Induktion och klinisk Poängsättning av kronisk Skovvis Experimentell Autoimmun Encephalomyelitis

Summary

Denna video visar induktion och kliniska poängsättning av en djurmodell av multipel skleros: kronisk skovvis experimentell autoimmun encefalomyelit i Da råttor. Sjukdomen, som induceras av vaccinera råttor med en emulsion som innehåller hela råtta ryggmärgen och fullständig Freunds adjuvans presenterar kliniska symtom som liknar den mänskliga sjukdomen.

Abstract

Multipel skleros (MS) är en kronisk inflammatorisk sjukdom i centrala nervsystemet (CNS) som brukar drabbar unga vuxna. Det kännetecknas av demyelinisering och gliaceller skrämma i områden som sprids i hjärnan och ryggmärgen. Dessa skador ändra nervledningen och förmå handikappande neurologiska bortfall som varierar med placeringen av demyelinated plack i CNS (t ex parapares, förlamning, blindhet, inkontinens).

Experimentell autoimmun encefalomyelit (EAE) är en modell för MS. EAE först inducerad misstag på människor under vaccination mot rabies, med hjälp av virus som odlas på kanin ryggmärgen. Rester av spinal sprutas med inaktiverat virus inducerade CNS-sjukdom. Efter dessa observationer, var en första modell av EAE som beskrivs i icke-mänskliga primater immuniserade med CNS homogenatet av floder och Schwenther 1935. EAE har sedan genererat i en mängd olika arter och kan följa olika kurser beroende på art / stam och vaccinera antigen som används. Till exempel vaccinera Lewis råttor med myelin grundläggande protein i emulsion med adjuvans framkallar en akut modell av EAE, medan samma antigen inducerar en kronisk sjukdom hos marsvin.

Det EAE modell som beskrivs här är framkallas av vaccinera DA råttor mot DA råtta ryggmärgen i emulsion i fullständig Freunds adjuvans. Råttor utveckla en uppåtstigande slapp förlamning inom 7-14 dagar efter vaccination. Kliniska tecken följer en skovvis förlöpande kurs över flera veckor. Patologi visar stora immun infiltrerar i CNS och plack demyelinisering. Särskilda överväganden för att ta hand om djur med EAE beskrivs i slutet av videon.

Protocol

Induktion och övervakning av kronisk skovvis EAE Emulsionen är en 1:1 blandning av antigen i vattenlösning tillsätts kompletteras komplett Freunds adjuvans. Det är mycket viktigt att lägga antigen i adjuvant och inte tvärtom! Det finns en hel del avfall när de gör och injicerar en emulsion. Alltid förbereda 1,5 eller 2 gånger mer än vad du behöver. Använd autoklaveras murbruk, mortel, sprutor gla…

Discussion

Det finns några viktiga överväganden för detta protokoll.

Genetik av DA råttor kommer skilja sig något beroende på vilken uppfödare de är köpt från. Dessa skillnader kan öka eller minska känsligheten hos råttor EAE induktion. Om dina råttor är mer mottagliga för EAE du kommer att vilja minska styrkan i immunisering genom att använda icke-kompletterade komplett Freunds adjuvans eller ofullständiga Freunds adjuvans. Du kan också överväga att minska mängden emulsion injiceras eller spädning av ryggmärgen homoge…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s Adjuvant	Reagent	Fisher	DF 311-360-5	Manufactured by Difco
Mycobacterium tuberculosis H37Ra	Reagent	Fisher	DF3114-33-8	Manufactured by Difco
DA rat	Animal	Harlan Sprague Dawley		Females, 7-9 weeks old.
Glass syringes – 5 ml	Tool	Fisher	14-823-10 B
Metal bridge – 18G	Tool	Fisher	14-825-17L
Luer Lok plastic syringes – 3 ml	Tool	Becton Dickinson	309585
Needles – 20G 1 1/2	Tool	Fisher	14-826-5C