Summary
Här presenterar vi en förbättrad suspensionsfixeringsmetod med hjälp av en råttjacka för att effektivt immobilisera råttor under akupunkturexperiment. Vidare klargörs uppbyggnaden och tillämpningen av denna fixeringsapparat, samt instruktioner och utvärdering för dess användning vid elektroakupunkturterapi.
Abstract
I grundläggande experimentell akupunkturforskning används råttor ofta som försöksdjur. Det är dock svårt för dem att upprätthålla en fast hållning. Under elektroakupunkturprocedurer är korrekt immobilisering av råttor avgörande. Olika metoder för råttfixering används för närvarande, inklusive anestesifixering, högplattformsfixering, bindningsfixering och fixering med en egentillverkad råttpäls. Dessa metoder har dock sina begränsningar, vilket i viss mån kan påverka försökets effektivitet och funktionsduglighet. Detta protokoll introducerar en metod för att hänga upp och fixera råttor med hjälp av råttkläder. För det första är råttor klädda i råttjackor som matchar deras kroppsform, vilket drar nytta av deras preferens för mörker och grävande. Nålningsoperationen kan sedan utföras efter att råttorna har burit råttkläder. När råttorna är upphängda är de relativt stilla, eftersom deras lemmar inte kan röra sig. Denna fixeringsmetod erbjuder inte bara ekonomiska och användarvänliga fördelar utan säkerställer också en stabil och pålitlig fixering av råttorna i en bekvämt avslappnad position. Det minimerar också effektivt tidsåtgång, experimentutrymme och arbetskraftsresurser. Dessutom möjliggör denna metod exponering av de flesta akupunkter som används för akupunktur hos råttor. Den här artikeln koncentrerar sig främst på enhetens sammansättning, som omfattar en specialdesignad råttjacka, ett upphöjt fixeringsställ och deras anslutningsstrukturer. Dessutom kommer ett illustrativt exempel att presenteras för att demonstrera tillämpningen av den upphängningsbaserade suspensionsmetoden för råttor i elektroakupunkturprocedurer på råttor.
Introduction
Akupunktur är en traditionell terapi som kännetecknas av nålning vid specifika akupunkter eller andra positioner för att förebygga och behandla sjukdomar. Elektroakupunktur kombinerar filiforma nålar med elektrisk stimulering1, vilket möjliggör exakt kontroll över mängden stimulering genom att justera relevanta parametrar, vilket främjar standardiseringen av akupunkturbehandling2. Under de senaste åren har forskningen om elektroakupunkturens mekanismer fortsatt att expandera och fördjupas3,4, vilket har lett till en årlig ökning av studier med fokus på elektroakupunkturens mekanismer5.
Inom grundforskning om elektroakupunktur är råttor det vanligaste djuret. Under elektroakupunkturbehandling måste mottagaren vara stilla för att säkerställa en smidig procedur. Till skillnad från kliniska prövningar på människor kan små djur som används i djurförsök inte följa kommandon medvetet under 15-30 minuter långa elektroakupunkturprocedurer. Detta ställer forskare inför en primär utmaning att uppnå stabil och tillförlitlig fixering. Felaktig fixering kan leda till negativa känslor som ångest, depression och rädsla hos djur6, vilket inte bara ökar risken för skador för råttor och risken att bli biten för försökspersonalen utan också påverkar forskningsresultatens stabilitet och övertalningsförmåga.
I tidigare studier har forskare ofta använt anestesifixering7, högplattformsfixering8, bindningsfixering 6,9 eller råttpälsfixering10 före akupunktur eller elektroakupunkturoperationer. Men med tanke på anestesiens effekter på kroppen11 och hjärnans funktion12, och med tanke på att akupunktur utförs på medvetna patienter i kliniska fall, kan anestesi i viss mån påverka forskningsresultaten. Därför, jämfört med anestesifixering, är bekväm fixering av råttor i vaket tillstånd ett bättre alternativ.
Men i det icke-bedövade tillståndet har olika fixeringsmetoder också sina respektive begränsningar, inklusive begränsad akupunktsexponering på grund av täckning av råttpälsen på råttor 10, behovet av minst två individer för att utföra operationen13, icke-justerbar fixatorstorlek14 eller stresstillståndet hos råttor i forcerat läge6. För att ta itu med dessa tekniska problem designade vi en råttjacka och ett fixeringsställ som lämpar sig för akupunkturmanipulation i de flesta delar av råttkroppen. Detta kan hjälpa forskare att effektivt utföra akupunkturprocedurer med råttor.
