Summary
Tek tabaka korunan kümeleri (MPCs) olarak bilinen Alkanethiolate stabilize altın kolloidler, sentezlenmiş karakterize ve adsorpsiyon gibi basit redoks protein protein tek tabaka elektrokimya için bir arayüz olarak ince filmlerin içerisine monte
Abstract
Kolloidal altın, protein monolayer elektrokimya (PME) adsorpsiyon platformları olarak hizmet film meclisleri içine sentezlenir ve sonradan dahil tek tabaka korunan altın kümeleri (MPCs) denir alkanethiolate ligandlar ile korunan nanopartiküller. PME redoks proteinlerin elektron transferi (ET) reaksiyonları için bir redoks ortağı olarak da hizmet veren bir modifiye elektrot, bir adsorpsiyon platformu onları kapatarak elektrokimyasal özelliklerini inceleyerek model sistem olarak kullanılmaktadır. Çalışmalar, bu tür altın nanoparçacık filmi meclisleri daha homojen bir protein adsorpsiyon ortamı sağlamak ve alkanethiol kendini monte mono tabakaları (SAM) ile modifiye daha geleneksel sistemlere kıyasla mesafe bağımlı olmadan ET teşvik olduğunu göstermiştir. 1-3 Bu yazıda, MPCs hexanethiolate ligandlar değiştirilmiş bir Brust reaksiyon 4 kullanılarak sentezlenen ve görünür ultraviyole (UV-Vis) spektroskopisi, transmisyon elektron mikroskobu (TEM) ve proton (1 H), nükleer manyetik rezonans (NMR) ile karakterize olan Fonksiyonlu . PPK filmler MPC katmanları ve dithiol bağlayarak molekülleri alternatif bir "dip döngüsü" yöntemini kullanarak SAM modifiye altın elektrot arabirimler monte edilir. Altın elektrot Film büyüme sistemin şarj akımı çift katmanlı değişiklikleri ölçerek elektrokimyasal olarak izlenir. Tahmini bir film kalınlığı sağlar silan modifiye cam slaytlar üzerine monte analog filmler, film büyüme ve kesitsel TEM analiz optik izleme için izin verir. Film montaj sırasında, MPC ligand koruma manipülasyon gibi parçalar arası bağlantı mekanizması farklı adsorpsiyon mekanizması olan redoks protein arabirimi, kolayca adapte ağa filmleri için izin. Örneğin, Pseudomonas aeruginosa azurin (AZ) hexanethiolate MPCs ve sitokrom-c (CYT c) MPC arayüzey tabakası değiştirilmiş bir karboksilik asit elektrostatik immobilize olabilir dithiol bağlantılı filmler hidro adsorbe olabilir. Bu raporda, biz sadece AZ sistemi için film protokolü odaklanmak. MPC modifiye sentetik platformlarda proteinlerin adsorpsiyon içeren soruşturmalar biyomoleküllerin ve insan yapımı malzemeleri arasındaki etkileşimlerin daha anlayış ve dolayısıyla biyosensör şemaları, ET modelleme sistemleri, ve sentetik biyouyumlu malzemeler kalkınma yardımı olabilir. 5-8
Protocol
1. Hexanethiolate Monolayer Korumalı Altın Kümeleri Sentezi
Hexanethiolate Fonksiyonlu tek tabaka korunan altın kümeleri (MPCs) gibi, Au 225 (C6) 75 ortalama bir yapı üretmek için altın mol oranı 2:1 1-hexanethiol (C6). Brust reaksiyon 4-9 Özgül değişiklikler aşağıdaki sentezlenir ligand tipi, özel tiol-altın oranları, sıcaklık ve reaksiyon doğum oranı, ya da post-sentez uygulamaları, 9-11 sırasıyla, değişen temel boyutları ve fonksiyonel koruyucu grupların MPCs çeşitli verim alınabilir 4 MPC yaklaşık ( çeşitli alkanethiol gruplarla Fonksiyonlu MPCs ortalama) kompozisyonlar, proton (1 H) iyot-ayrıştırılır örnekleri nükleer manyetik rezonans (NMR) analizi ile tespit edilebilir .
- 30 mL toluen uygun davlumbaz havalandırma ile 1.1 g tetraoctylammonium bromür (TOABr) eritin.
