Summary
एक ऊतक तैयारी दृश्य और रहने वाले microcirculation के प्रयोगात्मक हेरफेर के लिए वर्णित है. Anesthetized नर चूहों में, पतली, उच्च vascularized cremaster मांसपेशियों intravital माइक्रोस्कोपी arterioles, capillaries और venules सहित microvascular नेटवर्क अध्ययन के लिए तैयार है. यह तैयारी चूहों और hamsters के लिए आसानी से अनुकूलित है.
Protocol
1. माउस बोर्ड, मांसपेशियों कुरसी, शरीर पच्चर और superfusion समाधान
- माउस बोर्ड: एक पारदर्शी आयताकार Plexiglas बोर्ड (6 "व्यापक एक्स 8" लंबा एक्स 3 / 16 "मोटी) माइक्रोस्कोप के मंच पर फिट किया जाता है." माउस बोर्ड "वह जगह है जहाँ anesthetized माउस की शल्य चिकित्सा की तैयारी के दौरान सुरक्षित है cremaster मांसपेशियों.
- बलवान कुरसी: एक पारदर्शी silastic रबर कुरसी Sylgard 184 है, जो निर्माता ° के निर्देशों के अनुसार मिश्रित है से तैयार है. एक सुविधाजनक ढालना एक 15 मिमी मोटी x 50 मिमी व्यास व्यास डिस्पोजेबल पेट्री डिश है. Sylgard ब्लॉक एक धार (चित्रा 1C देखें.) के साथ इच्छित आकार करने के लिए काट रहा है. स्पष्ट निविड़ अंधकार सिलिकॉन चिपकने वाला की एक पतली परत के लिए माउस बोर्ड को Sylgard ब्लॉक सुरक्षित करने के लिए प्रयोग किया जाता है. सहायक युक्तियाँ: पेट्री डिश में Sylgard डालने के लिये, एक घंटे के लिए एक निर्वात चैम्बर में degassing के बाद हवाई बुलबुले को हटा और स्पष्टता में सुधार. Degassing के बाद, इलाज Sylgard के लिए समय एक प्रयोगशाला ओवन में 50 डिग्री कई घंटे के लिए सी पकवान रखकर छोटा है.
- शारीरिक कील और हीटिंग मंच: (2 "एक्स 4" एक्स 15 °) कील माउस के नीचे और पीठ के खिलाफ तैनात आगे शरीर है जो अपने मूल से कुरसी पर cremaster मांसपेशियों विस्तार सुविधा tilts. सतह पर एक एल्यूमीनियम मंच शामिल प्रवाहकीय गर्मी प्रदान करता है. मंच एक डीसी बिजली की आपूर्ति (चित्रा 1 ए) से जुड़े प्रतिरोधों द्वारा गरम किया जाता है. Calibrating मंच तापमान ~ 40 डिग्री सेल्सियस 37 ~ esophageal तापमान बनाए रखता है डिग्री सेल्सियस अन्यथा, एक चिराग से दीप्तिमान गर्मी प्रयोग किया जाता है.
- पिन. आसन पर cremaster मांसपेशियों को सुरक्षित करने के लिए, पिन 0.15 मिमी कीट है कि एक 'एल' आकार में तुला है पिन से तैयार कर रहे हैं.
- शारीरिक नमक समाधान (PSS). तैयारी (सिंचित) superfused लगातार बिकारबोनिट बफर (18.2 MΩ) में ultrapure एच 2 ओ में तैयार PSS के साथ स्टॉक समाधान 20X अंतिम कार्य एकाग्रता में तैयार कर रहे हैं और एक 0.2 सुक्ष्ममापी फिल्टर के माध्यम से निष्फल. स्टॉक समाधान कई हफ्तों के लिए अच्छा रहेगा जब 4 में संग्रहीत डिग्री सेल्सियस लवण अलग बिकारबोनिट से तैयारी और उन्हें प्रयोग के दिन पर कमजोर पड़ने के साथ मिश्रण कैल्शियम बिकारबोनिट की वर्षा से बचाता है. शेयर नमक समाधान के शामिल है (mmol / एल में): NaCl 2638, 94 KCl, 4 40 MgS0, 23.4 2 CaCl. शेयर बिकारबोनिट 360 3 NaHCO है. एक प्रयोग के दिन पर, संबंधित समाधान एक बड़ा फ्लास्क में अंतिम मात्रा (आमतौर पर एक भी प्रयोग के लिए एल 2) के लिए लाया जाता है और एक पानी के स्नान में रखा ~ सी. ° 37 5% के साथ PSS Equilibrating सीओ 2 / 95 एन% ~ 15 मिनट के एक गैस disperser का उपयोग कर के लिए 2 7.4 ~ पीएच समायोजित कर देता है और वर्षा से बचाता है. PSS लगातार 5% सीओ 2 / प्रयोगों भर में 95 2 एन% के साथ bubbled है . अंतिम काम कर समाधान संरचना (mmol / एल में) है: 132 NaCl, 4.7 KCl, 4 1.2 MgS0, 2 2 CaCl, 18 3 NaHCO.