Motiveringen för detta protokoll är följande: för det första utnyttjar den stängda huvudbonaden på råttans jacka råttornas naturliga benägenhet för mörker och grävande, vilket begränsar deras aktivitetsområde. För det andra ger bindningsrepen nära lederna på råttornas lemmar fysisk kompressionsbegränsning, vilket medför vissa begränsningar för deras rörelser. Råttor kan dock fortfarande hoppa och röra sig horisontellt även när de bär jackan. Slutligen, eftersom råttor inte kan röra marken utan en fast kraftpunkt när de är upphängda, lade vi till en upphängningsanordning på råttjackan, vilket ytterligare begränsar deras rörelser och säkerställer nålretention. Fixeringsanordningens sammansättning visas i figur 1.
Figur 1: Schematisk bild av råttmanteln och upphängningsfixeringen. (A) Råttjackans allmänna utseende i en plan vy. (B) Tredimensionell bild av råttjackan. (C) Specialanpassad råttjacka med ett snitt nära akupunkterna på huvudet och ryggen midja. (D) Illustration av flera råttor samtidigt upphängda på den upphöjda ställningen. 1: Tyg övergripande vy; 2: Utlopp för framben; 3: Utlopp för bakben; 4: Knyta rep; 5: Kavitet bildas efter suturering; 6: Snitt för att exponera akupunkter i huvudet; 7: Snitt för att exponera rygg- och midjeakupunkter. 8: Suturposition. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla procedurer som utfördes på råttorna i denna studie följde National Standard for Laboratory Animal Welfare and Ethics Review Guidelines (2018) som officiellt antagits av Folkrepubliken Kina och Guide for the Care and Use of Laboratory Animals från National Academies Press15. Detta protokoll består av tre huvudsteg. För det första är råttjackorna skräddarsydda och anpassade utifrån de individuella kroppsformerna hos råttor med olika vikt. Därefter utförs akupunkturmanipulation enligt standardprocedurer. Slutligen hängs råttorna upp i sina jackor medan nålarna sitter kvar för att tillgodose behovet av samtidiga ingrepp bland råttor inom samma grupp.
1. Förberedelse före nålning
- Tillverkning av råttjackan
- Väg råttorna och mät deras kroppsform innan du gör deras jackor. För att verifiera lämpligheten av detta protokoll för råttor med varierande vikt, välj råttor som väger 220 g, 300 g, 400 g och 520 g för oberoende mätningar av deras kroppsmått, omfattande mått från a till f, som visas i figur 2.
OBS: Korrelationen mellan de kroppsliga proportionerna hos råttor och deras motsvarande jackstorlekar presenteras också i figur 2. De relevanta kroppslängdsparametrarna för råttor med olika vikt anges i tabell 1. - Klipp till en rektangulär bit tjockt, mörkt tyg för att göra en råttjacka. Använd tyget med en ovikt bredd som är lika med omkretsen mätt runt den tjockaste delen av råttans buk. Tygets längd är lika med avståndet från råttans nosspets till svansroten (se figur 2).
- Vik tyget på mitten och skär av det övre vänstra hörnet i en vinkel på cirka 45°-65° för att bilda en höger trapets (se figur 3A).
- Sy fast de två sidorna till vänster med bomullstråd. Se figur 1B och figur 3B för vägledning.
- Klipp två små hål, ett på varje sida av tyget, så att råttans övre och nedre extremiteter kan passera genom (se figur 3C). Avståndet mellan de två övre extremiteterna bestämmer avståndet mellan de övre hålen på råttjackan. Avståndet mellan de två nedre extremiteterna bestämmer avståndet mellan de nedre hålen i råttjackan.
- Använd det längsgående avståndet mellan råttans armhåla och framsidan av höftbenet för att fungera som avstånd mellan de övre och nedre hålen på råttjackan. Använd axelledens omkrets för att bestämma omkretsen på det övre hålet i råttjackan. Använd höftledens omkrets för omkretsen av det nedre hålet i råttjackan.
- Bredvid varje hål syr du en lång tygrem som kan korsas och lindas tätt runt kroppen från jackans öppningsände för att fixera råttan.
