Summary
hyperinsulinemic - euglycemic दबाना इंसुलिन कार्रवाई का आकलन करने के लिए "सोने के मानक 'है. इंसुलिन एक निरंतर ग्लूकोज तेज उत्तेजक दर पर संचार होता है. इस ड्रॉप काउंटर करने के लिए संचार exogenous ग्लूकोज की मात्रा इंसुलिन संवेदनशीलता का संकेत है. यहाँ प्रक्रिया एक सचेत, अनर्गल चूहे पर किया जाता है.
Protocol
एक धमनी और शिरापरक संचलन के सर्जिकल कैथीटेराइजेशन
भाग 1: धमनी और शिरापरक कैथेटर तैयारी
- कट के 15 सेमी पीई 50 (0.58 मिमी की आंतरिक व्यास (.023 ") x .965 मिमी (.038 की एक बाहरी व्यास") silastic टयूबिंग की एक 1mm अनुभाग (0.76mm (.030 ") आंतरिक व्यास x 1.65mm कट. (.065 ") मनका निरोधक के रूप में उपयोग के लिए बाहरी व्यास) निरोधक मनका. कैथेटर बाहर खींच एक बार यह जगह में है से चूहे को रोकता है.
- निरोधक मनका के लुमेन में सूक्ष्म विदारक संदंश के सुझावों को सम्मिलित करने और धीरे संदंश के सुझावों के अलावा पकड़ करने के लिए खोलने के व्यापक खिंचाव. माइक्रो विदारक संदंश की एक और जोड़ी का उपयोग निरोधक मनका के लुमेन में silastic टयूबिंग स्लाइड. मजबूत चिपकने वाला गोंद (लॉकटाइट सुपर गोंद) के साथ सुरक्षित. मनका कैथेटर के आसपास फ्लैट झूठ चाहिए. कैथेटर शुष्क करने की अनुमति दें (24 घंटों).
- 300 ग्राम चूहे के लिए, धमनी लाइन ~ मनका निरोधक जबकि कंठ लाइन ~ 3.2cm से 2.7cm है. निरोधक से कैथेटर लंबाई 0.5cm द्वारा शरीर के वजन में हर 100g वृद्धि के लिए समायोजित कर रहे हैं. यह हो सकता है पंचर सम्मिलन के दौरान पोत के रूप में कैथेटर के किनारों bevel मत करो.
- तुरंत सर्जरी से पहले, heparinized खारा (10U/ml) के साथ लाइनों को भरने, एक स्टेनलेस स्टील टयूबिंग प्लग और इथेनॉल में जगह (70%) बाँझ के साथ दोनों सिरों मुहर. एयर सम्मिलन से पहले सूखे.
भाग 2: सर्जिकल तैयारी
- प्रक्रियाएं कैलगरी पशु देखभाल के विश्वविद्यालय द्वारा अनुमोदित किया गया और समिति का प्रयोग करें और प्रयोग के लिए प्रयोगशाला पशु विज्ञान के दिशा निर्देशों के लिए theCanadian एसोसिएशन द्वारा पालन. वयस्क, पुरुष Sprague-Dawley चूहों (~ 300g) पर नीचे उल्लिखित प्रक्रियाओं का प्रदर्शन किया गया. सभी प्रक्रियाओं isoflurane के तहत प्रदर्शन कर रहे हैं, हालांकि यह इंजेक्शन anesthetics का उपयोग संभव है. सभी शल्यचिकित्सा की प्रक्रियाओं सड़न रोकनेवाला तकनीक सुनिश्चित करने के लिए प्रदर्शन कर रहे हैं. सर्जिकल उपकरण, beakers और heparinized खारा आटोक्लेव निष्फल रहे हैं. सर्जिकल दस्ताने, सीरिंज और कपास इत्तला दे दी applicators खरीदा आपूर्तिकर्ता से निष्फल कर रहे हैं.
- चूहे के वजन और परिणाम रिकॉर्ड है. वजन पशुओं की शल्य चिकित्सा के बाद निगरानी में महत्वपूर्ण होगा. केवल जानवरों कि पूर्व शल्य चिकित्सा के स्तर के लिए वजन हासिल प्रयोग के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए. एक चतनाशून्य करनेवाली औषधि बॉक्स में चूहा (3% isoflurane) anesthetize. नाक शंकु का उपयोग सर्जरी के दौरान% 2 पर ~ isoflurane चूहे रखें. सर्जरी एक कीटाणुरहित क्षेत्र है कि को बढ़ावा देता है asepsis में आयोजित किया जाना चाहिए.