2. संज्ञाहरण और सर्जरी के लिए तैयारी
- संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति से अनुमोदन के बाद, पुरुष कम से कम 12 सप्ताह पुरानी चूहों का इस्तेमाल किया जाता है. माउस intraperitoneal इंजेक्शन (आईपी) के माध्यम से pentobarbital सोडियम (60 मिलीग्राम / किग्रा) के साथ anesthetized है. एक निरोधक ट्यूब प्रारंभिक इंजेक्शन के दौरान माउस हासिल करने के लिए उपयोगी साबित होता है. शल्यचिकित्सा की प्रक्रियाओं और प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल के दौरान संज्ञाहरण (प्रारंभिक इंजेक्शन के 10-20%, आईपी) की खुराक के रूप में की जरूरत है (, वापसी पैर के अंगूठे या पूंछ चुटकी के जवाब संकेत द्वारा हर 30-60 मिनट) के द्वारा बनाए रखा है. युक्ति: गिराए pentobarbital 10 मिलीग्राम / बाँझ खारा में मिलीलीटर पहले इंजेक्शन की अधिक मात्रा के संभावना कम कर देता है.
- संज्ञाहरण तापमान विनियमन समझौता इतना माउस पहले इंजेक्शन के बाद तुरंत गर्म रखा जाना चाहिए. एक धातु वाहक में एक गर्म थाली के शीर्ष पर माउस (हवादार एल्यूमीनियम टोकरी) रखकर (37 ~ लिए calibrated ° सी) अच्छी तरह से काम करता है. वैकल्पिक रूप से, एक गर्मी दीपक ध्यान लेने के लिए माउस से एक उचित दूरी पर स्थिति के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. माउस हर 5-10 मिनट के निगरानी की जानी चाहिए जब तक संज्ञाहरण के उचित स्तर (पैर की अंगुली या पूंछ चुटकी करने के लिए वापसी की कमी) हासिल की है. एक पूरक खुराक 15-20 मिनट के बाद आवश्यकता हो सकती है है. यह सबसे अच्छा है करने के लिए धैर्य और सावधानी के साथ आगे बढ़ना जरूरत से ज्यादा मोटे या वृद्ध जानवरों के साथ विशेष रूप से बचने के.
- कम पेट, पीठ के निचले हिस्से, अंडकोश की थैली और पैरों से बाल ध्यान से संबंधित क्षेत्रों शेविंग द्वारा हटा दिया जाता है. विशेष रूप से ध्यान के लिए अंडकोश की थैली और testes, जो अन्यथा cremaster मांसपेशियों घायल को आघात से बचने के लिया जाना चाहिए. एक ताजा शराब की झाड़ू के साथ खुले बाल निकालें.
- यदि मूत्राशय भरा हुआ है, यह पेट की दीवार के माध्यम से एक छोटे से अंगूर की तरह महसूस होगा. कोमल दबाव cremaster तैयारी पर प्रयोगों के दौरान पेशाब से माउस को रोकने का उपयोग कर मूत्राशय खाली. एक Kimwipe एक प्रभाव संग्रह करने के लिए स्पंजटी मूत्र.
- अपनी पीठ पर माउस स्थिति, अपने पैरों कुरसी straddling के साथ पच्चर पर झूठ बोल. एक रेशम (4-0 या 5-0) सिवनी प्रत्येक पैर से बंधा कुरसी के खिलाफ अपने crotch के साथ माउस को हासिल करने के लिए एक पगहा प्रदान करता है. टेप का एक टुकड़ा छाती भर शिथिल रखा और कील सुरक्षित समग्र शरीर की स्थिति बनाए रखता है. सर्जिकल प्रक्रियाओं जबकि stereomicroscope microdissection कैंची और angled संदंश का उपयोग कर के माध्यम से देखने के लिए प्रदर्शन कर रहे हैं.