- Väg råttorna och mät deras kroppsform innan du gör deras jackor. För att verifiera lämpligheten av detta protokoll för råttor med varierande vikt, välj råttor som väger 220 g, 300 g, 400 g och 520 g för oberoende mätningar av deras kroppsmått, omfattande mått från a till f, som visas i figur 2.
- Metod för att bära råttjacka
- Använd handskar innan du fortsätter att klä råttan i jackan. Börja med att hålla i mitten och baksidan av råttjackan med ena handen på bordet. Med den andra handen håller du råttans svans från sin matningsbur och placerar den försiktigt i jackan.
- När råttan rör sig framåt kommer dess huvud att nå jackans huvudbonad. Använd nu båda händerna för att försiktigt dra ut vänster och höger övre extremiteter ur hålen i jackan.
- Ta bindrepet från jackans öppningsände, korsa det från vänster till höger och linda det säkert runt råttans stam. Knyt den hårt på motsatt sida av stammen för att säkerställa korrekt fixering. Efter fasthållningen av råttans övre extremiteter, upprepa samma procedur för att fixera dess nedre extremiteter.
- Vidta försiktighetsåtgärder för att undvika att bli biten eller riven av råttans klor när du drar ut dess lemmar ur jackhålen. Se till att repets åtdragning är korrekt justerad, dvs inte för hårt för att orsaka lokal extremitetsischemi och hypoxi hos råttor, och inte för löst, så att råttan lätt kan fly (se video 1).
- Fixeringsställ och S-formade järnkrokar
- Fixeringsstället består av två tunga järnbrickor (24 cm långa, 12 cm breda och 2 cm höga) och en järnpelare (60 cm lång) som är ordentligt svetsad på varje bricka. Fäst en massiv järnpinne (145 cm lång) på samma höjd på de två järnpelarna med hjälp av en skruvanslutningsstruktur som kan justeras och bibehållas på en fast höjd (se figur 4A).
- För att ansluta råttan som bär manteln till järnpinnen, använd de S-formade krokarna (11 cm i diameter). Vira ena änden av kroken runt remmen på jackan medan den andra änden hängs på järnpinnen. Använd två S-formade krokar för att fästa råttan på pinnen. Se figur 1D och figur 4B för den övergripande strukturen.
Figur 2: Motsvarande diagram över råttans kroppsform och matchande storlek på råttmanteln. I diagrammet representerar parametern a det tvärgående avståndet på baksidan av leden mellan de övre extremiteterna och råttans stam. Detta värde används som avståndsmätning mellan de penetrerande hålen för råttjackans övre extremiteter. På samma sätt representerar parameter b det tvärgående avståndet på ryggen där råttans bilaterala nedre extremiteter ansluter till stammen. Detta mått bestämmer avståndet mellan de penetrerande hålen för råttjackans nedre extremiteter. Parametern c betecknar omkretsen av den tjockaste delen av råttans buk, som kan användas som breddmått för tyget i råttans jacka. Parametern d representerar avståndet från råttans armhåla till framsidan av dess ilium, vilket bestämmer det längsgående avståndet mellan de övre och nedre hålen på manteln. Parametern e motsvarar det längsgående avståndet från råttans nosspets till svansroten, och fungerar som längdmåttet för råttans jackduk. Parametern f betecknar omkretsen av den artikulation som förbinder den övre extremiteten och råttans stam, och fungerar som omkretsen av hålet genom vilket de övre extremiteterna passerar. Parametern g representerar omkretsen av leden som förbinder de nedre extremiteterna och råttans stam, vilket bestämmer omkretsen av hålet genom vilket de nedre extremiteterna passerar. Klicka här för att se en större version av denna figur.
| Kroppsvikt (g) | Parametrar för kroppsform (cm) | ||||||
| a | b | c | d | e | f | g | |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
Tabell 1. Mätresultaten av kroppsformparametrar hos råttor med olika kroppsvikt.
