Vi visar tillverkning av en enkel mikroflödessystem enhet som kan integreras med standard elektrofysiologi uppställningar för att exponera mikroskala ytor av en hjärna skiva på ett väl kontrollerat sätt till olika signalsubstanser.
Abstract
Vi har visat tillverkning av en två-nivå mikroflödessystem enhet som enkelt kan integreras med befintliga elektrofysiologi inställningar. De två nivåer mikroflödessystem enheten är tillverkad med hjälp av en två-stegs-standarden negativa motstå litografi process 1. Den första nivån innehåller mikrokanaler med in-och utlopp i vardera änden. Den andra nivån innehåller mikroskala cirkulärt hål ligger mitt i kanalen längd och centrerad tillsammans med kanalbredd. Passiv pumpa metoden används för att pumpa vätskor från inloppet till utloppet 2. Den mikroflödessystem enheten är integrerad med off-the-shelf kamrarna perfusion och möjliggör sömlös integration med elektrofysiologi installationen. Vätskorna introducerades på inloppsportar flödet genom mikrokanaler mot utloppet hamnar och även fly genom den cirkulära öppningar placerade på toppen av mikrokanaler i badet av perfusion. Således bottenytan av hjärnan skiva placeras i perfusion kammaren badet och ovanför mikroflödessystem enheten kan utsättas med olika signalsubstanser. Den mikroskala tjocklek mikroflödessystem enheten och öppna karaktär av material [glas täckglas och PDMS (Polydimetylsiloxan)] används för att göra mikroflödessystem enhet möjliggör mikroskopering av hjärnan skiva. Den mikroflödessystem Enheten tillåter modulering (både rumsliga och tidsmässiga) av de kemiska stimuli presenterades för mikromiljöer hjärnan slice.
Protocol
SU-8 mögel tillverkning Mästare förberedelse SU-8 sjökapten på kiselskiva substrat är beredd att använda en två-stegs-standarden negativa motstå litografi processen. Justeringen märken på kiselskiva avlägsnas med ett rakblad som höjden av dessa strukturer (som ligger längs den yttre periferin av skivan) är mer än den faktiska enheten strukturer. Den kiselskiva sedan rengöras med isopropylalkohol och torkas i en ström av N 2. Stöd pela…
Discussion
Befintliga makroskala eller mikroskala hjärnan skiva perfusion kamrar är begränsade när det gäller den rumsliga upplösningen de ger utsätta hjärnan skivor med signalsubstanser. Den mikroflödessystem enhet tekniken visat här övervinner denna begränsning med enkla bioMEMS tekniker. Det förväntas att enkelheten i tillverkningen av mikroflödessystem enheten och enkelt att integrera dem med befintliga elektrofysiologi uppställningar kommer att tillåta utbredd tillämpning av visat anordningen tekniken. Intressant experiment som …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Finansieringen kom från NIH MH-64.611 och NARSAD Young Investigator Award. Författarna vill också erkänna Adam Beagley, Mark Dikopf och Ben Smith för deras tekniskt bistånd.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
RC-26GPL
Tool
Warner Instruments
W2-64-0236
Low Profile Large Bath RC-26GLP Recording Chamber
SHD-26GH/10
Tool
Warner Instruments
W2-64-0253
Stainless steel slice hold-down for RC-26G, 1.0 mm thread spacing
Shaikh Mohammed, J., Caicedo, H., Fall, C. P., Eddington, D. T. Brain Slice Stimulation Using a Microfluidic Network and Standard Perfusion Chamber. J. Vis. Exp. (8), e302, doi:10.3791/302 (2007).