CD4 + T-Lymphozyten Erfassen mit einem Einweg-Mikrofluidik-Chip für HIV

Published: October 01, 2007
doi:

Protocol

Bereiten mikrofluidischen Kanal mit anti-CD4 + biotinlayted Oberfläche. Injektion von 10 ml Probe Blut bei 5 ml / min in den mikrofluidischen Kanal mit Spritzenpumpe. Spülen Sie das Blut bei 20 ml / min für 20 min mit PBS. Inject verdünnt FACS Lyse-Lösung (verdünnt auf 10% von Stammlösung mit PBS) bei 5ul/min für 15 min. Inkubation: 15 min. Inject primären CD3 +-Antikörper-Lösung (verdünnt auf 10% von Stammlösung mit PBS) bei 5 ml / min für 20 min. </…

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
PDMS microchannel       Fabricated by SU-8 mold
Blood       Donated blood from normal human subject. Mass General Hospital, 10 X high density WBC or Brigham and Women’s Hospital.
PBS Buffer Invitrogen 14190 1x Dulbecco’s Phosphated Buffered Saline.
FACS lysing solution   Becton Dickinson 349202 Diluted to 10% from stock solution with PBS.
Anti-CD4+ biotinlayted Ab   Beckman Coulter IM0704 Surface prepared with Anti-CD4+ biotinlayted Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS/BSA after mixing with 0.2mg stock and 1ml deionized water.
goat anti-hCD3delta pAB Santa Cruz Biotechnology sc-1128 Diluted to 10% from stock solution with PBS
rabbit anti-goat IgG PE   Santa Cruz Biotechnology sc-3755 Secondary Ab fro anti-CD3 Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS
anti-human CD4+   Becton Dickinson 557695 Alexa Fluor 488 labeled, diluted to 20% from stock solution with PBS.
DAPI   Invitrogen D1306 4’,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride solution, diluted to 0.2% from stock solution with PBS.

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Cite This Article
Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).

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