- M ultrapurified 18 su (H 2 O UP) ~ 20 ml 0,38 g sodyum bor hidrür (NaBH 4) çözülür ve en az 30 dakika boyunca buz üzerinde soğuk izin.
- ~ 20 ml H 2 O 0.31 g hidrojen tetrachloroaurate (HAuCl 4) çözülür ve kantitatif çözüm karışımı bir ek kullanarak TOABr toluen çözümü için transfer ~ H 2 O 5 mL sulu altın faz transfer etmek için çözünmemiş çözüm çözüm. Yanık turuncu, sulu ve net susuz aşamaları iyi karıştırma, böylece 30 dakika hafifçe kapatılmış ise titizlikle karıştırın.
- Açık, sulu ve yanık turuncu susuz aşamaları, ayırma hunisi aktarın. Sulu (alt) tabakası ve süzün temiz bir balona çözünmemiş (üst) katmanı atın.
- Çözünmemiş çözüm HAuCl 4 ile 2:1 oranında C6 ekleyin. Oluşturmak için, soluk sarı, neredeyse renksiz bir çözüm kırmızımsı turuncu bir renk değişikliği ile tespit Au (I) polimer, 30 dakika karıştırın.
- 0 ° C karıştırılarak en az 30 dakika süreyle yalıtımlı bir buz banyosu ve soğuk reaksiyon karışımı aktarın.
- Kantitatif ve hızlı bir şekilde anında Ayrıca üzerine MPCs kalın siyah bir çözüm oluşturan, tiyoller varlığı bir metalik altın Au (I) azaltmak için reaksiyon karışımı soğuk NaBH 4 çözüm ekleyin. Gece 0 ile reaksiyon karıştırın ° C
- , Reaksiyon karışımı ayırma hunisi transfer atık behere sulu (alt) katmanın atmak ve döner şişesi ağır bir siyah çamur bırakarak yakın tam kuruluk çözünmemiş (üst) toluen katmanı buharlaşması.
- Asetonitril ekleyerek ve bir gecede oturup izin MPCs çöktürün.
- Kauçuk parçaları ve aspiratör ile yan silahlı şişesi ile orta gözeneklilik cam frit ile vakum filtrasyonu MPCs toplayın ve bir bol miktarda asetonitril ile durulayın.
- İzin hava kuru MPCs, ürün tartmak, transmisyon elektron mikroskobu (TEM) ve NMR analizi ile karakterize ve mağaza ileride kullanmak üzere şapkalı. Formvar / bakır ızgara (400 mesh) ve 80-100 kV TEM araç işletim karbon desteği filmi üzerine toluende çözülür, damla döküm MPCs TEM görüntüleri alın. Ortalama çekirdek boyutu, görüntü analiz yazılımı kullanarak, Resim J (ücretsiz) olarak tahmin edilebilir.
2. Film Derleme: Protein Monolayer Elektrokimya Dithiol bağlantılı MPC Film Meclisi
Ilk altın substrat elektrokimyasal dithiol bağlayan moleküllerin ve C6 değiştirilmiş MPCs çözümler, sonuçta dithiol bağlantılı MPC film montaj oluşturmak için birkaç kez tekrarlanır bir "dip döngüsü," telafi etmek için alternatif batırılmadan önce temizlenmeli ve C6 SAM ile modifiye . Önceki çalışmalarda belirtildiği gibi, 2 Pseudomonas aeruginosa azurin (AZ) protein için orijinal plazmid nezaketle Rice Üniversitesi ve AZ Dr Corey Wilson tarafından verildi Richmond profesörü olan Dr. Jonathan Üniversitesi tarafından saflaştırılmış ve liyofilize toz olarak verilmiştir . Dattelbaum, daha sonra görülebilir ultraviyole (UV-Vis) analizi ile doğrulandı gibi 5-10 mcM bir çözüm oluşturmak için 4.4 mM potasyum fosfat tamponu (KPB, pH = 7.0, μ = 10 mM) ile sulandırılır.
