Wir haben eine Kollagen-basierten entwickelt<em> In-vitro-</em> Assay, der Proliferation und Invasion fördert von Proben aller Brustkrebs-Subtypen. Optical Projection Tomographie, eine dreidimensionale Mikroskopie-Technik wurde verwendet, um zu visualisieren und zu quantifizieren Tumorausdehnung. Dieser Test kann verwendet werden, um Drogen-Reaktion der einzelnen Tumorproben zu quantifizieren.
Brustkrebs ist eine der Hauptursachen für die Sterblichkeit in der westlichen Welt. Es ist bekannt, dass die Ausbreitung von Brustkrebs, zunächst lokal und dann distal, ist ein wichtiger Faktor in die Prognose der Patienten. Experimental-Systeme von Brustkrebs vertrauen auf Zell-Linien in der Regel von Primärtumoren oder Pleuraergüsse abgeleitet. Zwei große Hindernisse stehen dieser Forschung: (i) einige bekannte Sub-Typen von Brustkrebs (vor allem schlechte Prognose luminalen B Tumoren) nicht innerhalb der aktuellen Zeile Sammlungen vertreten; (ii) den Einfluss der Tumor-Mikroumgebung in der Regel nicht berücksichtigt.
Wir demonstrieren eine Technik zur Kultur primärem Mammakarzinom Proben aller Sub-Typen. Dies wird durch die dreidimensionale (3D-) Kultur, in dem kleine Stücke des Tumors in weichen Ratte Kollagen I Kissen eingebettet sind erreicht. Innerhalb von 2-3 Wochen, die Tumorzellen in das Kollagen verteilt und bilden verschiedene Strukturen ähnlich denen in der menschlichen tumours1 beobachtet. Tragfähige Adipozyten wurden Epithelzellen und Fibroblasten in den ursprünglichen Kern der Histologie evident. Bösartige Epithelzellen mit squamoid Morphologie wurden gezeigt Invasion in das umgebende Kollagen. Kernpolymorphie war in diesen Zellen evident, zusammen mit Mitosen und apoptotische Körper.
Wir haben Optical Projection Tomographie (OPT), ein 3D-Imaging-Technologie, eingesetzt, um das Ausmaß der Tumorausbreitung in Kultur zu quantifizieren. Wir haben OPT verwendet werden, um den Großteil Volumen des Tumors Kultur zu messen, einen Parameter routinemäßig während der neo-adjuvanten Behandlung von Brustkrebs-Patientinnen gemessen werden, um als Reaktion auf medikamentöse Therapie zu beurteilen.
Hier präsentieren wir die Gelegenheit, Kultur menschlichen Brusttumoren ohne sub-type Bias und zu quantifizieren, die Ausbreitung dieser ex vivo. Diese Methode könnte in der Zukunft genutzt werden, um Drogen-Empfindlichkeit in ursprünglichen Tumor zu quantifizieren. Dies kann einen besseren prädiktiven Modells als derzeit verwendete Zelllinien.
Collagen-basierte Assays, um das Verhalten von Krebszelllinien Studie sind jetzt weit 6,7,8 verwendet. Dennoch haben diese Tests nicht in vollem Umfang die Komplexität des Tumors und seiner Umgebung wider. In dieser Studie zeigen wir, dass menschliche Brustkrebszellen Materialien in ähnlicher Weise, ex vivo eingesetzt werden kann. Darüber hinaus ist OPT ein nützliches Werkzeug, um die 3D-Erweiterung von Brustkrebs zu charakterisieren. Wir fanden, dass die wichtigste Einschränkung dieser Technik die Verfügbarkeit von Tumor-Materialien (a Single-Core-Biopsie ist ausreichend für 4-6 Assays) ist. Ein weiterer limitierender Faktor ist, dass strukturelle Invasion tritt nur in etwa 40% des Assays. Um dies zu überwinden, wir regelmäßig add beliebige Behandlung um Tag 7, um alle Tests mit sichtbarem Wachstum.
Der Einsatz von OPT könnte in der Zukunft erweitert werden, um auch erkennen, Bulk-Änderungen, ex vivo, die sich aus medikamentöser Behandlung. Dies wiederum könnte zu erleichtern stärker individualisierten Krebstherapie, unabhängig von Tiermodellen. Wir prüfen derzeit die Antwort der ER + Tumore auf Tamoxifen ex vivo.
The authors have nothing to disclose.
Wir danken Lorna Renshaw (Edinburgh Breast Unit) für ihre unschätzbare Hilfe bei der Beschaffung von klinischen Proben.
Verwendung von Tumormaterial wurde von der Lothian Research Ethics Committee (08/S1101/41) zugelassen und erhältlich unter der Schirmherrschaft des Experimental Cancer Medicine Centre Programm (Edinburgh).
Diese Arbeit wird von der Scottish Funding Council unterstützt. ADL ist eine Miss Margaret Butters Reekie Vertrauen klinischen Kollegen.
Name of Reagent | Company | Catalogue No. |
MEGM Complete | Lonza | CC-3150 |
DMEM/F12 | Sigma-Aldrich | D8900 10X1L |
β-oestradiol | Sigma-Aldrich | E8875-250MG |
Rabbit anti-cytokeratin | Dako | Z0622 |
Goat anti-rabbit Alexa555 | Invitrogen | A21422 |
All other standard reagents were obtained from Sigma-Aldrich.