En hög genomströmning, automatiserad plattform för tillverkning cellinje utveckling för produktion av proteinläkemedel beskrivs. Genomförande av BD FACS Aria Cell Sorter har CloneSelect Imager och TECAN Freedom EVO vätskehantering systemet visade signifikant ökad förädling kapaciteten i cellinje utveckling med ökad cellinje kvalitet och hög reproducerbarhet.
Den snabbt växande biotech-industrin kräver snabb utveckling av högeffektiva och tillförlitliga produktionssystem för att möta de ökande kraven på läkemedel leveranser. Den generation av produktionslinjer cell består traditionellt framför manuella operationer som är arbetsintensiva, låg genomströmning och sårbara för mänskliga fel. Vi redovisar här en integrerad hög genomströmning och automatiserade plattform för utveckling av linjer tillverka celler för tillverkning av proteinläkemedel.
Kombinationen av BD FACS Aria ™ Cell sorterare, CloneSelect ™ Imager och TECAN Freedom EVO ® vätskehantering systemet har möjliggjort en hög genomströmning och mer effektiva celler processlinje utveckling. I denna drift, produktion värdceller first transfekterade med ett uttryck vektor bär genen av intresse 1, följt av behandling med ett urval agent. Den stabilt-transfekterade cellerna färgas sedan med fluorescens-märkta anti-human IgG-antikroppar, och därefter föremål för flödescytometri analys 2-4. Högproduktiva celler är markerade baseras på fluorescens intensitet och är isolerade av encelliga sortering på en BD FACSAria ™. Koloni formation från encelliga stadiet upptäcktes mikroskopiskt och en rad tid-varv digitala bilder är tagna av CloneSelect ™ Imager för dokumentation av cellinje historia. Efter enstaka kloner har bildat var dessa kloner screenas för produktivitet genom ELISA utförs på ett TECAN Freedom EVO ® vätskehantering systemet. Cirka 2000 – 10.000 kloner kan visas per transaktion cykel med det nuvarande systemet installationen.
Detta integrerade tillvägagångssätt har använts för att generera hög produktion av kinesisk hamster (CHO) cellinjer för produktion av terapeutisk monoklonal antikropp (mAb) samt deras proteiner fusion. Med hjälp av olika typer av upptäcka sonder kan metoden användas för att utveckla andra proteinläkemedel eller kunna tillämpas på andra produktionssystem värd. Jämfört med det traditionella manuell procedur visade Denna automatiserade plattform fördelarna med väsentligt ökad kapacitet, garanteras clonality, spårbarhet i cellinje historia med elektronisk dokumentation och mycket reducerad möjlighet i operatörens fel.
Vi presenterade en automatiserad tillverkning cell plattform linje utveckling som möjliggör isolering av högproduktiva kloner, och emellertid samtidigt säkerställer clonality och klona stabilitet. Engagemanget hos ytan antikroppar färgning följt av FACSAria ™ cellsortering är nyckeln till att få enstaka kloner med hög antikropp produktivitet. Våra resultat och andra rapporter 2-4 tyder på att antikroppar nivån tillfälligt visas på cellytan korrelerade väl med produktiviteten i cellen. Således kan en fluorescein-konjugerade antikroppen användas till att känna igen membranbundet produkten och stöd isolering av hög producenter. Alternativt har coexpression av reporter gener och gel microdrop teknik använts för att underlätta valet av hög-producerande kloner av FACS 6-8. Förutom att isolera höga producera kloner via FACS har andra tekniker utvecklats för att uppnå samma mål. Dessa inkluderar Trellis Bioscience CellSpot teknik som använder microspere system påvisande av antikroppar och laser screening teknologi för att identifiera högproduktiva kloner och eliminera oönskade celler, Genetix ClonePix FL och StemCell Technologies ClonaCell EasyPick plattform som utför en hög throughput screening av produktionslinjer cell med hjälp av en fluorescerande system för påvisande av antikroppar . Vi valde att genomföra FACS kloning metod som bygger på underlag i samband antikroppar nivå eftersom den kombinerar enkel användning, selektivitet på produktivitet och clonality.
Anställning av TECAN Freedom EVO ® vätskehantering systemet ökat betydligt screening genomströmning, vilket ger möjlighet att välja för hög avkastning kloner från en mycket större cell pool. Andra instrument för analys som HTRF, BioForte Oktett, HPLC, etc, är alla möjliga medel för att välja hög producenter och sålla ut låg producenter. Genom att spåra klon formation med CloneSelect Imager ™ genererade vi nödvändig dokumentation för att bevisa clonality med digitaliserade cellinje historia. Clonality bekräftas ytterligare av genetiskt karakterisera enda plats transgenen integration på kromosom. En subcloning steg, som brukar vidtas för att säkerställa clonality kan därmed elimineras. Detta kommer att spara 4-8 veckors tid för cellinje utveckling. Sammanfattningsvis visade kvalitet cellinjer genererats av hög genomströmning automatiserad plattform hög produktivitet, produktion stabilitet och dokumenterad cellinje historia som ska möta efterfrågan på storskalig produktion och gällande myndighetskrav.
The authors have nothing to disclose.
Name | Company |
BD FACS Aria™ Cell Sorter | BD Bioscience |
CloneSelect™ Imager | Genetix |
TECAN Freedom EVO® liquid handling system | Tecan Group |