Figur 3: Diagram som visar råttjackans fysiska utseende och användning . (A) Plan exteriör view av råttjackan. Formen på råttans mantel liknar en rätvinklig trapets, med separata öppningar på vänster och höger sida för råttans övre och nedre extremiteter att passera igenom. (B) Utfälld utsida av råttjackan. Stängningen av huvudbonaden skapar ett halvstängt hålrum, som fungerar som en avgörande komponent för att locka råttor att komma in. (C) Sidovy av en råtta klädd i jackan. När råttans lemmar passerar genom öppningarna i kläderna, korsas remmarna över stammens ventrala yta och fästs säkert på baksidan med lämplig spänning. Detta säkerställer att råttan är relativt immobiliserad. (D) Bukbild av en råtta klädd i råttjacka. Jackans ventrala yta exponerar råttans bukhud, vilket möjliggör bekväm åtkomst för akupunktur vid ventrala punkter. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Video 1: Ta på dig råttjackan. Den här videon visar en typisk process för att klä råttan i jackan. Klicka här för att ladda ner den här videon.
Figur 4: Diagram som visar det fysiska utseendet och användningen av det upphöjda fixeringsstället. (A) Förhöjt fixeringsställ. Detta ställ består huvudsakligen av två vertikala järnpelare (60 cm långa) svetsade till varje bricka, tillsammans med en lång horisontell järnpinne (145 cm lång) placerad parallellt med marken. Skruvar används för att fästa den horisontella pinnen i samma höjd som de vertikala pelarna. (B) Råttupphängning på fixeringsstället. Råttor som bär råttjackorna fästs säkert på fixeringsstället med två S-formade krokar per råtta. C) Samtidig elektroakupunkturbehandling på flera råttor. För att förhindra eventuella störningar till följd av svansrörelser var det nödvändigt att hålla ett lämpligt avstånd mellan råttorna, motsvarande längden på en råttas svans. Klicka här för att se en större version av denna figur.
2. Elektroakupunktur procedur
- Rutinmässig förberedelse
- Placera fixeringsstället på ett horisontellt skrivbord eller mark.
- Före nålningsproceduren, ta bort pälsen runt akupunkterna med en elektrisk rakapparat för att säkerställa fullständig exponering. När akupunkten som ska punkteras är belägen på buken på råttan, såsom Guanyuan (CV4, ca 25 mm under naveln), förkorta bredden på råttkläderna på lämpligt sätt för att exponera bukakupunkter.
- Lokalisera akupunkten från springan på bukens mittlinje som inte täcks av råttjackan (se figur 3D) och injicera sedan nålen.
- När akupunkterna som ska punkteras är på råttans huvud, såsom Baihui (GV20, som ligger i mitten av parietalbenet), gör ett litet snitt i motsvarande position på huvudet för att helt exponera huden runt GV20 (se figur 1C).
- Vid akupunkturering av akupunkter på extremiteterna hos råttor, såsom Neiguan (PC6, på insidan av frambenet, mellan radial- och ulnarsuturerna ca 3 mm från handledsleden) i övre extremiteten eller Zusanli (ST36, på den posterolaterala sidan av knäleden, ca 2 mm nedanför vadbenshuvudet) i nedre extremiteten, På grund av den uppenbara exponeringen av akupunkterna, använd ena handen för att hjälpa till att fixera lemmen, medan den andra direkt kan utföra akupunkturoperationen.
- När akupunkten är placerad på ryggen eller midjan på en råtta, såsom Shenshu (BL23, under 2:a ländkotan, 6 mm från ryggens mittlinje), skär en öppning som är cirka 2 cm bred i mitten av råttans jacka för att helt exponera huden på motsvarande ställe (se figur 1C).
- Klä råttan i jackan. Efter att ha desinficerat den lokala huden på akupunkter med alkoholservetter, börja akupunkturproceduren.
- Nålteknik: Lokalisera akupunkten exakt. Sätt in en steril engångsakupunkturnål (0.16 mm x 7 mm) i råttans akupunkt på lämpligt djup.
- Elektroakupunktur
- Linda elektrodtråden runt den horisontella järnstången. Detta steg minskar risken för att nålen faller ut på grund av gravitationskraften som verkar på elektroakupunkturklämman. Fäst sedan änden av elektrodtråden ordentligt på nålhandtaget.
- Slå på strömmen och välj lämpliga frekvens-, ström- och tidsparametrar. I detta experiment var parametrarna inställda på 2 Hz, 1 mA och 15 min. När parametrarna har justerats, påbörja elektroakupunkturbehandlingsprocessen (se video 2 och video 3).
- Samtidig elektroakupunktur på råttor: Under behandlingen, häng råttorna i samma grupp tillsammans på järnpinnen med hjälp av de S-formade krokarna och låt dem genomgå elektroakupunkturintervention samtidigt.