3. खुला cremaster मांसपेशियों के सर्जिकल तैयारी
- एक पिन scrotal थैली के शीर्ष (या तो छोड़ दिया है या सही पक्ष) के माध्यम से रखा गया है और त्वचा पर तनाव जगह कुरसी में सुरक्षित है. PSS (34-35 डिग्री सेल्सियस) के साथ Superfusion शल्य चिकित्सा क्षेत्र पर शुरू की है और उजागर ऊतकों को गर्म और नम रखने के लिए विच्छेदन भर में बनाए रखा. (Kimwipe से बना) बाती एक scrotal थैली और अन्य एक निर्वात लाइन के बगल में अगले अंत के साथ तैनात प्रवाह PSS निकालता है. Plexiglas बोर्ड का पालन और पूरी तरह से कील encircling और कुरसी "खाई" के लिए किसी भी PSS से aspirated है कि नहीं जमा के रूप में कार्य करता है, एक प्रभावी एहतियात के रूप में सेवा करने के लिए माइक्रोस्कोप पर PSS के रिसाव को रोकने के सिलिकॉन सीलेंट के एक मनका.
- एक चीरा scrotal थैली के ventral सतह के साथ किया जाता है. यदि अंडकोष उदर गुहा में cremaster मांसपेशियों द्वारा मुकर गया, पेट के निचले हिस्से पर कोमल दबाव थैली में अंडकोष निर्देशन. अंडकोष overlying cremaster मांसपेशियों की सतह के इस समय में पहचान की जानी चाहिए. Scrotal त्वचा और cremaster मांसपेशियों के बीच संयोजी ऊतक ध्यान cremaster मांसपेशी ऊतक आसपास से मुक्त करने के लिए हटा दिया है.
- scrotal त्वचा धीरे कुरसी के प्रॉक्सिमल बढ़त के पीछे से मुकर गया है और प्रत्येक पक्ष पर एक पिन के साथ सुरक्षित है. cremaster मांसपेशी सतह की बाहरी सतह तो संयोजी ऊतक की मंजूरी दे दी है. विच्छेदन हाइड्रेट्स संयोजी ऊतक के दौरान सतत superfusion, दृश्यता और हटाने की सुविधा.
- Cremaster मांसपेशियों के शीर्ष के माध्यम से एक पिन के अनुदैर्ध्य तनाव के तहत जगह प्रयोग किया जाता है. एक अनुदैर्ध्य चीरा संवहनी आपूर्ति के व्यवधान को कम करने के लिए ले जाया महान देखभाल के साथ पेशी के उदर की सतह के माध्यम से किया जाता है. इस ऊतकों को नुकसान के 14 से तैयारी की परिधि के निकट रक्त प्रवाह की गतिशीलता बदल रहे हैं. इसलिए, कम से कम इन डेटा संग्रह, तैयारी के केन्द्र के निकट रक्त वाहिकाओं को प्रभावित करता है इमेजिंग और शारीरिक अध्ययन के लिए उपयोग किया जाता है.
- cremaster मांसपेशियों अंडकोष नीचे अधिवृषण के लिए एक पतली बंधन से जुड़ा हुआ है. एक तरफ अंडकोष दर्शाते इस बंधन है, जो ध्यान से अधिवृषण से अलग है उजागर. Cremaster मांसपेशियों के शीर्ष के पास छोटे धमनी और शिरा जो यह अधिवृषण से कनेक्ट है. संदंश के बीच इन जहाजों occluding और उन्हें अलग खींच खून बह रहा है कम से कम. अंडकोष, अधिवृषण, वृषण धमनी और शिरा proximally ligated (4-0 या 5-0 रेशम सिवनी), कटे और जुड़े वंक्षण वसा पैड के साथ खारिज कर दिया (orchiectomy). वैकल्पिक रूप से, अंडकोष धीरे उदर गुहा में किया जा सकता है वापस धक्का दिया और कपास या Kimwipe का एक टुकड़ा के साथ बनाए रखा. orchiectomy जब testes उदर गुहा में वापस धक्का ऊतक करने के लिए संभव आघात से बचने के कार्य करता है. हम cremaster microcirculation तैयारी की गुणवत्ता में उल्लेखनीय मतभेद (खंड 3.8 देखें) या तो 7,15 प्रक्रिया का उपयोग कर नहीं मिला है.
