Summary

Évaluation des propriétés de signalisation ectodermique épithéliums au cours du développement cranio-facial

Published: March 24, 2011
doi:

Summary

Cet article décrit une technique de transplantation de tissus qui a été conçu pour tester les propriétés de signalisation et de structuration de la surface ectoderme céphalique au cours du développement cranio-facial.

Abstract

L'accessibilité des embryons aviaires a aidé à comprendre les embryologistes expérimentale du sort des cellules pendant le développement et le rôle des interactions tissus qui régulent la structuration et la morphogenèse des vertébrés (par exemple, 1, 2, 3, 4). Ici, nous illustrons une méthode qui exploite cette accessibilité pour tester les propriétés de signalisation et de structuration des tissus ectodermiques lors de l'élaboration du visage. Dans ces expériences, nous créons de caille-chiches 5 ou 6 souris chimères chiches en transplantant l'ectoderme de surface céphalique qui recouvre la mâchoire supérieure de caille ou de la souris sur soit la même région ou d'une région extra-utérine d'embryons de poulet. L'utilisation de la caille en tissu du donneur pour une transplantation dans les poussins a été développé pour tirer parti d'un marqueur nucléolaire présente dans les cellules de caille, mais pas chiches, permettant ainsi aux enquêteurs d'hôte et de distinguer les tissus des donneurs 7. De même, un élément répétitif est présent dans le génome de la souris et est exprimée de façon ubiquitaire, ce qui nous permet de distinguer les tissus hôtes et les donateurs dans les souris chimères chiches 8. L'utilisation de la souris comme ectoderme tissu du donneur va augmenter considérablement notre compréhension de ces interactions tissulaires, parce que cela va nous permettre de tester les propriétés de signalisation des issues de différentes ectoderme embryons mutants.

Protocol

1. Préparer le tissu du donneur Préparer les milieux de culture, d'affiner broches verre, affûter les aiguilles de tungstène. Recueillir l'embryon de la coquille, lavez-les à PBS glacé. En utilisant une seringue de 10 ml et une aiguille 18 gauge retirer 1,0 ml d'albumine de l'extrémité pointue de la coquille d'oeuf. Faire un petit trou sur le dessus de la coquille en utilisant le point de ciseaux, puis couper une ouverture circulaire pour…

Discussion

En utilisant cette méthode de transplantation nous a permis de déterminer que l'ectoderme contient des informations de signalisation qui régule la polarité dorso-ventrale et l'extension proximodistal de la mâchoire supérieure. La similitude des résultats lors de l'utilisation de caille ou ectoderme de la souris, et la conservation des signaux moléculaires dans ce tissu parmi les nombreuses espèces 6,11 indique qu'il s'agit d'un centre de signalisation hautement conservée chez…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Ce travail a été financé par R01 et R01-DE018234-DE019638.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
1x PBS   TEK TEKZR114  
DMEM   UCSF CCFDA003  
BSA   SIGMA A7906  
Dispase   GIBCO 17105-041  
35×10 mm Petri dish   Falcon 1008  
No. 5 Dumont forceps   Fine Science Tools 11252-20  
Scissors   Fine Science Tools 14058-11  
Spring Scissors   Fine Science Tools 15010-11  
Needle holder   Fine Science Tools 26016-12  
Tungsten Needle   Fine Science Tools 26000  
Microcapillary tube   Drummond Scientific Company 3-000-225-G  
Pasteur Pipets   Fisher 13-678-6B  
Spring scissors   Fine Science Tools 15010-11  
Blade holder   Fine Science Tools 10052-11  
Razor blade   Fine Science Tools 10050-00  

References

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Cite This Article
Hu, D., Marcucio, R. S. Assessing Signaling Properties of Ectodermal Epithelia During Craniofacial Development. J. Vis. Exp. (49), e2557, doi:10.3791/2557 (2011).

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