- OBS: Järnpinnen ska inte bara vara robust utan också tillräckligt lång för att behandla en grupp råttor samtidigt. I detta experiment, samtidigt som man säkerställer lämpligt avstånd och ingen störning mellan råttorna, kan 3-4 råttor behandlas samtidigt (se figur 4C).
- Observation av råttsvar under elektroakupunkturbehandling: Utvärdera lämpligheten av denna fixeringsmetod för elektroakupunktur hos råttor baserat på följande faktorer, såsom antalet personal som krävs för att slutföra operationen, tid det tar att fixa en råtta, råttornas svar under elektroakupunkturbehandlingen, antalet nålar som tappas under proceduren och eventuella oavsiktliga dödsfall som kan inträffa under operationen.
- Borttagning av nålarna
- När den förinställda tiden är klar stängs elektroakupunkturapparaten av automatiskt. Ta bort den lilla klämman som är ansluten till nålhandtaget och ta försiktigt bort akupunkturnålen från under råttans hud, och avsluta därmed elektroakupunkturbehandlingen.
- Lossa remmarna, lyft huvudskyddet på råttans jacka och placera råttan ovanför buren. Råttan kommer då att vara fri att frigöra sig från jackan och gå in i buren på egen hand (se video 4).
Videoklipp 2. Nålakupunkter i ländryggen. Den här videon visar den omfattande och sammanhängande proceduren som omfattar indragning av råttan i jackan, införandet av akupunkturnålar i akupunkter i midjan och den efterföljande anslutningen av en elektroakupunkturapparat. Klicka här för att ladda ner den här videon.
Videoklipp 3. Nålakupunkter i buken och nedre extremiteten. Den här videon visar den omfattande och sammanhängande proceduren som omfattar indragning av råttan i jackan, införandet av akupunkturnålar i akupunkter i buken och nedre extremiteten och den efterföljande anslutningen av en elektroakupunkturapparat. Klicka här för att ladda ner den här videon.
Videoklipp 4. Ta bort råttjackan. Den här videon visar den vanliga praxisen att ta bort jackan från råttan. Klicka här för att ladda ner den här videon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I detta experiment valdes totalt 12 råttor ut för elektroakupunkturbehandling, och deras reaktioner under fixeringsmetoden observerades (se tabell 2). Bland de 12 råttorna var det bara 1 råtta som uppvisade intensiv kamp under den 15 minuter långa elektroakupunkturnålen. Som ett resultat av dess kraftiga rörelser lossnade nålen halvvägs och stod för 8,33 % av det totala antalet råttor. Detta resultat tyder på att den fixeringsmetod som används i allmänhet uppvisar en anmärkningsvärd grad av stabilitet och pålitlighet. Trots den kamp som en råtta uppvisade, bibehöll majoriteten av råttorna i gruppen korrekt nålfixering under hela behandlingen. Dessutom, under den 2-månaders experimentella varaktigheten där denna metod användes för att immobilisera råttor för elektroakupunkturbehandling, registrerades inga fall av råttdödlighet, vilket tyder på säkerheten för denna fixeringsmetod för råttor.
I tabell 3 jämförde vi dessutom denna fixeringsmetod med fyra andra metoder som rapporterats i litteraturen 9,10,13,14. För det första, när det gäller stabilitet, bortsett från den något sämre stabiliteten hos den femte metoden med en nygjord råtthållarfixering, uppnådde de andra metoderna relativt säker fixering. Tidsmässigt var den genomsnittliga tiden som krävdes för att fixera en råtta med denna metod kortare än för fixeringsmetoden för råttpälssvängning. De återstående metoderna specificerade inte den tid som krävdes för fixering i sina respektive artiklar; Därför ges ingen diskussion. När det gäller antalet personer som krävs för att fixera en råtta, krävde både denna metod och suspensionsmetoden för råttrockssvängning endast en person för att slutföra operationen, vilket förbättrade den experimentella effektiviteten. Men när det gäller det exponerade akupunktsområdet kan den specialdesignade råttjackan i detta protokoll uppfylla kraven för att exponera de flesta akupunkter på kroppen, medan råttpälsen i svängupphängningsmetoden huvudsakligen exponerar lemmarna. När det gäller de material som används för fixering är de material som krävs för denna metod relativt lätta att få tag på i både laboratorie- och vardagsmiljöer. Dessutom, när det gäller råttans position under fixering, är den naturliga positionen uppenbarligen bekvämare än den påtvingade positionen. Sammantaget liknar denna metod fixeringsmetoden för råttrockens svängupphängning, men den har riktade förbättringar i tyget och designen av råttjackan, vilket möjliggör mer exponering av kroppsakupunkter. Dessutom, jämfört med att vara upphängd på ett tygband, använder detta protokoll kraftigare stålrör, vilket minskar de negativa effekterna som orsakas av enskilda råttors våldsamma skakningar på andra råttor när flera råttor samtidigt genomgår elektroakupunkturbehandling på fixeringsstället. Detta säkerställer stabiliteten och tillförlitligheten hos experimentella data.