- पशु शल्य साइट (गर्दन और कंधे ब्लेड) से बालों को हटाने के द्वारा तैयार करें. एक छोटे बाल क्लिपर या रासायनिक लोमनाशक इस्तेमाल किया जा सकता है. जहां सर्जरी के लिए आयोजित किया जाता है से अलग क्षेत्र में इस प्रक्रिया का प्रदर्शन.
- शल्य तालिका में जानवर सुरक्षित. सुनिश्चित करें कि जानवर पैर / आँख सजगता की उपस्थिति के लिए जाँच के द्वारा पूरी तरह anesthetized है. एक उचित त्वचा निस्संक्रामक (70% इथेनॉल betadine 70% इथेनॉल के बाद साफ़ द्वारा पीछा) के साथ सर्जिकल साइटों तैयार करें.
भाग 3: सर्जरी
- छोटे ऊर्ध्वाधर midline चीरा 1cm उरोस्थि (त्वचा longitudinally और संदंश के साथ औसत दर्जे का अक्ष के साथ उठाओ कैंची या स्केलपेल के साथ काट) के लिए बेहतर बनाओ.
- माइक्रो विदारक संदंश का उपयोग करने के लिए छोड़ दिया sternomastoid मांसपेशियों बेनकाब काटना ब्लंट. इस मांसपेशी को प्रतिबिंबित करने के लिए बाईं मन्या धमनी की लगभग 1cm बेनकाब. मन्या धमनी के तहत सूक्ष्म विदारक संदंश का प्रयोग करने के लिए जगह में धमनी पकड़. धीरे बंद मन्या धमनी से संयोजी ऊतक तंग. यह महत्वपूर्ण है या तो धमनी या तंत्रिका को नुकसान पहुँचाए बिना धमनी से vagus तंत्रिका अलग. धमनी तो पृथक 4-0 रेशम सीवन (इस सर्जरी के दौरान मन्या धमनी में हेरफेर करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा) के साथ cephalad अंत ligate. नोट: 4-0 sutures के पहले 70% इथेनॉल के लिए उपयोग के साथ निष्फल होना चाहिए.
- दाँतेदार साथ पोत दबाना, माइक्रो संदंश विदारक. एक 21 गेज VENOJECT नमूना मल्टी Luer एडाप्टर के साथ ligated अंत पंचर. स्टेनलेस स्टील टयूबिंग प्लग निकालें और ध्यान से एक बाँझ कैथेटर यह धमनी में भर्ती introducer के सहायता के साथ कैथेटर डालने. कैथेटर सुनिश्चित करना संदंश के साथ सुरक्षित है, आंशिक रूप से सूक्ष्म विदारक धमनी clamping संदंश जारी है और मनका के लिए कैथेटर डालने जारी है. इस बिंदु पर, कैथेटर की नोक महाधमनी चाप में होना चाहिए. ध्यान रखना कैथेटर जारी नहीं करने के लिए, पोत के दबाव इसे जबरदस्ती बाहर होगा.
- बाँध दो 4-0 सुरक्षित नीचे मनका sutures और एक ऊपर और पुष्टि करें कि कैथेटर नमूना होगा. 10U/ml heparinized खारा के साथ लाइन फ्लश. पुन प्लग एक स्टेनलेस स्टील टयूबिंग प्लग के साथ कैथेटर के बाहरी छोर.
- एक ही चीरा का प्रयोग, कुंद सही बाहरी गले नस का पर्दाफाश करने के लिए काटना. ध्यान से अलग करने और रेशम सीवन के साथ cephalad अंत ligate. पंचर एक 21 गेज VENOJECT नमूना मल्टी Luer एडाप्टर के साथ नस. स्टेनलेस स्टील टयूबिंग प्लग निकालें और बाँझ ग के साथ कैथेटर सम्मिलितatheter मनका और टाई मनका नीचे दो sutures introducer है. मनका के ऊपर एक तिहाई सीवन बाँध और यह नमूने है कि पुष्टि. शिरापरक लाइन 10U/mL खारा heparinized के साथ फ्लश. पुन प्लग स्टेनलेस स्टील टयूबिंग प्लग के साथ बाहरी कैथेटर अंत.