- Ilk Lucite tutucu plaka, bir çalışma elektrodu olarak altın yüzey, altın çalışma elektrot elektrik kontağı pirinç, kauçuk conta, Viton elektrot alanını tanımlar, o-ring: aşağıdan yukarıya doğru şu sırayla elektrokimyasal (ECHEM) sandviç hücre birleştirilmesi (0.32 cm 2), cam hücre gövdesi, ikinci kauçuk conta, ve ikinci Lucite hizmetkar levha. Tüm hücre dişli çubukları bir arada tutan ve dikkatle kanat somunların. Hücre 1 M doymuş KCI, Ag / AgCl referans tel ve bir Pt yardımcı elektrot teli ile bir bardak fıçı evler, ticari olarak satın alınan bir referans elektrot ile donatılmıştır.
- Elektrokimyasal temiz incie, 0.2 ila 0.9 V potansiyel pencerelerde 0,2 ila 1,2 V ve 0,2 için 1,35 döngüsel voltametri (CV) yerine altın substrat V (karşı Ag / AgCl, KCl) 100 mV / s, 0.1 MH 2 bir çözüm 4 ve 0.01 M KCl SO.
- 0.1 'den 0.4 V (karşı Ag / AgCl, KCl) KPB içinde taranan 100 mV / s 1 atın KPB potansiyel bir penceresi de dahil olmak üzere "standart koşullar," CV yaparak temizlenmiş çıplak altın substrat şarj akımını ölçmek ve durulama arda ile UP UP H 2 O H 2 O etanol (EtOH), ve EtOH.
- ~ 300 ul EtOH 5 mM C6 çözüm temizlenmiş altın substrat Açığa ve sipariş C6 SAM oluşturmak için bir gecede oturup bekleyin. Hücre C6 çözüm atın ve H 2 O, EtOH ve H 2 O UP UP, EtOH gittikçe durulama
- Standart koşullar SAM şarj akımı ölçün. KPB atın ve gittikçe UP UP H 2 O H 2 O, EtOH, ve EtOH ile durulayın. Şarj akımı çıplak altın ölçümü (adım 2.3) belirgin azalma olmalıdır 1
- EtOH 1,9-nonanedithiol (NDT) çözümü, 5 mM ~ 300 ul SAM modifiye altın substrat ortaya çıkarmak ve C6 SAM içinde moleküller birbirine bağlayan interdisperse NDT 1 saat oturmak için izin verir. NDT çözüm atın ve UP UP H 2 O H 2 O, EtOH, metilen klorür (CH 2 Cl 2), EtOH ile art arda ve iyice durulayın.
- 1 saat süreyle yavaş yavaş N 2 gazı ile köpürme MPC çözüm CH 2 Cl 2 (~ 1 mg / ml) ajitasyon ile altın substrat Açığa . Gerekirse, buharlaşmış MPC çözüm CH 2 Cl 2 ile değiştirin. Bu film montaj ankraj MPC katmanı. MPC çözüm atın ve yeniden gittikçe CH 2 Cl 2 UP H 2 O, ve KPB ile durulayın.
- Standart koşullar PPK katmanı şarj akımı ölçün. KPB atın ve gittikçe UP H 2 O ve CH 2 Cl 2 ile durulayın.
- N 2 gazı ile 20 dakika süreyle yavaş yavaş köpürme ~ 300 ul CH 2 Cl 2 ajitasyon ile 5 mM NDT çözüm altın substrat Açığa .
- NDT ve CH 2 Cl 2 ile iyice durulayın atın. Film montaj ikinci MPC pasoda 2.7 ve 2.8 adımları tekrarlayın.
- Ek MPC katmanları, adımları 2.9 ve 2.10 para yatırmak için tekrarlanır. Her ek MPC tabakası ile şarj akımı karşılık gelen bir artış görülmektedir.
- Ağa MPC filmi tamamlandıktan sonra, KPB ile film modifiye substrat durulayın. AZ protein, KPB ~ 5-10 mcM A'dan Z'ye çözüm ~ 150 mcL ECHEM sandviç hücre içine enjekte ve şapkalı ve en az 1 saat buzdolabında oturmak için izin MPC film montaj adsorbe.
- ECHEM hücresi buzdolabından çıkarın ve yakın oda sıcaklığına geri dönmelerine izin verin. N 2 gazı ile KPB, KPB ile dolum ECHEM hücre ve kabarcık KPB ile 10 dakika süreyle iyice durulayın.