Med tanke på de ovan nämnda faktorerna tillsammans uppvisar detta tillvägagångssätt fördelarna med stabilitet, effektivitet, prisvärdhet och relativ komfort för råttor, vilket gör det till ett värdefullt alternativ för nålinsättningsfixering.
| Fixeringsmetod | Antal kämpande råttor | Procent av kämpande råttor (%) | Antal råttor med nålfall under behandling | Procent av råttor med nålfall under behandling (%) | Antal råttor som dött under drift | Procent av råttorna dog under drift (%) |
| Upphängningsfixering bunden med mantelgrupp | 1 | 8.33 | 1 | 8.33 | 0 | 0 |
Tabell 2. Respons hos fixerade råttor under elektroakupunkturbehandling (n=12).
| Serienummer | Fixeringsmetod | Är fixeringen av råttor stabil och säker | Tiden som krävs för att fixa en råtta | Antal personer som krävs för att fixa en råtta | Placeringen och räckvidden av akupunkter som kan exponeras | Tillgänglighet för inventarier eller material | Komfort med fasta metoder för råttor: naturlig eller påtvingad position | Referenser | |||||||||||||||
| 1 | Upphängningsfixering bunden med mantel i vårt experiment | √ | 50-63 sek | 1 | Mage, huvud, rygg och midja, extremiteter | Lättillgänglig | Naturlig position | ||||||||||||||||
| 2 | En fixeringsram för akupunktur och moxibustion för Shu-Mu akupunktskombination (ett akupunktsval som kombinerar larmpunkterna med ryggtransportpunkterna) | √ | / | / | Huvud, extremiteter, rygg och midja | Fixeringsramen måste anpassas | Forcerad position | 9 | |||||||||||||||
| 3 | Fixeringsmetod för svängande råttor bundna med päls | √ | 85-93 sek | 1 | Lemmar delar | Lättillgänglig | Naturlig position | 10 | |||||||||||||||
| 4 | En råttfixeringsanordning gjord av ett gammalt gallerlock | √ | / | ≥2 | Utbudet av akupunkter är inte begränsat | Lättillgänglig | Forcerad position | 13 | |||||||||||||||
| 5 | En nytillverkad råtthållare | Efter fixering har råttornas främre och bakre extremiteter fortfarande en viss grad av rörlighet. Dessutom finns det en viss risk att skärningspunkten för halsens fäststång hos råttor kan vara för hög, vilket kan leda till kvävning hos råttor. Om den är för låg kan råttornas huvudfixering vara instabil. | / | / | Utbudet av akupunkter är inte begränsat | Råtthållare kräver speciell anpassning | Naturlig position | 14 | |||||||||||||||
Tabell 3. Jämförelseresultat av olika fixeringsmetoder i råttakupunktur och moxibustionsexperiment.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Elektroakupunktur har visat sig ha goda terapeutiska effekter på olika sjukdomar såsom kognitiv svikt 16,17, hjärtmuskelskada18 och inflammatorisk smärta19. För att förstå dess verkningsmekanism har djurförsök på främst råttor genomförts. Fixering av djuren under försöken är avgörande för korrekta resultat. Även om många studier har administrerat elektroakupunktur efter djurbedövning, kan denna praxis hindra hjärnans funktion och äventyra experimentell noggrannhet. Dessutom förlänger långvarig administrering av anestesi nålningsproceduren och ökar chanserna för dödlighet för djur. De rapporterade icke-anestesiliknande fixeringsmetoderna har dock också begränsningar, vilket har diskuterats noggrant i tabell 3.
