知识是需要许多组织培养操作活菌的确切人数。本协议描述了如何区分活细胞和死细胞和使用hemacytometer量化细胞。虽然它描述了人类神经干/前体细胞(hNSPCs)计数,它可用于其他类型的细胞。
活细胞中的一个细胞悬液体积的确切数目的知识是必需的,如电镀细胞免疫细胞化学或细胞转染,许多日常的组织文化的操作。本协议描述了一个简单,快速的方法,区分活细胞和死细胞和量化的细胞浓度和细胞总数使用hemacytometer。这个过程首先需要分离从表面生长的细胞,他们在媒体resuspending。下一步,在台盼蓝(理想的浓度,将给予20-50%象限细胞)溶液稀释细胞,放在hemacytometer。最后,在随机选择的几个象限平均活菌计数,除以一个1 毫米 2象限(0.1μL),乘以稀释倍数的体积平均给每L.细胞的数量μL总体积乘以该细胞浓度,细胞总数。本协议描述了人类神经干/前体细胞(hNSPCs)计数,但也可以用于许多其他类型的细胞。
本协议描述了一个简单和快速的方式,各种涉及细胞的实验,以确定细胞浓度。使用在3D中描述的快捷方式,可以快速,准确地判断细胞浓度和细胞总数在给定的体积。
作者要感谢在儿童医院,奥兰治县提供hNSPC文化研究所的菲利普H ·施瓦茨博士国家人类神经干细胞资源。