Bu hasat basınçlı kaplar endotele lökosit yapışma görselleştirmek için bir yöntemdir. Bu teknik, bu nedenle yüksek kan basıncı fizyopatolojik koşullardaki taklit-200 mmHg intralüminal basınca kadar farklı kayma akışı altında vasküler yapışma eğitimi sağlar.
Dünya çapında, hipertansiyon, nüfusun yaklaşık dörtte biri olması için bildirilen ve mortalite dünya çapında önde gelen biyomedikal risk faktörü. Vasküler hipertansiyon, endotel disfonksiyonu ve ateroskleroz ve 2 kronik böbrek hastalığı, felç 3 ve 4 kalp yetmezliği gibi çeşitli hastalık durumlarında önde gelen artış inflamasyon ile ilişkili . Bir ilk adım aterogenez yol açan vasküler inflamasyon, endotel ile yuvarlanma, bağlama, bağlılık ve lökositlerin sonraki göçüne içeren yapışma kaskad. İşe Alım ve lökositlerin endotele birikimi vasküler hücre adezyon molekülü-1 (VCAM-1), hücre içi hücre adezyon molekülü-1 (ICAM-1) ve E-selektin gibi artar gibi adezyon moleküllerinin bir upregülasyonu aracılı sitokin ve kemokin serbest bırakılması ve reaktif oksijen türlerinin bir upregülasyonu 5 in vitro yöntemleri gibi statik yapışma deneyleri, hücre-hücre adezyon yer mekanizmalarının yanı sıra hücre adezyon moleküllerinin analiz belirlemek için yardımcı olur . In vitro çalışmalar önceki istihdam Yöntemleri endotel üzerindeki akut basınç artar monosit adezyonu, adezyon molekülleri ve inflamatuvar belirteçler 6 Bununla birlikte, in vitro tayinlerde çok benzer, bu bulgular, gerçek zamanlı olarak yapılmış değil bir upregülasyonu yol açabileceğini göstermiştir fizyolojik akış koşulları altında, ne de tam kan. Bu nedenle, in vivo testleri giderek vasküler inflamasyon ve plak gelişimi göstermek için hayvan modellerinde kullanılmaktadır. Intravital mikroskopi artık yaygın lökosit adezyonu, haddeleme, göç ve göçüne 7-9 değerlendirmek için kullanılır. In vivo çalışmalar, endotelyal adezyon lökosit üzerinde basınç etkilerini birleştirerek daha geniş. Böyle bir çalışmada sadece 10 immünhistokimya ile değerlendirildi arteriyel büyüme ve remodeling ama inflamatuvar belirteçler kayma akışı ve gerçek zamanlı etkileri inceler. Burada bozulmamış basınçlı kan damarları tam kan perfüzyon kullanarak gerçek zamanlı lökosit adezyonu kayıt için bir model sunuyoruz. Metodolojisi, sağlam damarlarında lökosit-endotel yapıştırıcı etkileşimleri gerçek zamanlı analiz sağlayan bir ex vivo geminin kamara perfüzyon modeli 9 bir değişiklik . Bizim değişiklik intraluminal basınç 200 mmHg sadece fizyolojik akış koşulları değil, aynı zamanda basınç şartları altında çalışması için izin manipülasyon sağlar. Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi sistemleri daha önce damar duvar ve lümen çapı 11 gibi damar daralma gözlemlemek için gösterilmiş olsa da bu gerçek zamanlı olarak lökosit leşimlerini gösteren ilk kez . Burada sıçanlardan alınan hasat ve floresan mikroskop birleştiğinde bir ölçüye göre akış odasına kanüle karotid arterler kullanılarak tekniği göstermektedir. Geminin kamara görüntü gemi kısa çalışma mesafesi ile geniş çaplı bir objektif lens sağlayan büyük bir alt coverglass ile donatılmıştır. Ayrıca, seçilen agonist ve / veya antagonistleri daha fazla hücre adezyon kontrol mekanizmalarının araştırılması için kullanılabilir. Intravital mikroskopi üzerinden bu yöntemin avantajları invaziv cerrahi hiçbir ilgisi ve bu nedenle daha yüksek bir verim elde edilebilir. Intravital sadece sistemik inhibitörü tedavisi sağlar iken Bu yöntem aynı zamanda istenen gemi lokalize inhibitörü tedavisi kullanımını mümkün kılar.
Bu, gerçek zamanlı olarak basınçlı koşullar altında bozulmadan izole kan damarlarının endotele lökosit adezyonu incelemek için modifiye edilmiş bir yöntemdir. Perfüzyon yalnız geminin odası, büyük fare ve sıçan damarları pro-inflamatuar suşlarının hızlı bir doğrulama sağlar. Etkinleştirilmesi basınç manipülasyon dinamik hücre etkileşimleri böylece daha iyi taklit-fizyolojik çok yüksek intraluminal basıncı ve fizyopatolojik koşullardaki düşük uyulması gereken sağlar. Damarların çapı da yeterli hücre görüntüleme programı kullanarak ve bu nedenle kayma akışı ve hızı belirlenir ve bu yüzden manipüle edilebilir ölçülebilir.
Kendi myograph yetenekleri ile, banyo yerleştirilir farmakolojik müdahaleler, mekanik ve sinyalizasyon yolaklar çalışmaları sağlayan bu model ile deneysel koşullar altında mümkün olan başka bir boyut ekleyin. Endotel korunması basınç manipülasyon sırasında teyit mümkün olmasa bile, ACh ve PE yanıtları yazılan perfüzyon 9 yapılabilir.
Bu kurulum hücre-hücre etkileşimleri pulsatil kan akımı, ne de sistolik ve diyastolik kan basıncı etkileri intraluminal basınç etkilerini göstermektedir dikkat edilmelidir. Ayrıca, lökosit adezyonu akut basınç değişiklikleri gözlenirken, bu kurulum da kronik basınç etkileri (yani artan inkübasyon sürelerinde ve kronik basınç hayvan modeli kullanarak) bakmak için kullanılan olabilir. Sprague Dawley karotis arterler bu set göstermiştir ama diğer suşları ve tür kanül boyutuna uygun düzenlemeler ile kullanılıyor olabilir. Gerçekten de, hayvanların yaş ve ağırlık seti kadar her gemi için bireyselleştirilmiş gerektiğini, böylece damar çapı etkiler ve dikkat etmek önemlidir. Bağ dokusu yakın ve dikkatli bir diseksiyon derece lökositlerin görselleştirme artırabilir.
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışmada, Victoria Hükümeti OIS Programı, Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi, Avustralya, program ve proje hibeleri (Toz-JPF Chin) ve yüksek lisans bursu (D Michell) tarafından kısmen desteklenmiştir.
Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
---|---|---|---|
Microscope | Carl Zeiss, Inc | SteREO Discovery V.20 | |
PHD 2000 Syringe Pump | Harvard Apparatus | 70-2016 | |
Digital Camera and Controller | Hamamatsu ORCA-ER | C4742-95 | |
Fluorescence Illumination System | Lumen Dynamics | X-Cite 120 | |
Vessel Chamber | Living Systems Instrumentation | CH/1/SH | |
Pressure Servo Controller and Peristaltic Pump | Living Systems Instrumentation | PS – 200 | |
Perfusion Pressure Monitor | Living Systems Instrumentation | PM – 4 | |
2 x Pressure Transducer | Living Systems Instrumentation | PT – F | |
Temperature Controller | Living Systems Instrumentation | TC-01 | |
Peristaltic Pump | Instech Laboratories, Inc | P720 | |
VybrantDil cell-labelling solution | Invitrogen | V-22885 | Use 1:1000 |