Denna studie presenterar ett nytt protokoll som introducerar en skräddarsydd råttjacka i kombination med ett upphöjt fixeringsställ. Den avgörande aspekten av detta protokoll handlar om att skapa råttjackor med lämpliga storlekar baserat på råttornas kroppsformer och ytterligare anpassa dem efter den specifika placeringen av akupunkterna som ska nålas. Ett bra tips för att passa råttjackan är att utnyttja råttans naturliga benägenhet för mörker och grävande för att uppmuntra den att komma in i huvudbonaden. När råttans huvud väl är säkrat blir de efterföljande fixeringsprocedurerna mycket enklare.
Efter adaptiv träning visade råttorna minimalt obehag när de använde denna teknik. De nödvändiga utrustningsmaterialen, såsom tyger, S-formade krokar, järnpinnar och andra material, är lättillgängliga och kostnadseffektiva, vilket underlättar en minskning av experimentkostnaderna. En annan fördel är att åtdragningen av råttjackans remmar kan justeras efter råttans storlek, vilket gör den flexibel och kontrollerbar. Hela fixeringsoperationen kan utföras av en person oberoende av varandra, och den upphöjda konfigurationen av enheten gör det möjligt för forskare att behandla en grupp små djur samtidigt, vilket avsevärt förbättrar experimentets effektivitet, minskar tiden som spenderas på hela försöket och minimerar avvikelser inom samma grupp av djur. Dessutom eliminerar den upphöjda plattformen behovet av ett bord, eftersom det kan placeras direkt på plan mark, vilket optimerar det rumsliga utnyttjandet. Dessutom kan dessa konstruktioner modifieras och utvidgas för användning i andra försöksdjur, såsom marsvin, och kan också användas effektivt vid moxibustionbehandling.
En potentiell begränsning med detta tillvägagångssätt är kravet på att forskarna ska ha en hög nivå av skicklighet i tekniken, samt behovet av att skapa råttjackor av varierande dimensioner skräddarsydda för varje råttas kroppslängd och lemavstånd. Dessutom är det oundvikligt att vissa råttor kan uppleva milt obehag och stress vid första exponeringen för råttjackan och suspensionsfixeringen. Följaktligen blir det absolut nödvändigt att implementera adaptiv träning för råttor som genomgår elektroakupunkturbehandling. Dessutom är det absolut nödvändigt att hantera dessa råttor med försiktighet under proceduren, med hjälp av mjuka strykningar för att lugna och lugna dem i fall av agitation eller bristande efterlevnad. Det är värt att notera att för att minimera effekten av oundviklig stress på råttornas fysiska tillstånd och beteendeexperiment, bör kontrollgruppen (inklusive en tom kontrollgrupp och en modellkontrollgrupp) också genomgå samma mängd hantering, bindning av råttmantel och förhöjd fixering samtidigt som gruppen med elektroakupunkturbehandling. även om de inte får elektroakupunkturbehandling.
Sammanfattningsvis ger denna fixeringsmetod oss ett bekvämt och effektivt alternativ för immobilisering av råttor, vilket säkerställer en pålitlig garanti för stabil och smidig akupunkturoperation och nålretentionsprocess.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Samtliga författare har inte deklarerat några potentiella intressekonflikter.
Acknowledgments
Författarna vill uttrycka sin tacksamhet till Figdraws vetenskapliga forskningsritningsplattform för Home for Researchers för att ha tillhandahållit det material som användes för att skapa figur 2 i denna artikel, med auktoriserat licens-ID: URUUO5699e. Detta arbete har fått stöd från bidrag från National Natural Science Foundation of China (81873380, 82074566), Natural Science Foundation of Hubei-provinsen (2022CFCO43) och National Famous Traditional Chinese Medicine Heritage Studio Construction Project of the National Administration of Traditional Chinese Medicine ([2022] No.5, [2022] No.75).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 75% alcohol | Shandong Lircon medical technology co., ltd | 2002-0059 | Disinfection |
| acupuncture needles | Beijing Luo ya shan chuan medical equipment co., Ltd. | needling | |
| Adult Sprague-Dawley (SD) rats | Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd. | SCXK 2020-0001 | The recipient subjected to fixation |
| an elevated fixation rack | Taizhou shiai instruments and equipments for scientific and teaching research Co., ltd | / | Fix rats |
| Hans electronic acupuncture apparatus | Beijing Huayun Ante Science and Technology Co. Ltd. | HANS-200A | electroacupuncture |
| Medical cotton ball | Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd. | 20172142357 | Disinfection |
| Pet electric clipper | Fenghua Xikou Lubao Knives & Scissors Electrical Appliance Factory | / | Shave the hair of rats |
| Tweezers | Qingdao Schultz Biotechnology Co., ltd | Pinch cotton balls |
References
- Liu, Z., et al. Effect of Electroacupuncture on Urinary Leakage Among Women With Stress Urinary Incontinence: A Randomized Clinical Trial. The Journal of the American Medical Association. 317 (24), 2493-2501 (2017).
