壁龛和干细胞如何在发展过程中形成的,是一个具有实际意义的重要问题。在<em>果蝇</em>卵巢,生殖系干细胞和体龛的形式在幼虫发育。本视频演示了如何解剖,染色和安装从晚三龄(LL3)女性性腺<em>果蝇</em>幼虫。
许多器官取决于其发展的干细胞,胚胎发育过程中和在成年生活中的保养或维修。因此,了解如何干细胞的形式,以及如何与环境互动的了解发展,动态平衡和疾病的关键。曾担任果蝇卵巢生殖系干细胞与他们的躯体支持细胞(利基)1,2(GSCs)的相互作用的一个有影响力的模型。的利基和GSCs已知的位置,再加上基因操纵他们的能力,使研究人员阐明了各种干细胞及其龛3-12之间的相互作用。
尽管控制GSC维护和分化机制的信息财富,相对鲜为人知的是,如何GSCs和他们的体龛在发展过程中形成。约18体龛,其细胞成分,包括终端长丝和帽细胞(图1),在第三幼虫龄 13-17形式。 GSCs源于原始生殖细胞(PGCs)。 PGCS增殖早期幼虫阶段,但形成的利基的PGCS分组成为GSCs 7,16,18,19。总之,体利基细胞的GSCs一个功能单位,生产鸡蛋整个生物体的寿命。
就形成的GSC单位许多问题仍然悬而未决。如壁龛和干细胞前体的前体细胞,或代内PGCS不对称,因为他们成为GSCs之间的协调过程,最好是能在幼虫研究。然而,有条不紊幼虫卵巢发育的研究是身体具有挑战性。首先,幼虫卵巢小。即使在后期幼体阶段,他们只有100μm的跨越。此外,卵巢是透明的,嵌入在白色脂肪组织。在这里,我们描述一个孤立晚三龄(LL3) 果蝇幼虫,用荧光抗体染色,卵巢的一步一步的协议。我们提供了一些问题,如定位卵巢,染色和洗涤不下沉的组织,确保抗体渗透到组织的技术解决方案。该协议可应用于早期幼虫期和幼虫睾丸以及。
本视频演示晚三龄幼虫卵巢的隔离和染色协议。要经常和可靠地执行这一协议,应注意以下几点:
The authors have nothing to disclose.
IM是由居里夫人重新整合的赠款支持。这项工作是由以色列科学基金资助没有的支持。 1146年至1108年,由海伦和马丁金梅尔在魏茨曼科学研究所的干细胞研究和Leir慈善基金会。
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
NaCl | J.T.Baker | |||
Kcl | Merck | |||
CaCl2 | Sigma-Aldrich | |||
MgCl2 | Merck | |||
Sucrose | J.T.Baker | |||
Hepes | Sigma-Aldrich | |||
PBS | Sigma-Aldrich | |||
Triton X-100 | Sigma-Aldrich | |||
Albumin Bovine Fraction V | MP Biomedicals | 160069 | ||
Dumont biology tweezers 5 dumstar polished | FST Fine Science Tools | 11295-10 | ||
Nickel plated pin holder | FST Fine Science Tools | 26018-17 | ||
s.s minutien pins 0.1mm diam, 10mm long | FST Fine Science Tools | 26002-10 | ||
9 well plates 85X100 mm, 22mm o.d.x7mm deep | CORNING | 7220-85 | ||
Stereo Microscope MZ 16.5 with a standard transmitted light base TL ST | Leica | |||
6 well plates | Costar | 3516 | ||
Slides | Menzel Glaser GmbH | 798 | ||
Cover slips | Corning | 2940-223 | ||
Mounting media | Vectashield | H-1200 | ||
Cell strainer | Falcon | FAL352350 | ||
1B1 antibody | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
Anti-Traffic Jam | Laboratory of Dr. Dorothea Godt | |||
Anti-Vasa | Laboratory of Dr. Ruth Lehmann | |||
Anti β-Galactosidase | Cappel | |||
Secondary Antibodies | Jackson ImmunoResearch |