- Protein tek tabaka elektrokimyasal çalışmalarda 0.25 -0.25 V, potansiyel penceresinde CV olarak yapılmaktadır V (karşı Ag / AgCl, KCl) 100 taranan KPB mV / sn.
3. Film Derleme: Optik Takip Dithiol bağlantılı MPC Film Meclisi
MPC filmlerin optik değerlendirme için büyüyen önce, cam slayt bölümleri Piranha solüsyonu (Dikkat! 02:01, 4 ve H 2 O 2 SO H 2 konsantre) ile önceden temizlenmiş ve (3-mercaptopropyl)-trimethoxysilane (3-MPTMS ile tedavi sonra) 1-2 MPC filmler bu modifiye cam üzerine monte edilmiş, daha önce yukarıda anlatıldığı gibi "dip cycle" tekniği kullanılarak slaytlar .
- CH 2 Cl 2 ile 3-MPTMS modifiye cam slayt durulayın ve düşük hızda bir çalkalayıcı üzerinde ajitasyon ise PPK çözüm CH 2 Cl 2 (~ 1 mg / ml) 1 saat için yerleştirin. Bu film montaj silan merkaptanlar endgroups MPCs demirleme ilk PPK katmanı tamamlar. Slayt CH 2 Cl 2 ve N 2 gazı ile kuru ile iyice durulayın. UV-Vis slayt spektrumu (400 ila 1000 nm) alın ve CH 2 Cl 2 ile tekrar yıkayın.
- Düşük hızda bir çalkalayıcı üzerinde ajitasyon ise 1 saat için 5 mM NDT çözüm CH 2 Cl 2 slayt yerleştirin. CH 2 Cl 2 ile slayt durulayın.
- Düşük hızda bir çalkalayıcı üzerinde ajitasyon ise 1 saat süreyle MPC çözüm slayt yerleştirin. Bu film montaj ikinci MPC katmanı tamamlar. Slayt CH 2 Cl 2, N 2 gaz kuru ile iyice durulayın ve slayt UV-Vis spektrumu (400 ila 1000 nm). Ek MPC katmanları film montaj adsorbe olarak yelpazesinde absorbans artan olmalıdır.
- Ek MPC katmanları, st para yatırmak içineps 3,2-3,3 tekrarlanır.
4. Monolayer Karakterizasyonu Kesit Transmisyon Elektron Mikroskobu ile Altın Küme Film Meclisleri Korumalı
TEM kesitleri yeniden gömme tr yüz gömülü filmler 2, 12, temiz, standart bir mikroskop üzerine bir 3-MPTMS modifiye cam slayt üzerine monte bir MPC filmi ilk ekleyerek yapılır tarafından hazırlanan izin Embed 812 epoksi reçine kullanarak , dia aşağıdaki prosedürü sırasında işleme daha da gelişti. Filmin içinde MPCs yüksek sıcaklıklarda dekompoze olarak uygulanan ısı ile dikkatli kullanın.
- Mix Embed 812 epoksi reçine ve en az 12 saat süreyle kalınlaştırmak için izin.
- Epoksi reçine ile "00" BEEM kapsül doldurun ve MPC film örneği (bölüm 3 hazırlanan) üst üzerinde ters. Bir kabarcık, epoksi reçine ve MPC filmi örnek arasında bir mühür, kapsülün üst yükselir, böylece kapsül üzerine koyun basıncı. 60 yaşında en az 18 saat süreyle polimerize İzin ° C ve daha sonra oda sıcaklığına monte slayt serin.
- Isı ° C blok bağlı MPC en yüz film kaldırılması kolaylaştırmak amacıyla, 200, dökme alüminyum sıcak levha monte 20 saniye boyunca slaytlar.
- Örnek bir kuyumcuya testere kullanarak BEEM kapsül blok filmi içeren kesin.
- Iyi silikon iç bakacak kadar MPC film yüzü düz bir silikon kalıp yeniden gömmek kaldırılan kısmı. Epoksi reçine ile oda sıcaklığında silikon doldurun ve 60 yaşında en az 18 saat süreyle polimerize izin ° C Için örnek oda sıcaklığında soğutun.
- Leica UCT ultramicrotome 60-80 nm ince örnek bölümleri bölümleri kesmek için bıçak kenarında dik bir elmas bıçak kullanarak alın.
