Intravitale Microscopie van de hersenen van muizen microcirculatie met behulp van een gesloten Cranial Window
Summary
Intravitale microscopie om temporele en ruimtelijke hemodynamische en inflammatoire gebeurtenissen in de pial microcirculatie te volgen.
Abstract
Dit experimenteel model werd ontworpen om de muis te pial microcirculatie te beoordelen tijdens acute en chronische, fysiologische en pathofysiologische hemodynamische, inflammatoire en metabolische voorwaarden, met behulp van in vivo fluorescentie microscopie. Een gesloten craniale raam is geplaatst over het linker parietooccipitalis cortex van de muizen. De lokale microcirculatie wordt opgenomen in real time door het venster met behulp van epi en fluorescentie verlichting, en metingen van de schepen diameters en rode bloedcellen (RBC) snelheden worden uitgevoerd. RBC snelheid is gemeten met behulp van real-time cross-correlatie-en / of fluorescent gelabelde erytrocyten. Leukocyten en bloedplaatjes naleving van pial schepen en beoordeling van de perfusie en vasculaire lekkage worden gemaakt met behulp van fluorescentie-label markers zoals albumine-FITC en anti-CD45-antilichamen TXR. Microcirculatie kan herhaaldelijk worden opgenomen video over meerdere dagen. We gebruiken voor de eerste keer dat de venster sluiten hersenen intravitale microscopie aan de pial microcirculatie om dynamische veranderingen volgen in de loop van Plasmodium berghei ANKA infectie bij muizen en laten zien dat de expressie van CM wordt geassocieerd met microcirculatie stoornissen gekenmerkt door vaatvernauwing, sterke afname in het bloed studie flow en uiteindelijk vasculaire instorten.
Protocol
Discussion
De intravitale microscopie hier beschreven methode biedt een unieke en krachtige tool voor gedetailleerde observatie van de pial microcirculatie in de muis. Het staat de afzonderlijke vermelding van de individuele arteriolen en venulen en het meten van veranderingen van een aantal parameters zoals schip diameters, RBC snelheden, de doorbloeding, hechting aan en rollen van leukocyten, bloedplaatjes en andere bloed-elementen, vasculaire lekkage, weefsel pH en pO2 en mogelijk nog vele andere toepassingen. De in vivo</e…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit werk werd ondersteund door subsidies R01-HL87290, R01-HL87290-S1 en de R01-AI082610 van de National Institutes of Health om LJMC.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane | Baxter | FDG9623 | ||
| Carbocyanine dye Dil | Molecular Probes | D306 | ||
| Albumin-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 | ||
| Anti-CD45-TxR Ab | Invitrogen | MCD4517 | ||
| P. berghei ANKA-GFP | MR4 | MRA-865 |
References
- Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging. J. Vis. Exp. (15), (2008).
- Intaglietta, M., Tompkins, W. R. Microvascular measurements by video image shearing and splitting. Microvasc. Res. 5, 309-312 (1973).
- Briceno, J. C., Cabrales, P., Tsai, A. G., Intaglietta, M. Radial displacement of red blood cells during hemodilution and the effect on arteriolar oxygen profile. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1223-1228 (2004).
- Bishop, J. J., Nance, P. R., Popel, A. S., Intaglietta, M., Johnson, P. C. Relationship between erythrocyte aggregate size and flow rate in skeletal muscle venules. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, H113-120 (2004).
- Baldwin, A. L. Modified hemoglobins produce venular interendothelial gaps and albumin leakage in the rat mesentery. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 277, H650-H659 (1999).
- Cabrales, P., Zanini, G. M., Meays, D., Frangos, J. A., Carvalho, L. J. Murine cerebral malaria is associated with a vasospasm-like microcirculatory dysfunction, and survival upon rescue treatment is markedly increased by nimodipine. Am. J. Pathol. 176 (3), 1306-1315 (2010).
