Bu makale, kraniyofasiyal gelişimi sırasında sinyalizasyon ve yüzey sefalik ektoderm desenlendirme özellikleri test etmek için tasarlanmış bir doku nakli tekniği açıklar.
Abstract
Erişilebilirlik kuş embriyoların deneysel embriyologlar kalkınma ve desenlendirme ve omurgalıların morfolojilerinden (örneğin, 1, 2, 3, 4) düzenleyen doku etkileşimleri rol sırasında hücre kaderi anlamaya yardımcı olmuştur. Burada, yüz gelişimi sırasında ektodermal dokuların sinyalizasyon ve desenlendirme özelliklerini test etmek için bu erişilebilirlik yararlanan bir yöntem göstermektedir. Bu deneylerde, aynı bölgede ya da bir civciv embriyo ektopik bölge üzerine, bıldırcın ya da fare üst çene kapsayan yüzey sefalik ektoderm nakli bıldırcın-chick 5 veya fare civciv 6 kimeralar oluşturmak. Civciv içine nakli için donör doku olarak bıldırcın kullanımı, böylece araştırmacılar host ve donör dokuları 7 ayırt etmek için izin, bıldırcın içinde mevcut değil civciv hücreleri nucleolar marker yararlanmak için geliştirilmiştir . Aynı şekilde, bize fare civciv kuruntulardan 8 host ve donör dokuları ayırt etmek için izin verir, tekrarlayan bir unsur fare genomunda mevcut ve yayg ifade edilir. Bu bize çeşitli mutant embriyolardan elde edilen ektoderm sinyalizasyon özellikleri test etmek için izin verecek, çünkü donör doku olarak fare ektoderm kullanımı büyük ölçüde, bu doku etkileşimleri anlayışımızı uzatacaktır.
Protocol
1. Donör Doku hazırlanması Kültür ortamı hazırlayın, cam pimleri keskinleştirmek, tungsten iğneler keskinleştirmek. Kabuk embriyonun toplayın, buz gibi soğuk PBS içinde yıkayın. 10 ml şırınga ve 18 gauge iğne ile yumurta kabuğu sivri ucundan 1.0 mL albumin çıkarın. Makas noktasını kullanarak kabuğun üstünde küçük bir delik açın ve sonra embriyo maruz dairesel bir açılış kesip DMEM (serum serbest, oda sıcakl?…
Discussion
Bu nakli yöntemi kullanarak bize ektoderm dorsoventral polarite ve üst çene proximodistal uzatma düzenleyen sinyal bilgisini içerdiğini belirlemek için izin verdi. Bıldırcın veya fare ektoderm, ve birçok türün 6,11 arasında bu doku moleküler sinyaller korunması kullanarak sonuçların benzerlik omurgalıların hiçbirinde görülmeyen, son derece korunmuş bir sinyalizasyon merkezi olduğunu gösterir . Ayrıca, diğer araştırmacılar, farklı bölgelerin yüzey sefalik ektoderm sinyalizasyo…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, R01-DE018234 ve R01-DE019638 tarafından finanse edildi.
Hu, D., Marcucio, R. S. Assessing Signaling Properties of Ectodermal Epithelia During Craniofacial Development. J. Vis. Exp. (49), e2557, doi:10.3791/2557 (2011).