- Tsuei, J. J.
- Liu, S., et al. Somatotopic Organization and Intensity Dependence in Driving Distinct NPY-Expressing Sympathetic Pathways by Electroacupuncture. Neuron. 108 (3), 436-450 (2020).
- Liu, S., et al. A neuroanatomical basis for electroacupuncture to drive the vagal-adrenal axis. Nature. 598 (7882), 641-645 (2021).
- Li, X., Wei, W., Wang, Y., Wang, Q., Liu, Z. Global Trend in the Research and Development of Acupuncture Treatment on Parkinson's Disease From 2000 to 2021: A Bibliometric Analysis. Frontiers In Neurology. 13, 906317 (2022).
- Jiang, S., et al. Application Progress of fixation methods for rodents under non anesthesia in acupuncture and moxibustion experiments domestically and abroad. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 40 (12), 1509-1514 (2021).
- Jiang, H. Z., et al. Fixation method in the study of acupuncture intervention on rats. Journal of Shanxi College of Traditional Chinese Medicine. 20 (3), 169-171 (2019).
- Wang, Y., Ning, Y., Wang, P. Y., Yang, Y. Q. Method of Placing a Rat on an Elevated Platform for Acupuncture. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 31 (5), 289-292 (2012).
- Wang, F., Xiong, J., Zeng, F., He, Z. X. A fixation frame for acupuncture and moxibustion of Shu-Mu acupoint combination in rats. Acupuncture Research. 47 (10), 938-940 (2022).
- Tu, S., P, C., Y, Y. H. Fixation method for needle warming moxibustion treatment on swinging rats bound with coat. Chinese Journal of Comparative Medicine. 31 (5), 128-132 (2021).
- Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Influence of anesthetic agent, depth of anesthesia and body temperature on cardiovascular functional parameters in the rat. Laboratory Animals. 48 (1), 6-14 (2014).
- Kiyatkin, E. A., Brown, P. L. Brain and body temperature homeostasis during sodium pentobarbital anesthesia with and without body warming in rats. Physiology & Behavior. 84 (4), 563-570 (2005).
- He, C., Zhang, C., Zhou, S., Fan, Y. Using old meshy cage cover to make a rat fixating device for acupuncture study. Acupuncture Research. 46 (4), 348-350 (2021).
- Li, Y., Lin, N., Huang, Y., Xue, X., Liu, Q. A Newly-made Rat Holder for Convenient Acupuncture Needle Insertion. Acupuncture Research. 41 (5), 466-468 (2016).
- Bielitzki, J. T., Barbee, R. W., Garber, J. Guide for the care and use of laboratory animals. 85 (3), National Academies Press (U.S.). NIH Publication No 85-23(rev) 963-965 (2011).
- Zheng, X., et al. Electroacupuncture ameliorates beta-amyloid pathology and cognitive impairment in Alzheimer disease via a novel mechanism involving activation of TFEB (transcription factor EB). Autophagy. 17 (11), 3833-3847 (2021).
- Su, X., et al. Effectiveness and Safety of Acupuncture for Vascular Cognitive Impairment: A Systematic Review and Meta-Analysis. Frontiers In Aging Neuroscience. 13, 692508 (2021).
- Wang, Q., et al. Efficacy of electroacupuncture pretreatment for myocardial injury in patients undergoing percutaneous coronary intervention: A randomized clinical trial with a 2-year follow-up. International Journal of Cardiology. 194, 28-35 (2015).
- Zhang, R., Lao, L., Ren, K., Berman, B. M. Mechanisms of acupuncture-electroacupuncture on persistent pain. Anesthesiology. 120 (2), 482-503 (2014).
