מהדק hyperinsulinemic-euglycemic הוא "תקן הזהב" להערכת פעילות האינסולין. אינסולין הוא החדיר בקצב קבוע מגרה ספיגת הגלוקוז. כמות הגלוקוז אקסוגניים חדורים לפעול נגד זה טיפה מעיד על הרגישות לאינסולין. כאן ההליך מבוצע על חולדה, מודע מעצורים.
סוכרת מסוג 2 (T2D) במהירות העולה שכיחות. מאופיין בייצור אינסולין או לקוי או חוסר היכולת לנצל מיוצר אינסולין, התוצאות T2D ברמות גלוקוז גבוהות בדם. "תקן הזהב" בהערכת הרגישות לאינסולין הוא מהדק hyperinsulinemic-euglycemic או מהדק אינסולין. בהליך זה, אינסולין הוא החדיר בקצב קבוע וכתוצאה מכך לירידת רמת הסוכר בדם. כדי לשמור על רמת הסוכר בדם ברמה קבועה, גלוקוז אקסוגניים (D50) הוא החדיר לתוך מחזור הדם הורידי. כמות הגלוקוז חדורים לשמור על הומאוסטזיס מעיד על הרגישות לאינסולין. כאן, אנו מציגים את ההליך מהדק בסיסי החולדה צינתור כרוניים, מעצורים מודע. מודל זה מאפשר לדם להיאסף עם מתח מינימלי לחיה. בעקבות אינדוקציה של הרדמה, חתך קו האמצע הוא עשה את עורק התרדמה השמאלי משותפת וריד הנכונים צינתור. קטטר מוכנס סמוקות עם מלוחים heparinized, exteriorized אז ומאובטחת. בעלי חיים מותר להתאושש במשך 4-5 ימים לפני ניסויים, עם עלייה במשקל במעקב יומיומי. רק בעלי חיים אלה להחזיר משקל טרום ניתוח רמות משמשים לניסויים. ביום הניסוי, חולדות הם צמו ומחובר משאבות אינסולין המכיל D50. גלוקוז Baseline מוערכת מקו עורקי ומשמש אמת מידה לאורך הניסוי (euglycemia). בעקבות זאת, אינסולין הוא החדיר בקצב קבוע לתוך מחזור הדם הורידי. כדי להתאים את ירידת רמת הסוכר בדם, הוא החדיר D50. אם קצב עירוי D50 עולה על שיעור ספיגת, עלייה ברמת הגלוקוז תתרחש. באופן דומה, אם שיעור אינו מספיק כדי להתאים את ספיגת הגלוקוז בגוף כולו, ירידה תתרחש. טיטרציה של גלוקוז ממשיך עד קריאות גלוקוז יציבה מושגות. רמות הגלוקוז ואת שיעורי עירוי גלוקוז יציבה בתקופה זו נרשמות ודיווח. תוצאות מספקים מדד של רגישות הגוף לאינסולין. הטכניקה יכולה להיות מעודן כדי לעמוד בדרישות הניסוי הספציפי. זה עוד יותר משופר על ידי שימוש קליעים נותבים רדיואקטיבי שיכול לקבוע אינסולין גירוי ספציפי רקמות ספיגת הגלוקוז, כמו גם המחזור כולו הגלוקוז בגוף.
פיתחה בתחילה לחקירה של הרגישות לאינסולין אצל בני אדם, ההליך מהדק עתה מותאם מינים אחרים כולל חולדות מעבדה ועכברים. במודלים של בעלי חיים חקירות של תנגודת לאינסולין מספק סיוע משמעותי בהבנת הפתופיזיולוגיה של רגישות לאינסולין פתולוגיות הקשורות כמו גם זיהוי התערבויות טי…
The authors have nothing to disclose.
