Высокой пропускной способностью, автоматизированная платформа изготовления развития клеточной линии для производства белка терапии описано. Реализация BD FACS Сортировщик сотовый Ария, CloneSelect Imager и Tecan Свобода EVO жидкостной системой обработки продемонстрировал значительно увеличили производительность обработки в ячейке развития соответствии с улучшенным качеством клеточной линии и высокую воспроизводимость.
Быстрорастущих биофармацевтической промышленности требует ускоренного развития высокоэффективных и надежных систем производства для удовлетворения растущих требований к поставках лекарств. Поколение производственных линий ячейка традиционно участвуют ручных операций, которые являются трудоемкими, низкая пропускная способность и уязвимы для человеческой ошибки. Мы сообщаем здесь интегрированной высокой пропускной способностью и автоматизированной платформы для развития производства клеточных линий для производства белка терапии.
Сочетание BD FACS Aria ™ сотовый Сортировщик, CloneSelect ™ Imager и Tecan Свобода EVO ® жидкостной системой обработки позволило высокой пропускной способностью и более эффективной клеточной линии процесса развития. В этой операции, клетки рабочих узлов, прежде трансфицированных выражением вектора, несущего ген интересов 1, после чего лечение выбора агента. Стабильно-трансфекции клетки затем окрашивали флюоресценции меченных анти-человеческого антитела IgG, и впоследствии подлежат проточной цитометрии анализа 2-4. Высокопродуктивные клетки выбирается в зависимости от интенсивности флуоресценции и изолированы от одноклеточных сортировка по BD FACSAria ™. Колония образования из одного-клеточной стадии был обнаружен микроскопически и ряд временных кругов цифровых изображений принимаются CloneSelect ™ Imager для документации клеточной линии истории. После одного клона образовались эти клоны были обследованы на производительность с помощью ИФА осуществляется на Tecan Свобода EVO ® жидкостной системой управления. Примерно 2000 – 10000 клонов может быть обследованы на операцию цикла с текущей настройки системы.
Такой комплексный подход был использован для создания высокопродуктивных яичника китайского хомячка (СНО) клеточных линий для производства лечебных моноклональных антител (МКА), а также их белков слияния. С помощью различных типов обнаружения зондов, метод может быть использован для разработки других терапии белка или быть применены в других хост-систем производства. По сравнению с традиционной процедуры по эксплуатации, это автоматизированная платформа продемонстрировала преимущества значительно увеличила потенциал, обеспечить клональности, прослеживаемости в клеточной линии истории с электронной документацией и многое уменьшается возможность в ошибки оператора.
Мы представили автоматизированное производство клеточной линии платформу разработки, которая позволяет изоляции высокопродуктивных клонов, а в среднем в то время как обеспечивает клональности и клонировать стабильности. Взаимодействие поверхностных меченых антител следует FACSAria сортировки ячейки ™ является ключом к получению одного клонов с высокой производительностью антител. Наши результаты и другие отчеты 2-4 показывают, что уровень антител временно отображаются на клеточной поверхности, хорошо коррелирует с производительностью клетки. Таким образом, флуоресцеин конъюгированных антител может быть использован для признать мембраны связанных продуктов и помощи изоляции высоким производителей. Кроме того, коэкспрессия репортер генов и технологии гель микрокапельной были использованы для облегчения выбора высокопродуктивных клонов FACS 6-8. В дополнение к изоляции высокопродуктивных клонов через FACS, другие технологии развились до достижения той же цели. К ним относятся решетчатым Bioscience технологии CellSpot который использует microspere антител системы обнаружения и лазерных технологий скрининга для выявления высокопроизводительные клоны и устранения нежелательных клеток, Genetix ClonePix FL и StemCell Технологии ClonaCell EasyPick платформы, которые выполняют высокопроизводительного скрининга производства клеточных линий использованием флуоресцентных системы обнаружения антител . Мы выбрали для реализации FACS метод клонирования основаны на поверхности соответствующего уровня антител, поскольку она сочетает в себе простоту в эксплуатации, избирательность на производительность и клональности.
Занятости Tecan Свобода EVO ® жидкостной системой обработки значительно увеличили скрининга, которые дают возможность выбрать для высокого выхода из клонов намного больше клетка бассейн. Другие приборы для анализа, таких как HTRF, Bioforte Октет, ВЭЖХ, и т.д., все возможные средства выбора высокой производителей и отсеивание низкой производителей. Отслеживая клон образование с CloneSelect Imager ™, мы получили необходимую документацию, чтобы доказать клональности с оцифрованными истории клеточной линии. Клональности подтверждается еще и генетически характеризуют одного сайта интеграции трансгена на хромосоме. Субклонирования шаг, который, как правило, принимаются для обеспечения клональности, таким образом, может быть устранена. Это позволит сэкономить 4-8 недель времени для развития клеток линии. В целом, качество клеточных линий порожденные высокой пропускной автоматизированная платформа показали высокую производительность, стабильность производства и документально истории клеточной линии, которая должна удовлетворить спрос на крупном производстве и действующих нормативных требований.
The authors have nothing to disclose.
Name | Company |
BD FACS Aria™ Cell Sorter | BD Bioscience |
CloneSelect™ Imager | Genetix |
TECAN Freedom EVO® liquid handling system | Tecan Group |