- 14 - गेज सुरंग त्वचा के नीचे कुंद सुई और कंधे ब्लेड के बीच पीठ में चीरा बनाने. सुई के माध्यम से कैथेटर थ्रेड उन्हें चूहे की पीठ पर अमल में लाना. लाइन के लगभग 4cm दिख रहा है. Tygon S-50-HL चिकित्सा टयूबिंग की 0.5cm कट, यह दोनों exteriorized कैथेटर के आसपास जगह है और आवश्यक (नस के लिए धमनी के लिए नीले, लाल) के रूप में एक टेप के साथ सुरक्षित. Retest कैथेटर प्रत्यक्षता सुनिश्चित, फ्लश और 150U/ml के साथ भरने के थक्के रोकने के लिए खारा heparinized.
- 3-0 रेशम सीवन के साथ सभी चीरों बंद. प्लेस पूर्व गर्म, पिंजरे के तल में भोजन के साथ स्वच्छ पिंजरे में प्रवण चूहा.
बी: पश्चात की देखभाल
भाग 1: तत्काल पश्चात देखभाल और निगरानी
- एक बार चूहा पूर्ण चल क्षमता और सतर्कता पशु आवास के लिए चूहे वापसी आएगा.
- चूहे 3-5 दिनों के लिए ठीक करने के लिए अनुमति दें.
- संक्रमण, दर्द, और वजन में परिवर्तन के लिए दैनिक मॉनिटर. संक्रमण चिंता का विषय हो सकता है अगर चीरा साइटों, सामान्य सुस्ती और / या दर्द से मुक्ति मनाया जाता है हो सकता है. दर्द hunched आसन, झालरदार वापस फर और चल और / या खाने के व्यवहार के अभाव ने संकेत दिया है. वजन में नुकसान के तीन दिनों के बाद सर्जरी के लिए सर्जरी के बाद तुरंत अनुभव हो सकता है, लेकिन वजन स्थिर और / या पूर्व शल्य वजन के 10% के भीतर 5 दिनों के भीतर वृद्धि चाहिए. गंभीर वजन घटाने के संक्रमण स्ट्रोक, और / या दर्द का संकेत हो सकता है.
- Retest प्रत्यक्षता सुनिश्चित करने के लिए दैनिक कैथेटर.
भाग 2: को बनाए रखने कैथेटर प्रत्यक्षता
- बाद सेशन वसूली के दौरान प्रत्येक दिन, 150U/ml heparinized खारा साथ 1ml स्लिप युक्ति सीरिंज को भरने और यह एक 22 गेज मुँहफट सुई के साथ टोपी. कुंद सुई पीई-50 टयूबिंग की 20cm में 23 गेज दूसरे छोर पर स्टेनलेस स्टील टयूबिंग युग्मक के साथ डाला जाता है.
- टयूबिंग युग्मक के साथ अंत दे 1ml सिरिंज के बाकी की तुलना में अधिक बुलबुले और पंक्ति के बाहर धक्का के द्वारा हवाई बुलबुले निकालें.
- धमनी प्लग नीचे बस hemostats के साथ चूहे से externalized लाइन दबाना.
- इस्पात कैथेटर hemostats की दूसरी जोड़ी का उपयोग प्लग निकालें.
- टयूबिंग धमनी लाइन में सिरिंज से जुड़े युग्मक डालें और externalized धमनी कैथेटर occluding hemostats रिहाई.
- सिरिंज में कैथेटर की धमनियों से रक्त Aspirate. यदि कैथेटर आसानी से आकर्षित नहीं करता है यह आवश्यक हो सकता कैथेटर के माध्यम से फ्लश समाधान की एक छोटी राशि में बहुत धीरे धक्का कैथेटर की नोक बेदखल मामले में यह पोत दीवार के खिलाफ अंकित है. कैथेटर पूरी तरह से मंजूरी दे दी है जब रक्त सिरिंज तक पहुँचता है.
- पीई 50 टयूबिंग करीब 1ml सिरिंज दबाना और सिरिंज के निपटान. ताजा 150U/ml heparinized खारा से भरा एक नई सिरिंज के साथ बदलें. टयूबिंग Unclamp और नई सिरिंज पकड़ ईमानदार, एक उंगली के साथ नई सिरिंज झटका किसी भी संभावित नए हवाई बुलबुले के ऊपर और लाइन से दूर हटाना. नोट: केयर हवा बुलबुले के रूप में एक स्ट्रोक का कारण बन सकता है सुनिश्चित किया जाना चाहिए.
- 150U/ml heparinzed खारा सुई जब तक कैथेटर लाइन स्पष्ट और रक्त के मुक्त है.
- धमनी लाइन बस टयूबिंग युग्मक नीचे hemostats के साथ चूहे से externalized दबाना. धमनी कैथेटर लाइन से सिरिंज संबंधक निकालें और यह स्टेनलेस स्टील टयूबिंग प्लग के साथ की जगह.