מחקר זה נתמך על ידי מכוני הבריאות הקנדי למחקר הגנום Canada.JS מחזיק תמיכה משכורת פרסים מן המחקר למורשת אלברטה רפואי Foundationfor, לב ושבץ קרן של Canadaand איגוד הסוכרת הקנדית. תודה מיוחדת לד"ר דוד וסרמן Bracy Bingle להוראת נוהל זה למעבדה שירר.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Intramedic Polyethylene Tubing (PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B | Internal diameter of .58mm (.023″) x Outer diameter of .965mm (.038″) |
Dow Corning Silastic Laboratory Tubing | Fisher Scientific | 11-189-15C | Internal diameter of .76mm (0.030″) x Outer diameter of 1.65mm (0.065″) |
Tygon S-50-HL Medical Tubing | Harvard Apparatus | PY2 72-1251 | Internal diameter of 3.2mm (0.125″) x Outer diameter of 4.7mm (0.1875″) |
Loctite Super Glue | Grand & Toy | 32237 | Gel Control |
Sterile Surgical Blade | VWR | BD371610 | |
Curved Micro Dissecting Forceps | George Tiemann & Co. | 160-20 | x 2 |
Straight Micro Dissecting Forceps | George Tiemann & Co. | 160-15 | x 2 |
Curved Hemostat | George Tiemann & Co. | 105-1135 | x 2 |
Straight Hemostat | George Tiemann & Co. | 105-1130 | x 2 |
Hemostat Tip Guards | Robbins Instruments, Inc. | 15.09-2-004 | |
Straight Surgery Scissors | George Tiemann & Co. | 105-402 | |
VENOJECT Multi-Sample Luer Adapter | Terumo Medical Products | 810127A | 21 guage, 1 in. |
Sterile Catheter Introducer | Becton Dickinson | 406999 | |
14-gauge Blunt Needle | Becton Dickinson | 511310 | 14 guage, 2 in. |
Sterile Surgical Suture | Johnson & Johnson Medical Products | 1679H | Silk, size 3-0 |
Non-Sterile Surgical Suture | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | SP116 | Silk, size 4-0 |
Cotton Swabs | VWR | 10806-005 | |
4ply Gauze Pads | VWR | CA43845-062 | |
Small Animal Cordless Clippers | Harvard Apparatus | 729063 | |
Isoflurane | Halocarbon Products Corp. | IPN-45 | |
Anesthetic Cart | Benson Medical Industries, Inc. | ||
70 % Ethanol | Fisher Scientific | HC-1000 | |
Betadine Antiseptic Solution | Western Drug Distribution Centre Ltd. | 105267 | |
Model 11 Plus Syringe Pump | Harvard Apparatus | 702208 | |
Stainless Steel Tubing Couplers | Harvard Apparatus | 72-4434 | 23 gauge, 0.3 in. |
Stainless Steel Tubing Plugs | Harvard Apparatus | 72-4436 | 23 gauge, 0.5 in. |
Stainless Steel Blunt Needles | Instech Laboratories, Inc. | LS22 | 22 gauge |
60 Degree Y-Connectors | Small Parts | STCY-22-05 | 22 gauge |
CritSpin Micro-hematocrit Centrifuge | Iris Sample Processing | CS12 | |
Mini Centrifuge | Fisher Scientific | 05-090-100 | |
Micro Centrifuge Tubes | VWR | 53550-778 | |
50ml polypropylene centrifuge tubes | VWR | 89004-364 | |
1ml Plastic Slip Tip Syringes | Becton Dickinson | 309602 | |
3ml Plastic Luerlok Tip Syringes | Becton Dickinson | 309585 | |
Heparin Anticoagulant Injection | Western Drug Distribution Centre Ltd. | 102824 | Manufacturer: LEO Pharma Inc. Conc. 1000 IU |
EDTA Solution | Promega Corp. | V4231 | 0.5 M, pH 8.0 |
Saline | Western Drug Distribution Centre Ltd. | ABB7983154 | Manufacturer: Hospira 0.9% Sodium Chloride |
50% Dextrose | Vetoquinol | 8DEX012D | |
Humulin-R | Eli Lilly | HI-210 | 100U/ml |
1ml Insulin Syringes | Becton Dickinson | 309311 | |
Fisherbrand* Hemato-Seal Sealant | Fisher Scientific | 02-678 | |
Fisherbrand* Microhematocrit Capillary Tubes | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
One Touch Ultra Test Strips | LifeScan, Inc. | AW 085-314H | |
One Touch Ultra Blood Glucose Meter | LifeScan, Inc. | AW 085-314B | |
Sodium Pentobarbitol | Ceva Sante Animale | 1715 138 | Conc. 54.7mg/ml |
Red Laboratory Labeling Tape | VWR | 89097-932 | |
Blue Laboratory Labeling Tape | VWR | 89097-936 | |
Weigh Scale | Fisher Scientific | 01-913-88 | |
Vortex | VWR | 58815-234 | |
Timer | VWR | 62344-641 |