- Formvar / bakır ızgara (400 mesh) karbon desteği filmi üzerine yerleştirin bölümleri dilimlenmiş ve MPC film meclislerinin hazırlanan kesitler TEM görüntüleri çekmek.
5. Temsilcisi Sonuçlar:
Şekil 1 çift katmanlı MPC film büyüme toplam 5 daldırma döngüleri (MPC ve NDT çözümleri maruz alternatif) akım izleme şarj. Şarj akımı (Şekil 2) film MPC "katmanları" ekleyerek, her daldırma döngüsü ile sistematik bir artış. Döngüsel voltamogramları 0.1 'den 0.4 V (karşı Ag / AgCl, KCl) mV / s 4.4 mM potasyum fosfat tamponu (pH = 7.0, μ = 10 mM) 100 taranan potansiyel bir pencere kullanılarak toplanmıştır. ML Vargo, CP Gulka, JK Gerig, CM Manieri, JD Dattelbaum, CB Marks, NT Lawrence, ML Trawick'in, ve MC Leopold, Langmuir 26 (1), 560-569 izni ile yayımlanmaktadır. Copyright 2010 American Chemical Society.
Şekil 2 dithiol bağlantılı MPC film montaj adsorbe AZ protein (a) şematik. (B), MPC filmin montaj adsorbe AZ Tipik döngüsel voltammogram V (karşı Ag / AgCl, KCl) 100 mV / s 4.4 mM potasyum fosfat tamponu (pH = 7.0 taranan -0.25 'den 0,25' için potansiyel bir pencere kullanılarak toplanmıştır. μ = 10 mM).
Şekil 3 Örnek 3 MPTMS modifiye cam slayt dithiol bağlantılı MPC film büyüme UV-Vis spektral izleme. Linker çözüm MPC çözümü için bir maruz kalma takip NDT cam slayt bir pozlama dip döngüsü oluşur. Film kalınlığı büyüme ve eşzamanlı absorbans artışı izleyen her daldırma sonuçları. Daldırma döngüleri artar sayısı arttıkça, yüzey plazmon bandının giderek ~ 520 nm dalga boyunda tanımlanır. ML Vargo, CP Gulka, JK Gerig, CM Manieri, JD Dattelbaum, CB Marks, NT Lawrence, ML Trawick'in, ve MC Leopold, Langmuir 26 (1), 560-569 izni ile yayımlanmaktadır. Copyright 2010 American Chemical Society.
Şekil 4 dithiol bağlantılı MPC film montaj Transmisyon elektron mikroskobu (TEM) kesitsel görüntü analizi. Ankastre: Tipik filmin montajında kullanılan hexanethiolate Fonksiyonlu MPCs TEM görüntüsü. TEM analizi ~ 2 nm Resim J analizi kullanarak MPCs ortalama altın çekirdek çapı belirlenir. ML Vargo, CP Gulka, JK Gerig, CM Manieri, JD Dattelbaum, CB Marks, NT Lawrence, ML Trawick'in, ve MC Leopold, Langmuir 26 (1), 560-569 izni ile yayımlanmaktadır. Copyright 2010 American Chemical Society.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Protein tek tabaka elektrokimya redoks proteinleri ve sentetik adsorplayıcı platformları arasındaki etkileşimleri çalışmak için kullanılan etkili bir tekniktir. Ancak, bu stratejinin etkinliği, moleküler seviyede kontrol yüksek derecede bir adsorpsiyon arayüzü mühendisi yeteneğine bağlıdır. Bu protokol tarafından oluşturulan MPC-tabanlı platformlar sağlamak ve daha homojen bir protein adsorpsiyonu ortamda 3 alkanethiolate SAMs istihdam geleneksel PME sistemleri ile karşılaştırıldığında daha büyük bir mesafe 2 üzerinde ET kolaylaştırmak için özel olarak tasarlanmış platformlarda temsil eder. Elektrokimyasal bir arayüz olarak MPC film montaj gücü, farklı boyut ve yüzey kimya / fonksiyon, farklı nanomalzemeler, ve aynı zamanda alternatif elektrot yapılandırmaları diğer redoks proteinler, çok yönlülüğü ve adaptasyon. Örneğin, açıklanan prosedür MPCs montaj dahil en dış tabakası basit bir yer değişim reaksiyonları kullanarak kolayca sitokrom c (CYT c) ET çalışmalarına uyarlanmıştır. CYT c katyonik ve 11 olarak yüzeye bağlamak mümkün