- cremaster मांसपेशियों की बाहरी सतह शेष संयोजी ऊतक की मंजूरी दे दी है और फिर त्रिज्यात कुरसी की सतह पर फैल गया. किनारों पिंस (1.4 खंड देखें) के साथ 5-6 स्थानों में सुरक्षित कर रहे हैं बरकरार microcirculation के साथ धारीदार मांसपेशियों के एक फ्लैट शीट बनाने.
- पूरा तैयारी एक intravital खुर्दबीन के मंच पर स्थानांतरित कर रहा है, लगातार superfused (3-5 मिलीग्राम / मिनट, 34 ° C) और 30 मिनट के लिए equilibrated.
- Cremaster तैयारी की वफ़ादारी कई मानदंडों के अनुसार मूल्यांकन किया है. न्यूनतम शल्य आघात के साथ उठना, vasomotor स्वर arterioles और venules में पक्षपाती leukocytes के अभाव में तेज प्रवाह ने संकेत दिया है. एक उत्तरदायी तैयारी के सबसे संवेदनशील सूचकांक 5-10 मिनट के लिए superfusion समाधान ऑक्सीजन सामग्री जुटाने arterioles के कसना है. यह यह 21% 2 हे के साथ equilibrating द्वारा किया जाता है (बनाम 5% 2 हे, 1.5 खंड देखें, सभी 5% 2 सीओ, संतुलन एन 2 के साथ) . arterioles में leukocytes की उपस्थिति, लाल रक्त कोशिकाओं capillaries के माध्यम से बह की अनुपस्थिति, और / या venules में जमा और आसपास के ऊतकों leukocytes ऊतक नुकसान और सूजन के लक्षण हैं.
4. Cremaster मांसपेशियों microcirculation के intravital इमेजिंग
- Intravital इमेजिंग एक कस्टम एक ओलिंप MVX10 स्टीरियो ज़ूम मंच पर आधारित खुर्दबीन पर किया जाता है. MVX10 खुर्दबीन शरीरएक MVX10 संकर खड़े brightfield इमेजिंग (कोहलर) के लिए transillumination (हलोजन दीपक) के साथ और महामारी प्रतिदीप्ति इमेजिंग के लिए रोशनी (पारा दीपक) के साथ सुसज्जित करने के लिए मुहिम शुरू की. महामारी रोशनी का प्रयोग, GCaMP2 472/30 एनएम 520/35 एनएम एकत्र उत्सर्जन के साथ उत्साहित है. मुरलीवाला नियंत्रण सॉफ्टवेयर (SPI) के माध्यम से एक व्यक्तिगत कंप्यूटर पर, एक XR/Mega-10 तेज डिजिटल कैमरा (SPI स्टैनफोर्ड फोटोनिक्स, Inc) का उपयोग कर, छवियाँ एमवी PLAPO 2XC (संख्यात्मक एपर्चर ओलिंप 0.50 =) लेंस के माध्यम से अर्जित कर रहे हैं. इस प्रणाली के साथ, दृश्य (FOV) मनाया क्षेत्र 553 सुक्ष्ममापी से 22 एक्स 18 मिमी एक्स 442 सुक्ष्ममापी अलग किया जा सकता है.
- Intravital इमेजिंग प्रयोगों के पूरा होने पर, anesthetized माउस ग्रीवा अव्यवस्था के बाद pentobarbital की अधिक मात्रा के साथ euthanized है.
5. प्रतिनिधि परिणाम
चित्रा 1. माउस cremaster तैयारी के intravital इमेजिंग के लिए माउस बोर्ड. ए) एल्यूमीनियम मंच के साथ शारीरिक पच्चर (पीले प्लास्टिक से अछूता) के नीचे से देखा जा सकता है. मंच के नीचे से सुरक्षित ताप प्रतिरोधों आयोजित गर्मी प्रदान करते हैं. बी) हीटिंग मंच एक प्लास्टिक की कील पर टिकी हुई है. सी) शरीर पच्चर एक Plexiglas बोर्ड पर सर्जरी और intravital खुर्दबीन के चरण के बाद हस्तांतरण रखा गया है. Sylgard कुरसी लाल तीर के साथ संकेत दिया है. निविड़ अंधकार सिलिकॉन का एक मनका संपूर्ण तैयारी के लिए कोई समाधान है कि intravital प्रक्रिया के दौरान रिसाव, यह माइक्रोस्कोप पर टपकता से रोकने हो सकता है होते हैं चारों ओर.