- Externalized धमनी कैथेटर occluding hemostats रिलीज.
- शिरापरक लाइन के लिए दोहराएँ. हालांकि, की वजह से कम शिरापरक दबाव नमूने अक्सर संभव नहीं है. यदि 150U/ml heparinzed खारा न्यूनतम प्रतिरोध के साथ संचार हो सकता है है यह संभव है कि कैथेटर अच्छी तरह से नस में तैनात है.
: सी hyperinsulinemic - Euglycemic दबाना
भाग 1: दबाना सेट अप और तैयार
- चूहे के वजन और वजन रिकॉर्ड. यह करने के लिए इंसुलिन और ग्लूकोज जलसेक दर निर्धारित करने के लिए आवश्यक हो जाएगा. फास्ट के लिए कम से कम प्रयोग करने के लिए पहले 5H चूहा. यह सुनिश्चित करता है एक भोजन के बाद राज्य में पशु और आहार स्रोतों से ग्लूकोज का योगदान है कम से कम है. एक छोटी सी / बिस्तर है कि अत्यधिक आंदोलन की सीमा के साथ कंटेनर पिंजरे में चूहे प्लेस. जानवर के चारों ओर मोड़ और स्वतंत्र रूप से दूल्हे करने में सक्षम होना चाहिए.
- लाइनों और आसव पंप सेट के रूप में चित्र 1 में देखा. P50 कनेक्शन टयूबिंग लंबाई निम्नानुसार हैं: वाई संबंधक करने के लिए सिरिंज 8cm है, चूहे के लिए वाई संबंधक 15cm है, धमनी लाइन 20cm है, और शिरापरक लाइन की लंबाई में 10cm है. स्टेनलेस स्टील टयूबिंग प्लग निकालें और कंठ और धमनी लाइनों फ्लश जलसेक सुनिश्चित करने के लिए और 10U/ml heparinized नमक के साथ क्रमशः नमूना.
- इंसुलिन निर्धारित मात्रा की आवश्यकता है. यह इंसुलिन स्तर और चूहे के वजन के आधार पर अलग अलग होंगे. यहाँ, 4mU/kg/min 2uL/min की दर से प्रशासित किया जाता है. यह एक उच्च शारीरिक खुराक है. जहां संभव हो, प्रयास जलसेक मात्रा को सीमित करने के लिए किया जाना चाहिए. इंसुलिन उचित हो और पतला प्लाज्मा की उपस्थिति में प्रशासित किया जाना चाहिए. खारा में एक 3% चूहे प्लाज्मा समाधान के लिए इस प्रयोगशाला में इंसुलिन पतला करने के लिए प्रयोग किया जाता है. इंसुलिन HumulinR 100U/ml (एली लिली) है, हालांकि अन्य तेजी से अभिनय इंसुलिन नियोजित किया जा सकता है. सुनिश्चित करें पतला इंसुलिन जलसेक सिरिंज में डाल करने से पहले अच्छी तरह से मिश्रित है.
- 50% डेक्सट्रोज तैयार. इस सिरिंज में सीधे सकता है जलसेक पंप पर रखा. 'ग्लूकोज' के साथ पंप मार्क भविष्य भ्रम से बचने के. अध्ययन के लिए इंसुलिन और ग्लूकोज की पर्याप्त मात्रा सुनिश्चित करने के लिए याद रखें. आम तौर पर पिछले 2 ~ Clamps. वर्तमान प्रोटोकॉल में, 3ml सीरिंज का इस्तेमाल कर रहे हैं.
- प्लेस और हार्वर्ड उपकरण 11 मॉडल प्लस सिरिंज पंप्स पर ग्लूकोज, इंसुलिन सीरिंज. अग्रिम वाई संबंधक और एक hemostat के साथ दबाना लाइन के लिए ग्लूकोज. अग्रिम जानवर के लिए इंसुलिन hemostat के साथ लाइन दबाना. लाइनों को दबाना और चूहे 30min के लिए आराम करने के लिए प्रयोग शुरू करने से पहले अनुमति. नोट: hemostat टिप गार्ड के क्रम में स्थायी बचने के लिए लाइनों के के crimping सुझाव दिया है.
- प्लाज्मा संग्रह के लिए अपकेंद्रित्र और EDTA लेपित ट्यूबों तैयार. वर्तमान अध्ययन में, अतिरिक्त रक्त के नमूनों को एक बार जानवर clamped है प्राप्त किया जाएगा.
