нуждается в настройке | Принудительное положение | 9 | |||||||||||||||
| 3 | Способ фиксации качающихся крыс, связанных шерстью | √ | 85-93 с | 1 | Части конечностей | Легкодоступность | Естественное положение | 10 | |||||||||||||||
| 4 | Устройство для фиксации крыс, сделанное из старой сетчатой крышки клетки | √ | / | ≥2 | Диапазон акупунктурных точек не ограничен | Легкодоступность | Принудительное положение | 13 | |||||||||||||||
| 5 | Новоиспеченный держатель для крыс | После фиксации передние и задние конечности крыс еще имеют определенную степень подвижности. Кроме того, существует определенный риск того, что точка пересечения стержня для фиксации шеи у крыс может быть слишком высокой, что может привести к удушью у крыс. Если она слишком низкая, фиксация головы крыс может быть неустойчивой. | / | / | Диапазон акупунктурных точек не ограничен | Держатель для крыс требует специальной настройки | Естественное положение | 14 | |||||||||||||||
Таблица 3. Результаты сравнения различных методов фиксации в эксперименте по иглоукалыванию и прижиганию крыс.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Было показано, что электроакупунктура оказывает хорошее терапевтическое воздействие при различных заболеваниях, таких как когнитивные нарушения 16,17, повреждение миокарда18 и воспалительная боль19. Чтобы понять механизм его действия, были проведены эксперименты на животных, в первую очередь с использованием крыс. Фиксация животных во время процедур имеет решающее значение для получения точных результатов. Несмотря на то, что во многих исследованиях электроакупунктура применялась после анестезии на животных, эта практика может препятствовать функционированию мозга и ставить под угрозу точность эксперимента. Кроме того, длительное введение анестезии удлиняет процедуру иглоукалывания и повышает шансы на падеж животных. Тем не менее, описанные неанестезирующие методы фиксации также имеют ограничения, которые были подробно рассмотрены в таблице 3.
В этом исследовании представлен новый протокол, который вводит изготовленную на заказ крысиную куртку в сочетании с приподнятой стойкой фиксации. Важнейший аспект этого протокола включает в себя создание крысиных курток соответствующих размеров в зависимости от формы тела крыс и дальнейшую их настройку в соответствии с конкретным расположением акупунктурных точек, которые нужно уколоть. Полезный совет по подбору крысиной куртки — использовать естественную склонность крысы к темноте и закапыванию, чтобы побудить ее надеть головной убор. После того, как голова крысы закреплена, последующие процедуры фиксации становятся намного проще.
После адаптивного обучения крысы продемонстрировали минимальный дискомфорт при использовании этой техники. Необходимые материалы оборудования, такие как ткани, S-образные крючки, железные палочки и другие материалы, легко доступны и экономичны, что способствует снижению затрат на эксперименты. Еще одно преимущество заключается в том, что натяжение ремней крысиной куртки можно регулировать в соответствии с размером крысы, что делает ее гибкой и контролируемой. Вся операция фиксации может быть выполнена одним человеком самостоятельно, а повышенная конфигурация устройства позволяет исследователям лечить группу мелких животных одновременно, тем самым значительно повышая эффективность эксперимента, сокращая время, затрачиваемое на весь эксперимент, и минимизируя расхождения среди одной и той же группы животных. Кроме того, приподнятая платформа устраняет необходимость в столе, так как ее можно расположить непосредственно на ровной поверхности, тем самым оптимизируя использование пространства. Кроме того, эти конструкции могут быть модифицированы и расширены для использования на других экспериментальных животных, таких как морские свинки, а также могут быть эффективно использованы в прижигании.
Одним из потенциальных ограничений этого подхода является требование к исследователям обладать высоким уровнем владения техникой, а также необходимость создания крысиных оболочек различных размеров, адаптированных к длине тела каждой крысы и расстоянию между конечностями. Кроме того, некоторые крысы неизбежно могут испытывать легкий дискомфорт и стресс при первоначальном контакте с крысиной оболочкой и фиксацией подвески. Следовательно, возникает необходимость внедрения адаптивной дрессировки крыс, проходящих лечение электроакупунктурой. Кроме того, крайне важно обращаться с этими крысами с осторожностью во время процедуры, используя мягкие поглаживания, чтобы успокоить и успокоить их в случаях возбуждения или несоблюдения. Стоит отметить, что для минимизации влияния неизбежного стресса на физическое состояние и поведенческие эксперименты крыс, контрольная группа (включая пустую контрольную группу и модельную контрольную группу) также должна пройти такое же количество обращений, связывания крысиной оболочки и повышенной фиксации одновременно с группой лечения электроакупунктурой, даже если они не получают лечение электроакупунктурой.
Таким образом, этот метод фиксации предоставляет нам удобный и эффективный вариант иммобилизации крыс, который обеспечивает надежную гарантию стабильной и гладкой работы иглоукалывания и процесса удержания иглы.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Все авторы заявили об отсутствии потенциального конфликта интересов.
