Analyse quantitative des migrations au hasard des cellules en utilisant la microscopie vidéo time-lapse
Summary
Cette méthode permet le suivi des cellules en temps réel et des mesures quantitatives de différents paramètres de migration cellulaires tels que la vitesse, le déplacement et la vitesse. Contrairement aux méthodes traditionnelles, cette approche temps réel n'est pas basée sur des mesures quantitatives de point de terminaison de migration, mais plutôt il permet de surveiller et de calcul des paramètres différents en permanence.
Abstract
La migration cellulaire est un processus dynamique, ce qui est important pour le développement embryonnaire, la réparation des tissus, la fonction du système immunitaire, et l'invasion tumorale 1, 2. Lors de la migration directionnelle, les cellules se déplacent rapidement en réponse à un signal chimiotactique extracellulaire, ou en réponse à des signaux intrinsèques 3 prévus par le mécanisme de base motilité. La migration aléatoire se produit lorsque une cellule possède une faible directivité intrinsèque, permettant aux cellules d'explorer leur environnement local.
La migration cellulaire est un processus complexe, dans la cellule de réponse initial est soumise à la polarisation et s'étend saillies dans le sens de la migration 2. Les méthodes traditionnelles de mesure de la migration, comme le test de migration Boyden chambre est une méthode simple pour mesurer la chimiotaxie in vitro, qui permet de mesurer la migration comme un résultat point de fin. Cependant, cette approche ne permet ni la mesure des paramètres de migration individuels, elle ne permet pas de visualisation de changements morphologiques que la cellule subit lors de la migration.
Ici, nous présentons une méthode qui nous permet de contrôler les cellules migrent en temps réel en utilisant la vidéo – microscopie laps de temps. Depuis la migration et l'invasion cellulaire sont caractéristiques du cancer, cette méthode sera applicable dans l'étude de la migration des cellules cancéreuses et l'invasion in vitro. La migration aléatoire des plaquettes a été considéré comme l'un des paramètres de la fonction plaquettaire 4, d'où cette méthode pourrait également être utile dans l'étude des fonctions plaquettaires. Ce test présente l'avantage d'être rapide, fiable, reproductible, et ne nécessite pas d'optimisation du nombre de cellules. Afin de maintenir des conditions physiologiquement appropriées pour les cellules, le microscope est équipé d'alimentation en CO 2 et d'un thermostat de température. Le mouvement cellulaire est contrôlé par la prise de vue à l'aide d'une caméra montée sur le microscope à intervalles réguliers. La migration cellulaire peut être calculée en mesurant la vitesse moyenne et unedéplacement mo yen, qui est calculée par un logiciel Slidebook.
Protocol
Discussion
Le dosage en temps réel la migration aléatoire permet précis, sensible, l'analyse des paramètres de migration cellulaires tels que la vitesse et le déplacement. Cette méthode n'est pas limitée à la valeur finale de mesure de point, donc il est plus quantitative. Depuis, les cellules sont surveillés en milieu DMEM avec du sérum normal de; il réduit l'effet délétère de plus d'incubation dans le sérum des médias libres. Il a été montré que la migration des cellules dépend de la mise en f…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier Amanda Struckhoff pour l'aide initiale avec l'expérience. Ce travail a été soutenu par une subvention du NIH 5RO1CA115706.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| DMEM | Thermo Scientific | SH30243.01 | |
| FBS | Gemini Bio- Products | 100-106 | |
| Opti-Mem | Invitrogen | 31985-070 | |
| Collagen | BD | 354231 | |
| Microscope with Live Cell chamber & Automated XY stage controller | Olympus | Olympus 1X81 | |
| Environmental control chamber | Neue | Neue Live Cell Chamber | Ours has a custom built rectangular glass plate top for appropriate optics through the top of the chamber. The rectangular shape accommodates multi-well plates used in many of our experiments. |
| Automated XY stage | Prior | Prior Proscan | This allows precise return to multiply selected XY positions during time lapse microscopy. |
| Camera | Hamamatsu EM camera C9100 | ||
| Software | Typically purchased through microscope vendor such as Olympus | Slide Book 5 |
References
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