भाग 2: प्रायोगिक प्रोटोकॉल
- एक आधारभूत इंसुलिन नमूना और हेमाटोक्रिट नमूना प्राप्त किया जाना चाहिए. Hematocrit नमूना रक्त की मात्रा प्रयोग भर में बनाए रखा है सुनिश्चित करता है. आम तौर पर, hematocrit स्तर प्रारंभिक मूल्य का 10% से अधिक नहीं पड़ना चाहिए.
- एक आधारभूत ग्लूकोज नमूना प्राप्त (एक टच अल्ट्रा, LIFESCAN, Inc) और पूरे रक्त ग्लूकोज स्तर clamped हो निर्धारित. यहाँ, हम euglycemia पर क्लैंप, या 5.0-5.5mm (चित्रा 2). प्रत्येक रक्त के नमूने के बाद, 10U/ml की एक छोटी मात्रा के साथ धमनी लाइन फ्लश थक्के रोकने के लिए खारा heparinized. नोट: कोई थक्के या हवा बुलबुले पहले infusing के लिए लाइन में हैं सुनिश्चित करें. ये जानवर एक स्ट्रोक दे सकते हैं.
- इंसुलिन अर्क को प्रारंभ करें. 5-10min अंतराल पर रक्त ग्लूकोज ले लो, हर समय बिंदु पर ग्लूकोज की निगरानी. ग्लूकोज जलसेक दर के रूप में आवश्यक है जब तक एक स्थिर राज्य हासिल की है समायोजित करें. यह प्रक्रिया आम तौर पर एक परीक्षण और त्रुटि प्रक्रिया है और 2> 30min ले जा सकते हैं. ग्लूकोज के स्तर glycemia बनाए रखने की आवश्यकता प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल, प्रजातियों और शर्तों वर्तमान (चित्रा 2) पर निर्भर हैं.
- स्थिर राज्य ग्लूकोज स्तर एक निर्धारित सीमा के भीतर लगातार तीन रीडिंग हैं. यहाँ, ~ 1mm भीतर तीन रीडिंग clamped माना जाता है (जैसे 4.8, 5.2, 5.6mm). एक बार स्थिर राज्य हासिल की है, ग्लूकोज जलसेक दर एक 30min अवधि के लिए glycemia बनाए रखने के लिए आवश्यक रिकॉर्ड है. इस समय के दौरान अतिरिक्त रक्त के नमूने प्राप्त किया जा सकता है. कम से कम, एक दूसरे प्लाज्मा इंसुलिन नमूना और हेमाटोक्रिट नमूना प्राप्त किया जाना चाहिए.
- एक बार दबाना पूरा है, जानवरों आगे के परीक्षण या euthanized ऊतकों और आगे के विश्लेषण के लिए एकत्र के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. पशु पर निर्भर करता है, कैथेटर लाइनों 5-7 दिनों के लिए पेटेंट रहने सकते हैं.
डी: hyperinsulinemic Euglycemic इंसुलिन () दबाना परिणाम
जब सही ढंग से प्रदर्शन किया, दबाना प्रक्रिया चूहे के स्थिर राज्य इंसुलिन संवेदनशीलता का आकलन है. क्लैंप से प्राप्त डाटा को पेश करने में, यह आवश्यक है ग्लूकोज का स्तर और ग्लूकोज जलसेक दर दस्तावेज़. 30min (चित्रा 3) की एक न्यूनतम के एक समय के पाठ्यक्रम पर स्थिर ग्लूकोज का स्तर एक स्थिर राज्य के संकेत हैं . ग्लूकोज स्थिर माना जाता है केवल अगर पूरे रक्त ग्लूकोज ~ 1mm के भीतर बनाए रखा है. ग्लूकोज जलसेक दर exogenous ग्लूकोज के स्तर glycemia बनाए रखने के लिए आवश्यक बताते हैं. जहां संभव हो, इन आंकड़ों एकल, औसत मान (चित्रा 4) के बजाय एक समय के पाठ्यक्रम के रूप में दिखाया जाना चाहिए.
अन्य सिफारिश को सूचित किया जाना उपायों प्लाज्मा इंसुलिन और हेमाटोक्रिट हैं. दोनों उपवास का निर्धारण और है कि इंसुलिन की पुष्टि इंसुलिन के स्तर clamped सफलतापूर्वक प्रशासित किया गया है और उपचार समूहों (चित्रा 5) के बीच के स्तर में कोई मतभेद का पता लगाने जाएगा. प्राप्त करने के आधारभूत और इंसुलिन क्लैंप के समापन पर हेमाटोक्रिट उपायों (चित्रा 6) का सुझाव दिया जाता है. यह सुनिश्चित करें hematocrit स्तर और रक्त की मात्रा और प्रवाह में प्रयोग के साथ परिवर्तन के दौरान अधिक से अधिक 5% गिरावट नहीं ग्लूकोज निपटान को प्रभावित नहीं है.