चित्रा widefield इमेजिंग के लिए 2. कस्टम MacroZoom खुर्दबीन . ए) MVX10 XR/Mega-10 ICCD कैमरा के साथ माइक्रोस्कोप (ओलिंप) शरीर (स्टैनफोर्ड फोटोनिक्स) trinocular बंदरगाह पर घुड़सवार. बी) खुर्दबीन शरीर के क्लोज़ - अप दृश्य. (क) ज़ूम (0.63 6.3X) नियंत्रण, (ख) फिल्टर पहिया, (ग) छवि doubler (एनए = 25x ऑप्टिकल बढ़ाई साथ 0.50). सी) brightfield (कोहलर) रोशनी (संघनित्र एनए = 0.55, कार्य = दूरी 27 मिमी) के लिए Substage संघनित्र.
चित्रा 3. माउस cremaster तैयारी पूर्ण. गर्म प्लास्टिक लेपित एल्यूमीनियम मंच (पीला) पर लापरवाह स्थिति में anesthetized माउस. शारीरिक स्थिति टेप के साथ सुरक्षित है. cremaster मांसपेशियों त्रिज्यात पारदर्शी silastic रबर कुरसी पर फैला हुआ है और किनारों पर टिकी है. Superfusion समाधान प्रॉक्सिमल अंत में एक प्लास्टिक dripper (सफेद तीर) के माध्यम से पेश किया है. एक निर्वात लाइन (सफेद arrowhead) Kimwipe बाती के माध्यम से हल निकालता है. दो micropipettes दिखाया ऊतक में अपने सुझावों के साथ तैनात कर रहे हैं. एक संदर्भ इलेक्ट्रोड (चांदी के तार) cremaster की मांसपेशी के निचले किनारे पर सुरक्षित है.
चित्रा 4 arteriolar endothelium में GCaMP2 व्यक्त नेटवर्क दृश्यमान करने के लिए बढ़ाई रेंज illustrating. ए) प्रतिदीप्त और बी) brightfield छवि वीडियो मॉनीटर पर कुल 42X = बढ़ाई के लिए 3.2X की एक ऑप्टिकल बढ़ाई लिया. [देखने के फील्ड (FOV) = 4375 x ३,४७० सुक्ष्ममापी]. स्केल बार = 500 सुक्ष्ममापी. इस बढ़ाई कार्य वांछित स्थानों पर micropipettes के स्थान की सुविधा. सी) प्रतिदीप्त और डी) brightfield 6.4X की कुल आवर्धन के लिए ऑप्टिकल बढ़ाई लिया छवि = 83X (FOV = 2200 x 1759 सुक्ष्ममापी). स्केल बार = 200 सुक्ष्ममापी. ई) प्रतिदीप्त और एफ) छवि brightfield 12.6X की कुल आवर्धन के लिए ऑप्टिकल बढ़ाई लिया = 165X (FOV = 1100 x 885 सुक्ष्ममापी). स्केल बार = 100 सुक्ष्ममापी. छवि doubler के साथ जी), ऑप्टिकल 25.2X = बढ़ाई. स्केल बार = 50 सुक्ष्ममापी.
