Summary
本文介绍了诱导参与者的心理压力，这使研究人员能够测量单个参与者或群体之间的心理，生理和神经内分泌反应强调了协议。
Abstract
本文演示了在实验室环境中使用的心理压力协议。协议，使研究人员研究在健康和疾病的应激反应的生物途径是在紧张和焦虑的研究进展的基础。[1]虽然众多的协议，在实验室中诱导应激反应存在，许多忽视提供自然背景或纳入社会和心理压力方面。心理压力协议，荟萃分析表明，特里尔社会压力测试（TSST）的应激激素的反应性。研究，在原来的TSST描述是最有用和最适当的的标准化协议，研究人员试图设计和评估的程序能够诱导可靠的应激反应，在大多数健康志愿者3这些研究人员发现，在心率，血压和几个内分泌应激米的海拔高度arkers的TSST（心理应激）相比，生理盐水注射液（物理应激）。，虽然TSST已被修改，以满足不同的研究小组的需求，它一般由一个到达后的等待期，预期讲话算术准备，演讲表现，口头表现时期，由一个或多个恢复时期。 TSST要求与会者准备并发表讲话，并口头回应一个具有挑战性的算术问题，在一个社会评价的观众。社会评价和不可控性已被确定为关键部件的压力感应的 TSST。使用4十多年来，TSST的目标任务的过程中，有系统地诱导应激反应，以衡量不同反应，焦虑和激活下丘脑 - 垂体 - 肾上腺（HPA）或交感神经 - 肾上腺髓质（SAM）轴1 Researc她一般评估自我报告的焦虑的变化，生理的措施（如心率），和/或神经内分泌指标（如应激激素皮质醇）的TSST。许多研究者通过对应激标志物，如皮质醇和α-淀粉酶（植物神经系统激活的标志）作为替代采血，血液收集技术，以减少混杂强调的唾液取样。除了TSST完成个人所经历的变化，研究人员可以比较不同的治疗组（如临床与健康对照样本）或压力减少干预的有效性的变化1。
Protocol
1。设置
- 所有研究应该由适当的机构审查委员会或人类受试者审查委员会之前，数据收集的批准。
- 理想的情况下，两房应进行TSST。一个舒适的候车室，应当向与会者提供开始前的TSST在恢复时期。应该使用一个单独的采访室，准备在演讲中，语音性能和数学部分的TSST推出的新颖性和uncontrolability。
- 安排面试室，使参与者都将面临同盟面试官和位置的视频或录音设备，在参与者的视野。应提供实验室外套，主考人穿在TSST期间增加TSST的压力。指示面试者与参与者保持目光接触，不要在TSST情绪的面部表情。
- 仔细考虑日Ë研究问题（S）选择取决于测量时。应激反应的各种测量的分析和出版物的指导方针是由几个来源（心理生理研究协会提供指引，出版和分析心理生理措施：http://www.sprweb.org/journal/index。 CFM＃指引 ），这些资源在实验设计咨询建议。
- 设置需要记录所有设备的TSST的生理，心理或内分泌反应。此设备可能包括（但不仅限于）电极和电子设备和/或软件来记录心率，心血管反应，皮肤电导或响应，眨眼间，肌肉收缩/色调，呼吸频率;纸和铅笔或电子版本如国家特质焦虑INV的心理工具对于本演示 entory; 6管和尿液，血液或唾液样本收集材料;或录像设备，我们将使用三导联心电图（ECG）电极在TSST测量心率，反复的行政管理国家特质焦虑量 表来衡量前后心理应激反应。我们将利用一个基本的录音系统设计来衡量的生理反应（BIOPAC MP36系统）记录心率。
- 如果血液样本（而不是唾液）将收集实验过程中，应努力，尽量减少在收集过程中的疼痛和苦恼。采血程序可以引入更多的身体或心理压力，混杂的TSST。
- 当参与者到达时，欢迎他们到实验室。取得知情同意和座位参与者的舒适。
- 收集人口统计信息，筛选信息或additioNAL的到来，实验所需的措施。验证参与者不消耗食物或饮料（水除外）在过去一小时，如果收集皮质醇测量一个短期内禁食建议，如果你将收集唾液样本进行分析 。 酸性食物或饮料，或可见的污染有关的pH值的变化可干扰精确测量唾液中的标记。 如果利益的措施可能是由药物或其他代谢物污染，可能需要尿毒理学筛查。 因素可能会影响应激反应（如药物，疾病，睡眠，最近的压力事件，社交恐惧症）也应该被认为是当筛选参与者的信息。
2。预应力测量
- 指示的参与者，在候诊室等待45分钟的舒适。您可以选择阅读材料，如含有EMO杂志，提供参与者tionally中立的内容，或在此期间的另一个情感中立的活动。
- 经过45分钟的等待期，管理国家特质焦虑量 表评估预应力焦虑。此外，可能是在紧张，焦虑或放松状态的变化，旨在评估的其他文书管理（如视觉模拟尺度 ）。
- 收集“预应力”的唾液样本。指示的参与者，用清水冲洗自己的嘴。 5-10厘米的吸管部分和一个干净的，一次性的2.0毫升聚丙烯小瓶，让参与者。指示的参与者，他们的头部倾斜着让唾液池口的地板上，然后通过一根稻草到小瓶的唾液。从参与者收集约1.5-2.0毫升的唾液。另外，唾液可以收集使用吸水牙科灯芯（或类似材料），并指示参与者咀嚼或饱和材料与唾液。如果possible，离开房间提供隐私的参与者。标签和所有唾液样本储存在-20 ° C尽快。