Acknowledgments
Авторы выражают благодарность научно-исследовательской рисунковой платформе Figdraw Дома для исследователей за предоставление материала, использованного для создания рисунка 2 в этой статье, с авторизованным идентификатором лицензии: URUUO5699e. Эта работа получила поддержку грантов, предоставленных Национальным фондом естественных наук Китая (81873380, 82074566), Фондом естественных наук провинции Хубэй (2022CFCO43) и Проектом строительства студии наследия национальной знаменитой традиционной китайской медицины Национального управления традиционной китайской медицины ([2022] No5, [2022] No75).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 75% alcohol | Shandong Lircon medical technology co., ltd | 2002-0059 | Disinfection |
| acupuncture needles | Beijing Luo ya shan chuan medical equipment co., Ltd. | needling | |
| Adult Sprague-Dawley (SD) rats | Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd. | SCXK 2020-0001 | The recipient subjected to fixation |
| an elevated fixation rack | Taizhou shiai instruments and equipments for scientific and teaching research Co., ltd | / | Fix rats |
| Hans electronic acupuncture apparatus | Beijing Huayun Ante Science and Technology Co. Ltd. | HANS-200A | electroacupuncture |
| Medical cotton ball | Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd. | 20172142357 | Disinfection |
| Pet electric clipper | Fenghua Xikou Lubao Knives & Scissors Electrical Appliance Factory | / | Shave the hair of rats |
| Tweezers | Qingdao Schultz Biotechnology Co., ltd | Pinch cotton balls |
References
- Liu, Z., et al. Effect of Electroacupuncture on Urinary Leakage Among Women With Stress Urinary Incontinence: A Randomized Clinical Trial. The Journal of the American Medical Association. 317 (24), 2493-2501 (2017).
- Tsuei, J. J.
- Liu, S., et al. Somatotopic Organization and Intensity Dependence in Driving Distinct NPY-Expressing Sympathetic Pathways by Electroacupuncture. Neuron. 108 (3), 436-450 (2020).
- Liu, S., et al. A neuroanatomical basis for electroacupuncture to drive the vagal-adrenal axis. Nature. 598 (7882), 641-645 (2021).
- Li, X., Wei, W., Wang, Y., Wang, Q., Liu, Z. Global Trend in the Research and Development of Acupuncture Treatment on Parkinson's Disease From 2000 to 2021: A Bibliometric Analysis. Frontiers In Neurology. 13, 906317 (2022).
- Jiang, S., et al. Application Progress of fixation methods for rodents under non anesthesia in acupuncture and moxibustion experiments domestically and abroad. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 40 (12), 1509-1514 (2021).
- Jiang, H. Z., et al. Fixation method in the study of acupuncture intervention on rats. Journal of Shanxi College of Traditional Chinese Medicine. 20 (3), 169-171 (2019).
- Wang, Y., Ning, Y., Wang, P. Y., Yang, Y. Q. Method of Placing a Rat on an Elevated Platform for Acupuncture. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 31 (5), 289-292 (2012).
- Wang, F., Xiong, J., Zeng, F., He, Z. X. A fixation frame for acupuncture and moxibustion of Shu-Mu acupoint combination in rats. Acupuncture Research. 47 (10), 938-940 (2022).
- Tu, S., P, C., Y, Y. H. Fixation method for needle warming moxibustion treatment on swinging rats bound with coat. Chinese Journal of Comparative Medicine. 31 (5), 128-132 (2021).
- Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Influence of anesthetic agent, depth of anesthesia and body temperature on cardiovascular functional parameters in the rat. Laboratory Animals. 48 (1), 6-14 (2014).
- Kiyatkin, E. A., Brown, P. L. Brain and body temperature homeostasis during sodium pentobarbital anesthesia with and without body warming in rats. Physiology & Behavior. 84 (4), 563-570 (2005).
- He, C., Zhang, C., Zhou, S., Fan, Y. Using old meshy cage cover to make a rat fixating device for acupuncture study. Acupuncture Research. 46 (4), 348-350 (2021).
- Li, Y., Lin, N., Huang, Y., Xue, X., Liu, Q. A Newly-made Rat Holder for Convenient Acupuncture Needle Insertion. Acupuncture Research. 41 (5), 466-468 (2016).
- Bielitzki, J. T., Barbee, R. W., Garber, J. Guide for the care and use of laboratory animals. 85 (3), National Academies Press (U.S.). NIH Publication No 85-23(rev) 963-965 (2011).
- Zheng, X., et al. Electroacupuncture ameliorates beta-amyloid pathology and cognitive impairment in Alzheimer disease via a novel mechanism involving activation of TFEB (transcription factor EB). Autophagy. 17 (11), 3833-3847 (2021).
- Su, X., et al. Effectiveness and Safety of Acupuncture for Vascular Cognitive Impairment: A Systematic Review and Meta-Analysis. Frontiers In Aging Neuroscience. 13, 692508 (2021).
- Wang, Q., et al. Efficacy of electroacupuncture pretreatment for myocardial injury in patients undergoing percutaneous coronary intervention: A randomized clinical trial with a 2-year follow-up. International Journal of Cardiology. 194, 28-35 (2015).
- Zhang, R., Lao, L., Ren, K., Berman, B. M. Mechanisms of acupuncture-electroacupuncture on persistent pain. Anesthesiology. 120 (2), 482-503 (2014).
