Un elevato throughput, piattaforma automatizzata di sviluppo delle cellule linea di produzione per la produzione di proteine terapeutiche è descritto. Implementazione di Cell BD FACS sorter Aria, CloneSelect Imager e TECAN Libertà sistema di movimentazione EVO liquido ha dimostrato capacità di elaborazione significativamente aumentata in linea con lo sviluppo delle cellule migliore qualità linea cellulare e alta riproducibilità.
La rapida crescita dell'industria biofarmaceutica esigenze rapido sviluppo di sistemi di produzione altamente efficiente e affidabile per soddisfare i requisiti crescenti per le forniture di droga. La generazione di linee cellulari di produzione ha sempre coinvolto le operazioni manuali che sono alta intensità di manodopera, bassa produttività e vulnerabili a errori umani. Riportiamo qui una piattaforma integrata high-throughput e automatizzato per lo sviluppo di linee di produzione di celle per la produzione di proteine terapeutiche.
La combinazione di BD FACS Aria ™ cell sorter, CloneSelect ™ Imager e TECAN Freedom EVO ® sistema di gestione dei liquidi ha permesso un alto throughput e più efficiente linea processo di sviluppo delle cellule. In questa operazione, cellule ospiti produzione sono prima transfettate con un vettore di espressione che trasportano il gene di interesse 1, seguito dal trattamento con un agente di selezione. Il stabilmente transfettate cellule vengono poi colorate con fluorescenza anticorpi anti-IgG umane, e successivamente sottoposti ad analisi in citometria a flusso 2-4. Cellule altamente produttive sono selezionati sulla base di intensità di fluorescenza e sono isolate da singole cellule ordinamento su un FACSAria BD ™. Formazione di colonie da singole cellule stadio è stato rilevato al microscopio e una serie di giri nel tempo le immagini digitali vengono prese CloneSelect ™ Imager per la documentazione della storia della linea cellulare. Dopo singoli cloni si sono formati, questi cloni sono stati sottoposti a screening per la produttività mediante test ELISA eseguito su un TECAN Freedom EVO ® sistema di gestione dei liquidi. Circa 2.000 – 10.000 cloni possono essere sottoposti a screening per ciclo di funzionamento con la configurazione del sistema attuale.
Questo approccio integrato è stato usato per generare alta produzione ovarica di criceto cinese (CHO) linee cellulari per la produzione di anticorpi terapeutici monoclonali (mAb) così come le loro proteine di fusione. Con l'aiuto di diversi tipi di sonde di rilevazione, il metodo può essere utilizzato per lo sviluppo di terapie proteiche o essere applicata ad altri sistemi host di produzione. Confrontando la procedura manuale tradizionale, questa piattaforma automatizzata dimostrato vantaggi di significativo aumento di capacità, garantita clonalità, la tracciabilità nella storia linea cellulare con documentazione elettronica e di opportunità molto ridotta per errore dell'operatore.
Abbiamo presentato un sistema automatizzato cella di produzione piattaforma di linea di sviluppo che consente l'isolamento di cloni altamente produttivi, e nel mezzo, mentre assicura clonalità e stabilità clone. L'impegno della colorazione superficiale anticorpi seguita da ordinamento FACSAria cellula ™ è la chiave per ottenere cloni singola con anticorpi ad alta produttività. I nostri risultati e le relazioni di altri 2-4 suggeriscono che il livello di anticorpi transitoriamente visualizzata sulla superficie cellulare una buona correlazione con la produttività della cellula. Così, un fluoresceina coniugato anticorpo può essere utilizzato per riconoscere il prodotto membrana associati e aiuti l'isolamento dei produttori alto. In alternativa, coespressione di geni reporter e MicroDrop tecnologia gel sono stati utilizzati per facilitare la selezione di alta produzione di cloni di FACS 6-8. Oltre ad isolare cloni alta produzione tramite FACS, altre tecnologie si sono evolute per raggiungere lo stesso obiettivo. Queste includono la tecnologia CellSpot Bioscience a traliccio che utilizza microspere sistemi di rilevamento degli anticorpi e lo screening della tecnologia laser per identificare cloni altamente produttivo ed eliminare le cellule indesiderate, Genetix ClonePix FL e StemCell Tecnologie ClonaCell piattaforma EasyPick che eseguono lo screening ad alta velocità di linee cellulari di produzione mediante un sistema di rilevamento degli anticorpi fluorescenti . Abbiamo scelto di implementare il metodo FACS clonazione in base al livello di anticorpi superficiali associate perché combina la facilità di funzionamento, la selettività sulla produttività e sulla clonalità.
L'impiego del sistema di gestione TECAN Freedom EVO ® liquido aumentato significativamente il throughput screening, che offrono la possibilità di selezionare per i cloni ad alto rendimento da un pool di cellule molto più grande. Altra strumentazione per test, come HTRF, Bioforte Ottetto, HPLC, ecc, sono tutti i mezzi possibili di selezione dei produttori di alta e bassa screening dei produttori. Tenendo traccia formazione clone con CloneSelect Imager ™, abbiamo generato la documentazione necessaria per dimostrare clonalità con la storia digitalizzati linea cellulare. Clonalità è ulteriormente confermata da caratterizzare geneticamente singolo sito di integrazione del transgene nel cromosoma. Un passo subcloning, che di solito adottati per garantire clonalità, possono quindi essere eliminati. Questo farà risparmiare 4-8 settimane di tempo per lo sviluppo di linee cellulari. In sintesi, le linee cellulari di qualità generato dalla high-throughput piattaforma automatizzata ha dimostrato l'alta produttività, stabilità di produzione e documentata storia linea cellulare che dovrebbe soddisfare la domanda per la produzione su larga scala e attuali requisiti normativi.
The authors have nothing to disclose.
Name | Company |
BD FACS Aria™ Cell Sorter | BD Bioscience |
CloneSelect™ Imager | Genetix |
TECAN Freedom EVO® liquid handling system | Tecan Group |