Protein terapötikler üretmek için hücre hattı geliştirme, üretim, yüksek verimlilik, otomatik bir platform açıklanmıştır. Uygulama, BD FACS Aria Hücre Sıralayıcısı CloneSelect Imager ve Tecan Özgürlük EVO sıvı taşıma sistemi, gelişmiş hücre hattı kalite ve yüksek tekrarlanabilirlik hücre hattı geliştirme işleme kapasitesi önemli ölçüde artış göstermiştir.
Hızlı büyüyen biyofarmasötik endüstrisi, ilaç temini için artan ihtiyacı karşılamak için, yüksek verimli ve güvenilir üretim sistemlerinin hızlı gelişmesi talep eder. Nesil üretim hücre hatları geleneksel emek-yoğun, düşük verimlilik ve insan hataları açık manuel işlemleri yer vardır. Biz burada, protein terapötikler üretimi için üretim hücre hatlarının geliştirilmesi için entegre bir yüksek verimlilik ve otomatik bir platform raporu.
BD FACS Aria kombinasyonu ™ Hücre Sıralayıcısı CloneSelect ™ Imager ve Tecan Özgürlük EVO ® sıvı taşıma sistemi, yüksek verimlilik ve daha verimli bir hücre hattı geliştirme süreci sağladı. Bu operasyonda, üretim konak hücreleri ilk kez bir seçim aracı ile tedavi takip ilgi 1 gen taşıyan bir ifade vektör ile transfekte. Stably transfekte hücreler daha sonra floresan-etiketli anti-insan IgG ile boyanmış, ve flow sitometri analizi 2-4 sonradan tabidir. Son derece üretken hücrelerin floresan yoğunluğuna göre seçilir ve tek hücreli bir BD FACSAria ™ sıralayarak izole edilir. Tek hücre aşamasından Colony oluşumu mikroskopik olarak tespit edildi ve bir dizi zaman-tur dijital görüntüler, hücre hattı tarihinin belgelere CloneSelect ™ Imager ile alınır. Tek klonlar oluşturduktan sonra, bu klonları bir Tecan Özgürlük EVO yapılan ELISA ile verimlilik ® sıvı taşıma sistemi için tarandı. Yaklaşık 2,000 – 10,000 klonlar, mevcut sistem kurulumu ile çalışma döngüsü başına gösterildi.
Bu entegre yaklaşım, terapötik monoklonal antikor (mAb) yanı sıra füzyon proteini üretimi için yüksek üreten Çin hamsteri over (CHO) hücre hatları oluşturmak için kullanılır olmuştur. Tespit probları farklı türde yardımı ile diğer protein terapötikler geliştirilmesi için, yöntem ya da diğer üretim ana bilgisayar sistemleri uygulanabilir. Geleneksel el yordamı ile karşılaştırıldığında, bu otomatik bir platform önemli ölçüde kapasite artışı sağlanmıştır klonalite, elektronik dokümantasyon ile hücre hattı geçmişi izlenebilirlik ve operatör hatası çok azalır fırsat avantajları gösterdi.
Klonalite ve klon istikrarı sağlarken, son derece verimli klonlar izolasyonu sağlar ve ortalama bir otomatik üretim hücre hattı geliştirme platformu sundu. FACSAria ™ hücre sıralama takip yüzey antikoru boyanma nişan yüksek antikor verimlilik ile tek klonlar elde etmek için bir anahtardır. Sonuçları ve diğer raporlar 2-4 hücre yüzeyinde geçici olarak görüntülenen antikor düzeyi hücre verimlilik ile ilişkili olduğunu düşündürmektedir. Böylece, floresein-konjuge antikor biyolojik membran ilişkili ürünü tanıması ve yüksek üreticilerin izolasyon yardım etmek için kullanılabilir. Alternatif olarak, FACS 6-8 muhabiri genler ve jel microdrop teknoloji Koekspresyon yüksek üreten klonların seçimi kolaylaştırmak için kullanılır olmuştur. FACS üzerinden yüksek üreten klonlar izole yanı sıra, diğer teknolojiler, aynı hedefe ulaşmak için evrildi. Bunlar, son derece verimli klonları tanımlamak ve, yüksek kapasiteli bir floresan antikor algılama sistemi kullanarak üretim hücre hatları tarama gerçekleştirmek Genetix ClonePix FL Teknolojileri ve StemCell ClonaCell EasyPick platformu istenmeyen hücrelerin ortadan kaldırmak için microspere antikor algılama sistemleri ve lazer tarama teknolojisi kullanır Kafes Bioscience CellSpot teknoloji . Biz, kullanım kolaylığı, verimliliği ve klonalite seçicilik birleştirir çünkü yüzey ilişkili antikor düzeyi dayalı FACS klonlama yöntemi uygulamak için seçti.
Istihdam Tecan Özgürlük EVO ® sıvı taşıma sistemi, yüksek verim klonlar için çok daha büyük bir hücre havuzu seçmek için fırsat sağlayan tarama hacmi, önemli ölçüde arttı. HTRF, BioForte Sekizli, HPLC, vb gibi tahlil için enstrümantasyon, yüksek üreticilerin seçilmesi ve düşük üreticileri tarama mümkün olan tüm yollarla. CloneSelect Imager ™ ile klon oluşumu takip ederek, sayısallaştırılmış hücre hattı geçmişi ile klonalite kanıtlamak için gerekli belgeleri oluşturulur. Klonalite genetik kromozom üzerinde tek transgen entegrasyon sitesi karakterize daha teyit edilir. Genellikle klonalite sağlamak için alınan bir subcloning adım, elenecektir. Bu hücre hattı gelişmesi için 4-8 hafta zaman kazandıracak. Özetle, yüksek verimli otomatik platform tarafından oluşturulan kalite hücre hatları, yüksek verimlilik, üretim istikrar ve büyük ölçekli üretim ve akım düzenleyici gereksinimleri için talebi karşılamak gerekir belgelenen hücre hattı geçmişi gösterdi.
The authors have nothing to disclose.
Name | Company |
BD FACS Aria™ Cell Sorter | BD Bioscience |
CloneSelect™ Imager | Genetix |
TECAN Freedom EVO® liquid handling system | Tecan Group |