elektrostatik, karboksilik asit-sonlandırılmış alkanethiols tiyoller yerde alışverişinde sonraki elektrokimyasal analiz Burada anlatılan o aynı olan, protein elektrostatik tahrik immobilizasyon kolaylaştırmak için modifiye elektrot arabirimi oluşan MPCs periferik ligandlar içine ayarlamak için: 1 olabilir değişen tiol-altın oranları gibi proteinlerin farklı boyutlarda, Brust sentezi ayarlamaları, karşılamak için MPCs boyutu, reaksiyon sıcaklığı / doğum oranı, MPC çapları geniş bir yelpazede verim, hedefli bir protein yaklaşık çapı maç olacak . 9-10
Genel prosedür, parçacıklar ve molekülleri birbirine bağlayan (layer-layer) maruz kalma öncelikle tekrarlayan döngüleri farklı nanomalzemelerin bir çeşitlilik içeren ince filmler başarıyla oluşturmak için kullanılır olmuştur. Örneğin, farklı koruyucu kaplama ve benzersiz optik özellikleri ile sulu nanopartiküller (NPS) NPS arasındaki elektrostatik etkileşimler ve polielektrolit köprüler ile özel olarak bağlantılı filmlerin içine ağa 13 aynı stratejiyi de yüksek optik hassas filmin yapımı için uygulanan olmuştur nano kabuk veya içi boş NPS meclisleri.
Prosedürü özel olarak tasarlanmış elektrokimyasal hücreler ve altın substratları kullanan burada tarif ederken, daha genel elektrotlar, elektrokimyasal konfigürasyonları ve Elektroanalitik tekniklerin kolayca uyarlanabilir. Tüm film buharlaşmış altın elektrotlar ve cam slaytlar üzerine inşa edilecek mümkün açıklanan ek olarak, filmler de kolaylıkla CH Instruments veya Biyoanalitik Sistemleri (BAS) hazır ortak altın disk elektrotlar üzerinde monte edilmiştir. Döngüsel voltametri PME birincil elektrokimyasal tekniği olmaya devam ediyor olsa da, biz son zamanlarda başarıyla ET diğer elektrokimyasal adım da dahil olmak üzere teknikleri, nabız, ve empedans tabanlı teknikler çeşitli protein tek tabaka analiz ettik. 14
Araştırma ve protein adsorpsiyonu için nanomalzemenin tabanlı arayüzler geliştirme çalışmaları devam etmektedir ama bu raporda açıklanan PPK film derlemeleri PME çalışmalar için etkili ve gelişmiş bir strateji temsil eder. Bu prosedür oldukça basit ve kolayca gerekirse özel protein hedefleri için uygun olabilir, çok yönlü filmler yaratan, her seviyeden öğrenciler ve bilim adamları tarafından yapılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Çıkar çatışması ilan etti.
Acknowledgments
Biz minnetle Ulusal Bilim Vakfı (CHE-0.847.145) ve bu araştırma cömertçe destekleyen Henry Dreyfus Öğretmen-Scholar Ödül Programı kabul ediyorsunuz. Biz özellikle kesitsel görüntüleme ile ona yardım için Richmond Üniversitesi Biyoloji Bölümü Mikroskopi ve Görüntüleme Müdürü Christine Davis, tanımak istiyorum. Özel teşekkür Dr verilir. T. Leopold, R. Kanters, D. Kellogg, R. Miller, ve W. Kasa yanı sıra, Russ Collins, Phil Joseph, Carolyn Marks, Mandy Mallory ve John Wimbush - Tüm Üniversitesi'nde lisans araştırma yapmak mümkün Richmond. Leopold Araştırma Lab, geçmiş ve gelecek tüm lisans araştırmacılar için çok teşekkür ederiz çok kişisel verilir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tetraoctylammonium bromide | Sigma-Aldrich | 294136 | |
| Sodium borohydride | Sigma-Aldrich | 213462 | |
| Hydrogen tetrachloroaurate | Sigma-Aldrich | 254169-5G | |
| 1-Hexanethiol | Sigma-Aldrich | 234192 | |
| Transmission Electron Microscope | JEOL | 1010 | |
| Nuclear Magnetic Resonance Spectrometer | Bruker Corporation | 300 MHz | |
| Formvar/carbon support film on copper grid (400 mesh) | Electron Microscopy Sciences | FCF400-Cu | |
| Gold substrate | Evaporated Metal Films Corp. | Custom | |
| Ag/AgCl Reference electrode | Microelectrodes, Inc. | MI-401F | |
| Potentiostats | CH Instruments, Inc. | CHI650A, CHI610B | |
| 1,9-Nonanedithiol | Sigma-Aldrich | N29805 | |
| (3-mercaptopropyl)-trimethoxysilane | Sigma-Aldrich | 175617 | |
| Ultraviolet Visible Spectrophotometer | Agilent Technologies | 8453 | |
| Embed 812 epoxy resin | Electron Microscopy Sciences | 14120 | |
| "00" BEEM capsule | Electron Microscopy Sciences | 70000-B | |
| Silicon flat mold | Electron Microscopy Sciences | 70900 | |
| Diamond knife | Diatome | 21-ULE, S12801 |
References
- Loftus, A. F., Reighard, K. P., Kapourales, S. A., Leopold, M. C. Monolayer-Protected Nanoparticle Film Assemblies as Platforms for Controlling Interfacial and Adsorption Properties in Protein Monolayer Electrochemistry. J. Am. Chem. Soc. 130, 1649-1661 (2008).
- Vargo, M. L., Gulka, C. P., Gerig, J. K., Manieri, C. M., Dattelbaum, J. D., Marks, C. B., Lawrence, N. T., Trawick, M. L., Leopold, M. C. Distance Dependence of Electron Transfer Kinetics for Azurin Protein Adsorbed to Monolayer Protected Nanoparticle Film Assemblies. Langmuir. 26, 560-569 (2010).
- Doan, T. T., Vargo, M. L., Gerig, J. K., Gulka, C. P., Trawick, M. L., Dattelbaum, J. D., Leopold, M. C. Electrochemical analysis of azurin thermodynamic and adsorption properties at monolayer-protected cluster film assemblies - Evidence for a more homogeneous adsorption interface. Journal of Colloid and Interface Science. 352, 50-58 (2010).
- Brust, M., Walker, M., Bethell, D., Schriffrin, D. J., Whyman, R. J. Synthesis of Thiol-derivatised Gold Nanoparticles in a Two-phase Liquid-Liquid System. J. Chem. Soc. Chem. Commun. , 801-802 (1994).
- Scouten, W. H., Luong, J. H., Brown, R. S. Enzyme or protein immobilization techniques for applications in biosensor design. Trends Biotechnol. 13, 178-185 (1995).
- Davis, J., Vaughan, D. H., Cardosi, M. F.
- Ramsay, G., Ed, In Commercial Biosensors - Applications to Clinical, Bioprocess, and Environmental Samples. , John Wiley & Sons. New York. (1998).
- Ghindilis, A. L., Atanasov, P., Wilkins, E. Immunosensors: electrochemical sensing and other engineering approaches. Biosens. Bioelectron. 13, 113-131 (1998).
- Templeton, A. C., Wuelfing, W. P., Murray, R. W.
- Aguila, A., Murray, R. W. Monolayer-Protected Clusters with Fluorescent Dansyl Ligands. Langmuir. 16, 5949-5954 (2000).
- Hostetler, M. J., Templeton, A. C., Murray, R. W. Dynamics of Place-Exchange Reactions on Monolayer-Protected Gold Cluster Molecules. Langmuir. 15, 3782-3789 (1999).
- Wanunu, M., Popovitz-Biro, R., Cohen, H., Vaskevich, A., Rubenstein, I.
- Gaylean, A. A., Day, R. W., Malinowski, J., Kittredge, K. W., Leopold, M. C. Polyelectrolyte-linked film assemblies of nanoparticles and nanoshells: Growth, stability, and optical properties. Journal of Colloid and Interface Science. 331, 532-542 (2009).
- Campbell-Rance, D. S., Doan, T. T., Leopold, M. C. Sweep, Step, Pulse, and Frequency-Based Techniques Applied to Protein Monolayer Electrochemistry at Nanoparticle Interfaces. , Forthcoming Forthcoming.