- 记录的预压应力的生理测量5分钟。
3。该TSST
- 如果您将使用一个单独的面谈室（增加TSST应力的影响），带给参与者从候车室进入面试室。
- 开始TSST讲话的准备期，请阅读下面的脚本参与者：“这是任务的讲话准备的一部分，你在精神上准备一个五分钟的演讲，描述你为什么会是你理想的工作的一个很好的候选人。你的发言将进行录像，并在公众演讲训练的法官小组审查，你有10分钟的准备，现在开始你的时间。“
- 记录在10分钟的演讲准备期的生理测量。设置一个10分钟的数字式计时器，离开房间。 10分钟后，回到房间，身穿白大褂。阅读下面的脚本参与者：“这是讲话的一部分任务，你要描述你为什么会是你理想的工作的一个很好的候选人发表了演讲，你应该说整个五分钟的时间内。现在开始你的时间。“道具摄像头应打开现在开始，增加评价/性能压力。
- 记录在5分钟的讲话表现期的生理测量。如果参与者停止在演讲中所说，让他或她保持沉默20秒。如果他或她不会继续讲，提示参与者继续说，指示他们：“你还有剩余的时间。”
- 在5分钟的讲话表现期结束时，参与者阅读下面的脚本：“在最后五分钟，你将被要求按顺序从1022减去13号任务的数学部分，你会口头上。LY报告你的答案大声，并要求从1022开始，如果是一个错误。你的时间，现在开始“，如果参与者犯错，提示他们：”这是不正确的的，请从1022开始“设置为5分钟的数字计时器。
- 记录在5分钟的数学表现期的生理测量。
- 在数学履行期限的TSST年底，收集“后讲”的唾液样本。
- 管理后的应力状态特质焦虑量表。
4。后强调恢复测量
- 与会者返回到原来的候车室。在第一个恢复时期，指示参与者舒适的等待20分钟。设置一个20分钟的数字式计时器，离开房间。
- 20分钟后返回候车室，并收集了“恢复1”唾液样本。
- 在第二个恢复期，指示参与者，再等待20分钟舒适。设置一个20分钟的数字式计时器，离开房间。
- 20分钟后返回候车室，并收集了“复苏2”唾液样本。
- 指导参与完成的“复苏”的国家特质焦虑量表。
- 汇报的参与者，以实验的真实性质。通知他们的表现是不是没有分析其辞或数学成绩将进行记录和参与者。到参与者，他们提出的任务是不合理的困难并没有反映参与者的资质或能力时解释。
5。数据分析
- 要分析心理的措施，每个国家特质焦虑量 表得分从预压应力，应力和恢复时间点。 6
- 分析生理措施，为每5分钟平均心率评分“预应力计算，”讲话准备“，”讲话“表现”和“MATH“的TSST的时期。此外，计算平均分数TSST或TSST在离散时间点的测量心率为每分钟。
- 分析神经内分泌措施，检测唾液激素浓度的样品，使用市售的环境影响评估套件。
6 可选：附加唾液皮质醇含量的协议信息（转载Salimetrics唾液皮质醇检测试剂盒插入）
- 至室温，将所有的唾液检测试剂盒。
- 准备洗涤缓冲液，按试剂盒说明。
- 确定到适当的水井在重复板布局和移液器25μL标准和控制。
- 解冻唾液样本，涡在1500 XG（3000转）离心15分钟。
- 吸取25μL的离心样品的透明液体，为在适当的井板（一式两份）。
- 酶标记物，并吸取200微升到所有井准备。 混合盘5分钟500转，并孵育一个额外的55分钟。
- 洗净，吸干板缓冲液洗4次。
- 加入200μL的四甲基联苯胺，每孔（TMB）解决方案，采用多道移液器。
- 混合板5分钟500转，在黑暗中孵育一个额外的25分钟。
- 添加50μL到每口井的一站式解决方案和混合3分钟500转，停止反应。
- 用板底部清洁，并在450 nm处读取板块在酶标仪添加一站式解决方案的10分钟内。
- 要计算皮质醇浓度，计算平均光密度为所有重复的井。减为零，标准，控制和样品孔的平均光密度的非特异性结合井的平均光密度。
- 计算每个标准，控制和样品的断言这些井的平均光密度（B）除以势必％（B / BO）岁零井（博）的光密度。确定使用的物流功能的软件插值的控制和样品的浓度。
7。代表性的成果：
这里介绍的数据代表是编制审查期间与健康成年男性参与者下午，在我们的实验室进行的文学和两项研究。 这些数据是为了约表示，可能会发现使用本文提出的协议的结果 。
这TSST协议（图1）诱导自我报告的焦虑程度的增加（由国家特质焦虑量表测量图2），心率（图3），和唾液皮质醇浓度（图4）。如图1所示的实验方案是提供各种测量过程中可能会与TSST的数据收集会议的一个例子。 measuremen时机TS和列入不同的措施，将取决于具体的研究问题。如果使用，目的是减少焦虑和/或应激反应，在这些措施的减弱或减毒增加预测的干预。
图1。实验协议注：特里尔社会压力测试（TSST）;国家特质焦虑量 表（STAI），5分钟前应力期（PS）; 10分钟提前应激期（讲话筹备）（）; 5分钟的讲话期间。 （S），5分钟的数学期（M）。
图2。代表状态焦虑分数注：国家焦虑评分从20 iten状态焦虑状态特质焦虑量 表（STAI）测量计算代表分数反映在我们的实验室收集的数据，在文学出版。
