Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

CD4 + T-לימפוציטים לכידת באמצעות שבב Microfluidic פנויה ל-HIV

doi: 10.3791/315 Published: October 1, 2007

Summary

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here
  1. הכן ערוץ microfluidic עם משטח + אנטי CD4 biotinlayted.
  2. הזרק 10 מ"ל של דם מדגם ב 5 מ"ל / דקה לתוך התעלה microfluidic עם משאבת מזרק.
  3. לשטוף את הדם 20 מ"ל / דקה במשך 20 דקות עם PBS.
  4. הזרק פתרון FACS בדילול lysing (בדילול מלא 10% מן המניות עם פתרון PBS) בשעה 5ul/min במשך 15 דקות.
  5. דגירה של 15 דקות.
  6. הזרק CD3 העיקרי + פתרון נוגדן (בדילול מלא 10% מן המניות עם פתרון PBS) בשעה 5 מ"ל / דקה במשך 20 דקות.
  7. דגירה למשך 2 שעות.
  8. פלאש החוצה עם ערוץ PBS ב 5 מ"ל / דקה במשך 15 דקות.
  9. הזרק 20% AF488 CD4 + נוגדן, 0.2% פתרון DAPI מניות, ו -10% משני CD3 + נוגדן ב 5 מ"ל / דקה במשך 20 דקות באותו זמן.
  10. דגירה של 20 דקות.
  11. לשטוף את הערוץ עם PBS ב 5 מ"ל / דקה במשך 15 דקות.
  12. ספירת תאים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי:
    1. לבן (אופטי) - שחור ולבן: תא ואבק
    2. UV (DAPI) - כחול: תא בלבד
    3. כחול (CD4 +) - ירוק: לימפוציטים מסוג T ו מונוציטים
    4. גרין (CD3 +) - אדום: לימפוציטים מסוג T בלבד

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
PDMS microchannel Fabricated by SU-8 mold
Blood Donated blood from normal human subject. Mass General Hospital, 10 X high density WBC or Brigham and Women’s Hospital.
PBS Buffer Invitrogen 14190 1x Dulbecco’s Phosphated Buffered Saline.
FACS lysing solution BD Biosciences 349202 Diluted to 10% from stock solution with PBS.
Anti-CD4+ biotinlayted Ab Beckman Coulter Inc. IM0704 Surface prepared with Anti-CD4+ biotinlayted Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS/BSA after mixing with 0.2mg stock and 1ml deionized water.
goat anti-hCD3delta pAB Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-1128 Diluted to 10% from stock solution with PBS
rabbit anti-goat IgG PE Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-3755 Secondary Ab fro anti-CD3 Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS
anti-human CD4+ BD Biosciences 557695 Alexa Fluor 488 labeled, diluted to 20% from stock solution with PBS.
DAPI Invitrogen D1306 4’,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride solution, diluted to 0.2% from stock solution with PBS.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

CD4 + T-לימפוציטים לכידת באמצעות שבב Microfluidic פנויה ל-HIV
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).More

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter