이 문서는 craniofacial 개발 중에 신호 및 표면 두부 ectoderm의 patterning 속성을 테스트하도록 설계되었습니다 조직 이식 기술을 설명합니다.
Abstract
조류 배아의 접근 실험 embryologists 개발 및 patterning과 척추 동물 morphogenesis (예, 1, 2, 3, 4) 규제 조직 상호 작용의 역할 동안 세포의 운명을 알고있었습니다. 여기, 우리는 얼굴 개발 중에 ectodermal 조직의 신호와 patterning 속성을 테스트하기 위해이 접근을 악용하는 방법을 설명합니다. 이 실험에서, 우리는 동일한 지역이나 여자는 태아의 이소성 지역 중 하나에 퀘일 드나 마우스에서 위턱을 커버 표면 두부 ectoderm를 이식하여 퀘일 – 여자 5 마우스 여자 6 chimeras를 만듭니다. 새끼로 이식을위한 기증자의 조직으로 메추라기의 사용은 그러므로 수사관은 호스트와 기증자의 조직 7 구별할 수 있도록, 메추라기에 존재하지만 여자는 세포 nucleolar 마커를 활용하기 위해 개발되었습니다. 우리는 마우스 여자 chimeras 8 호스트와 기증자의 조직을 구분 수있는, 마찬가지로 반복적인 요소는 마우스 게놈에 존재하고 ubiquitously 표시됩니다. 이 회사는 다양한 돌연변이 배아에서 파생 ectoderm의 신호 특성을 테스트할 수 있도록하기 때문에 기증자의 조직으로 마우스 ectoderm의 사용은 크게 다음과 조직 상호 작용에 대한 우리의 이해를 확장합니다.
Protocol
1. 기증자 조직을 준비 , 문화, 미디어를 준비 유리 핀을 선명하게, 텅스텐 바늘을 날카롭게. 셸에서 배아를 수집, 얼음처럼 차가운 PBS로 세척. 10 ML의 주사기와 18 게이지 바늘을 사용하면 알 껍질의 지적 끝에서 알부민 1.0 ML를 제거합니다. 가위의 지점을 사용하여 쉘의 상단에 작은 구멍을 확인한 다음 배아를 노출하는 원형 여는 잘라 DMEM (?…
Discussion
이 이식 방법을 사용하면 우리가 ectoderm가 dorsoventral 극성과 위턱의 proximodistal 확장을 조절 신호 정보가 포함되어 확인할 수있었습니다. 메추라기 또는 마우스 ectoderm, 많은 종의 6,11 중에서이 조직의 분자 신호 보존을 사용하여 결과의 유사성이 척추 동물 중에서 고도로 보존되어 신호 중심을 나타냅니다. 또한, 다른 조사는 표면 두부 ectoderm 다양한 영역의 신호 특성을 테스트하기 위해 유…
Hu, D., Marcucio, R. S. Assessing Signaling Properties of Ectodermal Epithelia During Craniofacial Development. J. Vis. Exp. (49), e2557, doi:10.3791/2557 (2011).