图3。代表心率数据 注 ：心脏每分钟节拍数（BPM）的速度代表值，反映在我们的实验室收集的数据，在文学出版。
图4。代表唾液皮质醇数据 注 ：UL / DL中的皮质醇浓度 。代表值反映了在我们的实验室收集的数据，在文学出版。
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Discussion
在这篇文章中，我们演示了如何在一个健康的志愿者进行特里尔社会压力测试。 TSST是一个标准化的实验室社会应激诱导强大而可靠的心理，生理和神经内分泌措施增加。 TSST是一个有用的替代物理压力，如在寒冷的压测试或跑步机上行走，并抄录在评价观众面前表现更自然的心理压力。
的TSST的许多方面可以进行修改，以满足各种研究方案的需求。本文所演示的测量时间点代表最低的采样。许多实验可能需要额外的采样点的测量，以最好的捕捉应激反应的变化。长度的预期，语音和数学时期（一般为5-10分钟不等），回收期（S）纳入或遗漏，并组成在演讲和数学表演（从一台摄像机，一个评估小组不等）的评价观众可以修改。 TSST可以管理团体以及个人。7自置居所津贴或SAM轴的激活，交感神经和副交感神经系统的活动，或心理压力的自我报告可以包括额外措施，以评估的TSST的响应。例如，一些研究小组可能会发现心率变异性，皮肤电反应，血压，惊跳或眨眼反应，或体温的变化来衡量的TSST。检讨措施，常用来评估自主神经系统的活动，请参阅2009年门德斯 ，7最近，一些研究小组也开始调查免疫反应的TSST变化。评估心理反应的TSST的许多选项也可用（如情绪状态，视觉analo简介GUE尺度，或紧张，焦虑或放松）李克特式的收视率。
TSST个体反应的差异是一个重要的问题时，使用此协议。在健康的成人样本中，已报道的TSST增加唾液皮质醇水平在大约70-80％的参与者的两到三倍，但是反应千差万别个人之间。1研究人员已经证明影响的年龄，性别，9 ，10出生重量，11韧性/附件的风格，12，13儿童虐待，14教育，15个个性特征，使用尼古丁/酒精/ 咖啡因 1或药物的使用（特别是镇静药，抗焦虑药或激素的避孕药）16，17， 18认知行为疗法，19慈悲冥想，8和20音乐tSST的反应在健康人群中的存在。最近，研究人员建议前等待TSST期之前采取的测量是重要的，可以揭示一个更深入的讨论，评估唾液腺激素的个体差异和唾液腺激素评估在社会神经系统科学的使用概述21有关个人的应激反应。的个体差异表现在TSST的更详细的介绍，请参阅Schultheiss斯坦顿，2009年22， 看到 Kudielka等，2009年23
除了个体差异，皮质醇昼夜波动，然后通过每天减少在早晨高的水平。如果皮质醇的变化将作为衡量的TSST，重要的是一致的时间点收集的样品，准确的分析和，以避免混杂TSST引起的皮质醇反应皮质醇觉醒后的变化，发生在早上。
ENT“>虽然很多报道都集中使用TSST研究强调健康，成年人群的反应，这个协议是适合在临床种群中使用，并已适应与儿童使用 。24可能有助于该协议有关的重要共识压力有关的疾病或应激反应的发展变化所涉及的各种生物途径的作用。Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
没有利益冲突的声明。
Acknowledgments
感谢您对杰西卡希斯协议的建议和贡献的有代表性的数据。特别感谢萨布丽娜Blackledge，劳伦科胡特克和Kerisa谢尔顿展示了这一协议。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Name of the equipment/Supply | Company | Catalogue number | |
| BSL Psychophysiology System, Mac OSIncluding MP36 Data Acquisition Unit and three lead electrocardiogram electrodes | Biopac Systems, Inc. | BSLPSY-M | |
| State Trait Anxiety Inventory | Mind Garden, Inc. | STAID-B | |
| Salivary Cortisol Enzyme Immuno Assay Kit | Salimetrics | 1-3002 | |
| 2.0 ml polypropylene vials | Fisher Scientific | 05 40B 146 | |
| BioRad Microplate Reader, Model 680, with Microplate Manager software | Bio-Rad | Plate Reader: 168 1000Software: 1706800 |
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