斑马鱼脑解剖：鱼神经生物学技术

Overview

这段视频描述了从成年斑马鱼中微分大脑的技术。这种方法有助于获得整个大脑衍生的中微层，可以进一步研究。

Protocol

1. 成人斑马鱼脑的解剖

1. 用凝胶冰袋填充 100 mm x 15 mm 培养皿，准备解剖床。然后将盖子放在培养皿上，在 -20 °C 孵育，直到凝胶冻结。盖子顶部放置一方形干净的滤纸，用塑料薄膜包裹滤纸和培养皿。
2. 每次使用前，通过 70% 的乙醇或热量清洁和消毒所有微分检测仪器。将所有消毒解剖仪器放在解剖显微镜附近，在安乐死之前，用光纤照明将解剖床放在显微镜下。
3. 收集2条成年斑马鱼，进行整个大脑神经圈的准备：和3至4斑马鱼产生神经球从解剖的大脑区域。
4. 使用机构动物护理和使用委员会批准的协议对成年斑马鱼（8-12个月大）实施安乐死。接下来，将鱼浸入75%的乙醇中5-10秒，然后用手术刀片快速放置在解剖床上，然后在刺的水平上斩首。
   1. 为了给动物安乐死，服用过量（300毫克/升）的三甲烷硫酸盐，直到动物的心跳逐渐减慢，循环停止，然后浸入冰水中。
5. 将头部向下转动，然后用剪刀从切口侧向嘴部纵向切割。使用钳子暴露头骨的底座，并去除所有相邻的组织。从脊髓开始切开头骨的横壁，朝向结肠。
6. 使用剪刀，切割和去除视神经，然后去除头骨最横向部分的两侧在构造的水平。将头部腹侧向上转动。使用钳子，剥去头骨中其余最令人 apical 的部分。
7. 将大脑和头骨的剩余部分与解剖介质（DMEM/F12与青霉素/链霉素）一起转移到新盘中。使用微刀的塑料手柄清洁解剖介质中的脑组织，保持所有大脑结构完好无损。
8. 从这一点，继续使用整个斑马鱼大脑的协议。
   1. 或者将此协议调整到特定的大脑区域，从整个斑马鱼大脑或用新鲜手术刀解剖的脑膜、结节/二头龙或小脑产生神经球。使用神经特定的荧光斑马鱼神经转基因线，根据图1解剖大脑感兴趣的区域。

Representative Results

图1：斑马鱼大脑衍生神经球的分化。（A-C， E）整个大脑衍生神经球的相位对比图像在1天（A、DiVd1）、3（B、DiVd3）和4天（C和D、DiVd4）天内在Z分化介质中培养。（E） 12 个月大的斑马鱼整个大脑的多萨尔视图。对脑膜（Tel）、构造（Tec）和小脑（小脑）进行了解剖和收集，如图所示。（D） 从通道 0 （P0）、 1 （P1） 和 2 （P2） 的地壳、端粒体和小脑衍生的 DiVd4 神经球图像。比例栏：25 μm。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
DMEM/F12 1x	Life Technologies	11330-032
Penicillin-streptomycin	Life Technologies	15140-122
Tricaine MS-222	Sigma	A5040	stock solution of 4 mg/ml