चित्रा 1 सेट अप प्रायोगिक. चित्रा 1 दबाना प्रक्रिया के दौरान अनर्गल, होश में चूहे से पता चलता है. कैथेटर्स जानवर से निपटने के बिना रक्त के नमूने और सुई लेनी अनुमति देते हैं. बाईं ओर पंप्स इंसुलिन और ग्लूकोज के होते हैं.
चित्रा 2 दबाना प्रक्रिया के दौरान डेटा की उम्मीद है. आधारभूत स्तर पर एक क्लैंप (euglycemia, 5mm) को प्राप्त करने के लिए, exogenous ग्लूकोज (D50) के स्तर छेड़छाड़ कर रहे हैं जब तक आधारभूत या 'दबाना' हासिल की है.
चित्रा 3 प्लाज्मा दबाना प्रक्रिया ग्लूकोज परिणाम की उम्मीद है . जब जानवर 'clamped' है, रक्त ग्लूकोज समय और प्रयोगात्मक समूहों के पार अपेक्षाकृत स्थिर है.
चित्रा 4 दबाना प्रक्रिया के प्रतिनिधि ग्लूकोज जलसेक दर. exogenous euglycemia बनाए रखने की आवश्यकता ग्लूकोज की मात्रा अलग है. यह (चाउ खिलाया) नियंत्रण और उच्च वसा खिलाया (इंसुलिन प्रतिरोधी) जानवरों के साथ सचित्र है. उच्च वसा खिलाया जानवरों की कम glycemia बनाए रखने के लिए, इसका मुख्य कारण यह संचार इंसुलिन के लिए असंवेदनशील है संचार ग्लूकोज की आवश्यकता है.
चित्रा 5 चूहे के प्रतिनिधि प्लाज्मा इंसुलिन. इंसुलिन क्लैंप के दौरान प्लाज्मा इंसुलिन उपवास, आधारभूत प्लाज्मा इंसुलिन की तुलना में अधिक होना चाहिए. यह सुनिश्चित करता है इंसुलिन ठीक से इंसुलिन क्लैंप के दौरान जानवरों को दिलाई.
चित्रा 6 हेमाटोक्रिट रिपोर्टिंग. आधारभूत hematocrit और प्रयोग के बाद hematocrit और प्राप्त किया जाना चाहिए की सूचना दी. यह सुनिश्चित करता है hematocrit स्तर आधारभूत स्तर अत्यधिक धमनियों से रक्त के नमूने में से जिसके परिणामस्वरूप के 5% से अधिक गिरावट नहीं.
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Discussion
शुरू में मानव में इंसुलिन संवेदनशीलता की जांच के लिए विकसित की, दबाना प्रक्रिया अब प्रयोगशाला चूहों और चूहों सहित अन्य प्रजातियों के लिए अनुकूलित किया गया. इंसुलिन प्रतिरोध की जांच पशु मॉडल में इंसुलिन संवेदनशीलता और संबद्ध विकृतियों के pathophysiology को समझने के रूप में के रूप में अच्छी तरह से कि नैदानिक मूल्य 1,2 है उपचारात्मक उपायों की पहचान करने में एक महत्वपूर्ण सहायता प्रदान करता है. पशुओं में इंसुलिन संवेदनशीलता का मूल्यांकन के लिए कई तरीकों 3 नियोजित किया गया है. इस तरह की तकनीक ग्लूकोज सहिष्णुता परीक्षण की विविधताओं (GTTs) और इंसुलिन सहिष्णुता परीक्षण (ITTs) 4-6 के रूप में के रूप में अच्छी तरह से इंसुलिन संवेदनशीलता / प्रतिरोध उपवास स्थिर राज्य 7-9 स्थितियों से प्राप्त की अनुक्रमित शामिल हैं. हालांकि, जब इंसुलिन संवेदनशीलता प्राथमिक प्रयोगात्मक उद्देश्य और तकनीकी व्यवहार्यता इंसुलिन दबाना सीमित नहीं है मानक बनी हुई है. यहाँ हम होश में, अनर्गल चूहे में सबसे बुनियादी दबाना प्रक्रिया मौजूद है. इंसुलिन एक निरंतर दर पर प्रशासित है, जबकि चर exogenous ग्लूकोज glycemia बनाए रखने के लिए संचार होता है. जानवर के संचलन के लिए प्रवेश धमनी और कंठ कैथेटर के आरोपण के माध्यम से प्राप्त की है. जानवर (हैंडलिंग) तनाव और संज्ञाहरण को बदल ग्लूकोज प्रवाह और इंसुलिन संवेदनशीलता के रूप में, एक मॉडल है कि इन कारकों में कम से कम इष्ट है और इस प्रक्रिया में उपयोग.
