Un alto rendimiento, la plataforma automatizada de desarrollo de la fabricación línea celular para la producción de proteínas terapéuticas se describe. Implementación de BD clasificador de células FACS Aria, CloneSelect Imager y Libertad TECAN EVO sistema de manejo de líquidos se ha demostrado la capacidad de procesamiento aumentó significativamente en el desarrollo de líneas celulares con mejor calidad de línea celular y una alta reproducibilidad.
La industria biofarmacéutica de rápido crecimiento exige un rápido desarrollo de los sistemas de producción altamente eficiente y confiable para satisfacer la creciente necesidad de suministros de medicamentos. La generación de líneas celulares de producción tradicionalmente ha involucrado el manual de operaciones que requieren mucha mano de obra, de bajo rendimiento y vulnerable a errores humanos. Presentamos aquí una plataforma integrada de alto rendimiento y automatizado para el desarrollo de líneas celulares de fabricación para la producción de proteínas terapéuticas.
La combinación de BD FACS Aria ™ clasificador de células, CloneSelect ™ Imager y TECAN Freedom EVO ® sistema de manejo de líquidos se ha habilitado una línea de alto rendimiento y más eficiente proceso de desarrollo celular. En esta operación, las células la producción de acogida son los primeros transfectadas con un vector de expresión que lleva el gen de interés 1, seguido por el tratamiento con un agente de selección. Las células establemente transfectadas se tiñen con fluorescencia marcado anti-IgG humana, y, posteriormente, sometido a un análisis de citometría de flujo 2.4. Células altamente productivo son seleccionados en base a la intensidad de fluorescencia y se encuentran aisladas por una sola célula de clasificación en una BD ™ FACSAria. La formación de colonias de una sola célula etapa se detectó al microscopio y una serie de vueltas del tiempo las imágenes digitales son tomadas por CloneSelect ™ Imager para la documentación de la historia de la línea celular. Después de clones individuales se han formado, estos clones fueron seleccionados para la productividad por medio de ELISA realizada en un EVO TECAN Freedom ® sistema de manejo de líquidos. Aproximadamente 2.000 – 10.000 clones pueden ser examinados por cada ciclo de funcionamiento con la configuración actual del sistema.
Este enfoque integrado ha sido utilizado para generar alta producción de ovario de hámster chino (CHO) líneas celulares para la producción de anticuerpos terapéuticos monoclonales (mAb), así como sus proteínas de fusión. Con la ayuda de diferentes tipos de sondas de detección, el método puede ser utilizado para el desarrollo de otros productos terapéuticos de proteínas o ser aplicados a otros sistemas de producción de acogida. En comparación con el procedimiento manual tradicional, esta plataforma automatizada han demostrado las ventajas de la capacidad aumentó significativamente, clonalidad asegurado, la trazabilidad en la historia de la línea celular con la documentación electrónica y la oportunidad mucho más reducida en los errores del operador.
Hemos presentado una célula de fabricación automatizados línea plataforma de desarrollo que permite el aislamiento de clones de alta productividad, y en la media, mientras que asegura la estabilidad y la clonalidad clon. El compromiso de la tinción de la superficie del anticuerpo seguida de una selección de células FACSAria ™ es la clave para la obtención de clones individuales de productividad altos de anticuerpos. Nuestros resultados y otros informes 4.2 sugieren que el nivel de anticuerpos de forma transitoria que aparece en la superficie celular una buena correlación con la productividad de la célula. Por lo tanto, un anticuerpo conjugado con fluoresceína se puede utilizar para reconocer el producto asociado a la membrana y ayuda al aislamiento de los productores de alta. Por otra parte, co-expresión de genes reporteros y la tecnología de microgotas de gel se han utilizado para facilitar la selección de clones de alta producción por FACS 6-8. Además de aislar clones de alta producción a través de la FACS, otras tecnologías se han desarrollado para lograr el mismo objetivo. Estos incluyen la tecnología de enrejado CellSpot Bioscience que utiliza microspere sistemas de detección de anticuerpos y la tecnología de detección láser para identificar los clones de alta productividad y eliminar las células no deseadas, Genetix ClonePix FL y StemCell tecnologías de plataforma ClonaCell EasyPick que realizan cribado de alto rendimiento de las líneas celulares de producción mediante un sistema de detección de anticuerpos fluorescentes . Optamos por implementar el método de clonación FACS basado en el nivel de anticuerpos de superficie asociados, ya que combina la facilidad de operación, la selectividad en la productividad y clonalidad.
El empleo de sistema de TECAN Freedom EVO ® de manejo de líquido aumentó significativamente el rendimiento de detección, que proporcionan la oportunidad de seleccionar clones de alto rendimiento de un grupo de células mucho más grandes. Otros instrumentos para el ensayo como HTRF, Bioforte Octeto, HPLC, etc, son todos los medios posibles de la selección de los productores de alta y descartar a los productores de baja. Mediante el seguimiento de la formación de clonar con CloneSelect Imager ™, que genera la documentación necesaria para probar la clonalidad de historia digitalizada línea celular. Clonalidad se ve confirmado por caracterizar genéticamente solo sitio la integración del transgen en el cromosoma. Un paso subclonación, que suele ser adoptadas para garantizar la clonalidad, por lo tanto puede ser eliminado. Esto le ahorrará de 4-8 semanas de tiempo para el desarrollo de líneas celulares. En resumen, las líneas celulares de calidad generados por la plataforma automatizada de alto rendimiento mostraron una alta productividad, la estabilidad de la producción y la historia documentada de la línea celular que debe satisfacer la demanda de producción a gran escala y los requisitos normativos vigentes.
The authors have nothing to disclose.
Name | Company |
BD FACS Aria™ Cell Sorter | BD Bioscience |
CloneSelect™ Imager | Genetix |
TECAN Freedom EVO® liquid handling system | Tecan Group |