Discussion
यहाँ हम vivo में microcirculation के अवलोकन के लिए माउस में खुला cremaster मांसपेशियों तैयारी का वर्णन . यह प्रक्रिया "खुला" cremaster पहले 4 चूहे में वर्णित तैयारी के बाद modeled है . अभ्यास के साथ पूरे शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया कम से कम 1 घंटे में पूरा किया जा सकता है. इस तैयारी के बहुमुखी प्रतिभा प्रयोगात्मक अभिव्यक्ती की एक किस्म के लिए अनुमति देता है और आसानी से hamsters के रूप में अच्छी तरह के रूप में चूहों के लिए अनुकूलित, प्रयोगात्मक मॉडल की एक किस्म के लिए इसी तरह फैशन में अध्ययन किया जा सक्षम है. तैयारी पुरुष जानवरों के लिए सीमित है और माप ऊतक के केंद्र की ओर किया जाना चाहिए, 14 की मांसपेशी के किनारों के पास क्षतिग्रस्त क्षेत्रों से परहेज है. यह भी मान्यता है कि, जबकि दबाव और प्रवाह वितरण बदल रहे हैं जब cremaster मांसपेशियों की परस्पर वाहिकाओं 16 काट रहे हैं, microvessels संवेदनशील और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य डेटा के संग्रह के लिए उपयुक्त रहते हैं होना चाहिए. cremaster मांसपेशियों में microcirculation visualizing प्राथमिक सीमा चूहों में विशेष रूप से, लेकिन यह भी hamsters में परिपक्व जानवरों और आकार में वृद्धि के रूप में संयोजी ऊतक के buildup है. इसके अलावा, के रूप में पशुओं वसा मिल, इसे और अधिक मुश्किल हो जाता है संज्ञाहरण नियंत्रण क्योंकि pentobarbital lipophilic है और वसा ऊतकों में अवशोषित किया जा सकता है. सबसे अच्छा तरीका है आगे बढ़ने रोगी जा रहा है जबकि यह सुनिश्चित करना कि जानवर ° शरीर का तापमान 37 ~ पर बनाए रखा है डिग्री सेल्सियस जबकि उजागर ऊतक लगातार PSS के साथ सिंचित है.
Disclosures
सभी प्रक्रियाओं और जानवरों को शामिल प्रोटोकॉल पशु देखभाल और मिसौरी विश्वविद्यालय का प्रयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया और प्रयोगशाला पशु की देखभाल और उपयोग के लिए संस्थान राष्ट्रीय स्वास्थ्य गाइड के साथ समझौते में प्रदर्शन किया .
इस वीडियो लेख का उत्पादन स्टैनफोर्ड फोटोनिक्स द्वारा प्रायोजित किया गया है.
Acknowledgments
'लेखक की प्रयोगशाला में अनुसंधान स्वास्थ्य R37-HL041026 अनुदान, R01-HL086483 और R01-HL056786 (एसएसएस) और F32 HL097463 और T32 AR048523 संयुक्त राज्य अमेरिका के सार्वजनिक स्वास्थ्य सेवा से (पंजाब) के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा समर्थित है.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sodium Chloride | Fisher Scientific | S642-212 | |
| Potassium Chloride | Sigma-Aldrich | P9541 | |
| Magnesium Sulfate | Sigma-Aldrich | M2643 | |
| Calcium Chloride | Sigma-Aldrich | C1016 | |
| Sodium Bicarbonate | Fisher Scientific | S233 | |
| Nembutal Sodium Solution | Lundbeck Inc | NDC 67386-501-55 | Also referred to as sodium pentobarbital |
| Temperature Controller | Warner Instruments | TC-344B | Alternate: adjustable 12V DC power supply |
| Series 20 platform heater kit RH-2 | Warner Instruments | 64-0274 | Requires custom-built aluminum plate |
| Mega-10 Camera | Stanford Photonics Inc | XR/Mega-10 | |
| MVX10 | Olympus Corporation | ||
| MV PLAPO 2XC lens | Olympus Corporation | ||
| MVX10 hybrid stand | Leeds | LBX-Hybrid | |
| Piper Control Software | Stanford Photonics Inc | Program for Mega-10 camera | |
| Stereo Microscope | Nikon Instruments | SMZ645 | |
| Waterproof Silicone Sealant (Clear) | GE Healthcare | 47970-72643-LW5000 | Other clear silicone sealants also work |
| 60 x 15mm Petri Dish | Fisher Scientific | 08-757-13A | |
| Sylgard | Dow Corning | 184 | |
| Microdissection Scissors | Fine Science Tools | 15003-08 | |
| Dumont Forceps | Fine Science Tools | #5/45 | |
| GP Millipore Express PLUS Membrane | EMD Millipore | SCGPT05RE | |
| Minutiens Insect Pins | Austerlitz | M size 0.15 mm | |
| Compact Pet Trimmer | Wahl Clipper Corp. | Model 9966 | Clean after each use |
References
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