इंसुलिन दबाना सामान्यतः मधुमेह, हृदय और दवा जांच में प्रयोग किया जाता है. प्रक्रिया के संशोधन समस्थानिक tracers (रेडियोधर्मी या स्थिर) के अलावा शामिल हैं. ये शक्तिशाली है कि वे अन्वेषक निर्धारित करने के लिए कैसे विशिष्ट ऊतकों और जैव रासायनिक रास्ते क्लैंप करने के लिए प्रतिक्रिया में बदल रहे हैं की अनुमति कर रहे हैं. आम आइसोटोप 2 का उपयोग शामिल है - [14C] पूरे शरीर और ऊतक विशिष्ट ग्लूकोज निपटान के रूप में अच्छी तरह के रूप में [3H] ग्लूकोज प्रवाह की माप के लिए ग्लूकोज की जांच deoxyglucose. जब Wasserman एट अल द्वारा इंसुलिन दबाना प्रक्रिया प्रदर्शन methodological और रिपोर्टिंग मुद्दों के उत्कृष्ट समीक्षाएँ 10,11 अत्यधिक की सिफारिश कर रहे हैं .
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Disclosures
प्रक्रियाएं कैलगरी पशु देखभाल के विश्वविद्यालय द्वारा अनुमोदित किया गया और समिति का प्रयोग करें और प्रयोग के लिए प्रयोगशाला पशु विज्ञान के दिशा निर्देशों के लिए कनाडा के एसोसिएशन द्वारा पालन. लेखकों कोई परस्पर विरोधी हितों या प्रकटीकरण है.
Acknowledgments
इस अध्ययन स्वास्थ्य अनुसंधान और जीनोम Canada.JS कनाडा के संस्थानों द्वारा समर्थित किया गया है वेतन अलबर्टा विरासत Foundationfor मेडिकल रिसर्च, हार्ट और स्ट्रोक फाउंडेशन कनाडा डायबिटीज एसोसिएशन Canadaand के से समर्थन पुरस्कार रखती है. डॉ. डेविड Wasserman और घसियारा प्रयोगशाला के लिए इस प्रक्रिया को पढ़ाने के लिए Bingle Bracy के लिए विशेष धन्यवाद.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Intramedic Polyethylene Tubing (PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B | Internal diameter of .58mm (.023") x Outer diameter of .965mm (.038") |
| Dow Corning Silastic Laboratory Tubing | Fisher Scientific | 11-189-15C | Internal diameter of .76mm (0.030") x Outer diameter of 1.65mm (0.065") |
| Tygon S-50-HL Medical Tubing | Harvard Apparatus | PY2 72-1251 | Internal diameter of 3.2mm (0.125") x Outer diameter of 4.7mm (0.1875") |
| Loctite Super Glue | Grand Toy | 32237 | Gel Control |
| Sterile Surgical Blade | VWR international | BD371610 | |
| Curved Micro Dissecting Forceps | George Tiemann & Co. | 160-20 | x 2 |
| Straight Micro Dissecting Forceps | George Tiemann & Co. | 160-15 | x 2 |
| Curved Hemostat | George Tiemann & Co. | 105-1135 | x 2 |
| Straight Hemostat | George Tiemann & Co. | 105-1130 | x 2 |
| Hemostat Tip Guards | Robbins Instruments, Inc. | 15.09-2-004 | |
| Straight Surgery Scissors | George Tiemann & Co. | 105-402 | |
| VENOJECT Multi-Sample Luer Adapter | Terumo Medical Corp. | 810127A | 21 guage, 1 in. |
| Sterile Catheter Introducer | BD Biosciences | 406999 | |
| 14-gauge Blunt Needle | BD Biosciences | 511310 | 14 guage, 2 in. |
| Sterile Surgical Suture | Johnson & Johnson | 1679H | Silk, size 3-0 |
| Non-Sterile Surgical Suture | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | SP116 | Silk, size 4-0 |
| Cotton Swabs | VWR international | 10806-005 | |
| 4ply Gauze Pads | VWR international | CA43845-062 | |
| Small Animal Cordless Clippers | Harvard Apparatus | 729063 | |
| Isoflurane | Halocarbon Products Corp. | IPN-45 | |
| Anesthetic Cart | Benson Medical Instruments | ||
| 70 % Ethanol | Fisher Scientific | HC-1000 | |
| Betadine Antiseptic Solution | Western Drug Distribution Center, Ltd. | 105267 | |
| Model 11 Plus Syringe Pump | Harvard Apparatus | 702208 | |
| Stainless Steel Tubing Couplers | Harvard Apparatus | 72-4434 | 23 gauge, 0.3 in. |
| Stainless Steel Tubing Plugs | Harvard Apparatus | 72-4436 | 23 gauge, 0.5 in. |
| Stainless Steel Blunt Needles | Instech Laboratories, Inc | LS22 | 22 gauge |
| 60 Degree Y-Connectors | Small Parts, Inc. | STCY-22-05 | 22 gauge |
| CritSpin Micro-hematocrit Centrifuge | Iris Sample Processing | CS12 | |
| Mini Centrifuge | Fisher Scientific | 05-090-100 | |
| Micro Centrifuge Tubes | VWR international | 53550-778 | |
| 50ml polypropylene centrifuge tubes | VWR international | 89004-364 | |
| 1ml Plastic Slip Tip Syringes | BD Biosciences | 309602 | |
| 3ml Plastic Luerlok Tip Syringes | BD Biosciences | 309585 | |
| Heparin Anticoagulant Injection | Western Drug Distribution Center, Ltd. | 102824 | Manufacturer: LEO Pharma Inc.Conc. 1000 IU |
| EDTA Solution | Promega Corp. | V4231 | 0.5 M, pH 8.0 |
| Saline | Western Drug Distribution Center, Ltd. | ABB7983154 | Manufacturer: Hospira0.9% Sodium Chloride |
| 50% Dextrose | Vétoquinol | 8DEX012D | |
| Humulin-R | Eli Lilly | HI-210 | 100U/ml |
| 1ml Insulin Syringes | BD Biosciences | 309311 | |
| Fisherbrand* Hemato-Seal Sealant | Fisher Scientific | 02-678 | |
| Fisherbrand* Microhematocrit Capillary Tubes | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
| One Touch Ultra Test Strips | LifeScan, Inc. | AW 085-314H | |
| One Touch Ultra Blood Glucose Meter | LifeScan, Inc. | AW 085-314B | |
| Sodium Pentobarbitol | Ceva Sante Animale | 1715 138 | Conc. 54.7mg/ml |
| Red Laboratory Labeling Tape | VWR international | 89097-932 | |
| Blue Laboratory Labeling Tape | VWR international | 89097-936 | |
| Weigh Scale | Fisher Scientific | 01-913-88 | |
| Vortex | VWR international | 58815-234 | |
| Timer | VWR international | 62344-641 |
References
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat. Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. Limitations to muscle glucose uptake due to high fat feeding. Am. J. Physiol. 279, E1064-E1071 (2000).
- Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage. Am J Physiol Endocrinol Metab. 294, 15-26 (2008).
- Cho, H. Insulin resistance and a diabetes mellitus-like syndrome in mice lacking the protein kinase Akt2 (PKB beta). Science. 292, 1728-1731 (2001).
- Dubois, M. J. The SHP-1 protein tyrosine phosphatase negatively modulates glucose homeostasis. Nat Med. 12, 549-556 (2006).
- Pacini, G., Thomaseth, K., Ahren, B. Contribution to glucose tolerance of insulin-independent vs. insulin-dependent mechanisms in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 281, 693-703 (2001).
- Herbach, N. Dominant-negative effects of a novel mutated Ins2 allele causes early-onset diabetes and severe beta-cell loss in Munich Ins2C95S mutant mice. Diabetes. 56, 1268-1276 (2007).
- Maeda, N. Diet-induced insulin resistance in mice lacking adiponectin/ACRP30. Nat Med. 8, 731-737 (2002).
- Potenza, M. A., Marasciulo, F. L., Tarquinio, M., Quon, M. J., Montagnani, M. Treatment of spontaneously hypertensive rats with rosiglitazone and/or enalapril restores balance between vasodilator and vasoconstrictor actions of insulin with simultaneous improvement in hypertension and insulin resistance. Diabetes. 55, 3594-3603 (2006).
- Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse. Diabetes. 55, 390-397 (2006).
- Wasserman, D. H., Ayala, J. E., McGuinness, O. P.
