Apoptotic और autophagic प्रेरण के एक उपन्यास सिंथेटिक मानव स्तन adenocarcinoma और Tamoxifen साथ neuroblastoma कोशिकाओं में सी 1 7 deoxypancratistatin के अनुरूप द्वारा संवर्धन
Summary
हम देशी pancratistatin के रूप में तुलनीय विरोधी कैंसर गतिविधि के साथ pancratistatin का एक उपन्यास एनालॉग संश्लेषित है, दिलचस्प है, tamoxifen के साथ combinatory उपचार noncancerous fibroblasts पर न्यूनतम प्रभाव के साथ लक्षित mitochondrial द्वारा एक apoptotic और autophagic प्रेरण में कठोर वृद्धि झुकेंगे. इस प्रकार, tamoxifen के साथ संयोजन में JCTH-4 एक सुरक्षित विरोधी कैंसर चिकित्सा प्रदान सकता है.
Abstract
स्तन कैंसर महिलाओं के बीच उत्तरी अमेरिका में सबसे आम कैंसर में से एक है. विकिरण सहित कई मौजूदा विरोधी कैंसर उपचार, डीएनए की क्षति के माध्यम से apoptosis को उत्पन्न करते हैं. दुर्भाग्य से, इस तरह के उपचार के कैंसर की कोशिकाओं को गैर चयनात्मक हैं और सामान्य कोशिकाओं में इसी तरह की विषाक्तता का उत्पादन. हम प्राकृतिक यौगिक pancratistatin के (पीएसटी) के द्वारा कैंसर की कोशिकाओं में apoptosis के चुनिंदा शामिल की सूचना दी है. हाल ही में, एक उपन्यास पीएसटी अनुरूप, सात deoxypancratistatin (JCTH 4) के एक व्युत्पन्न acetoxymethyl C-1, डी Novo संश्लेषण द्वारा उत्पादन किया गया था और यह कई कैंसर कोशिका लाइनों में तुलनीय चयनात्मक apoptosis के उत्प्रेरण गतिविधि दर्शाती है. हाल ही में, भोजी दोनों और कीमोथेरेपी के जवाब में समर्थक अस्तित्व समर्थक मौत तंत्र के रूप में किया गया है दुर्दमताओं में फंसा है. Tamoxifen (टीएएम) हमेशा कई तरह के कैंसर में अस्तित्व भोजी की प्रेरण का प्रदर्शन किया है. इस अध्ययन में, अकेले और टीएएम साथ संयोजन में JCTH-4 की प्रभावकारिता मानव स्तन CANCE में कोशिका मृत्यु को उत्पन्न करने के लिए(MCF7) r और neuroblastoma के (एसएच SY5Y) के कोशिकाओं मूल्यांकन किया गया था. अकेले टीएएम भोजी प्रेरित किया, लेकिन तुच्छ कोशिका मृत्यु जबकि अकेले JCTH 4 भोजी की कुछ शामिल apoptosis की महत्वपूर्ण शामिल हुई. दिलचस्प है, combinatory उपचार apoptotic और autophagic शामिल में भारी वृद्धि मिले. हम मिश्रित समय चूक माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर उपचार के साथ समय पर निर्भर MCF7 कोशिकाओं में morphological परिवर्तन प्रेरित भोजी – टीएएम के दौर से गुजर, JCTH-4-प्रेरित apoptosis और भोजी, और त्वरित कोशिका मृत्यु पर नजर रखी. हम इन यौगिकों का प्रदर्शन किया है इन कैंसर कोशिकाओं में mitochondrial लक्ष्यीकरण द्वारा प्रेरित apoptosis / भोजी. महत्वपूर्ण बात, इन उपचार noncancerous मानव fibroblasts की अस्तित्व प्रभावित नहीं किया. इस प्रकार, इन परिणामों से संकेत मिलता है कि JCTH-4 टीएएम के साथ संयोजन में स्तन कैंसर और neuroblastoma कोशिकाओं के खिलाफ एक सुरक्षित और बहुत शक्तिशाली विरोधी कैंसर चिकित्सा के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है.
Protocol
Discussion
पीएसटी और इसी तरह यौगिकों विरोधी कैंसर गुण 11-15,21 है दिखाया गया है. हम पहले से प्राकृतिक पीएसटी को सूचित किया है mitochondria के कैंसर की कोशिकाओं को, जो जिससे apoptogenic 12,14 कारकों की रिहाई से apoptosis लाती में चुनिंदा…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के शूरवीरों कोलंबस अध्याय 9671 (विंडसर, ओंटारियो), और एक CIHR फ्रेडरिक Banting और चार्ल्स सर्वश्रेष्ठ कनाडा ग्रेजुएट डेनिस माँ के लिए सम्मानित किया गया छात्रवृत्ति के द्वारा समर्थित किया गया है. आप उनकी सहायता के लिए समय चूक माइक्रोस्कोपी साथ रॉबर्ट हॉज और एलिजाबेथ Fidalgo डा सिल्वा के लिए धन्यवाद. आप से केटी Facecchia तक समय चूक माइक्रोस्कोपी वीडियो संपादन के लिए धन्यवाद. हम भी इस पांडुलिपि की महत्वपूर्ण समीक्षा के लिए Sudipa जून चटर्जी और फिलिप Tremblay धन्यवाद देना चाहूंगा. इस काम केविन Couvillon जो 2010 में कैंसर के खिलाफ अपनी लड़ाई हार की स्मृति में समर्पित है.
Materials
| Material Name | Company | Catalogue number |
| SH-SY5Y cell line | ATCC | CRL-2266 |
| Dulbecco’s Modified Eagles Medium F-12 HAM | Sigma-Aldrich | 51448C |
| Fetal bovine serum | Gibco BRL | 16000-044 |
| MCF7 cell line | ATCC | HTB-22 |
| RPMI-1640 medium | Sigma-Aldrich | R 0883 |
| Apparently normal human fetal fibroblast cell line (NFF) | Coriell Institute for Medical Research | AG04431B |
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium, High Glucose medium | Thermo Scientific | SH30022.01 |
| Tamoxifen citrate salt | Sigma-Aldrich | T9262 |
| 35 mm glass bottom culture dishes | MatTek | P35G-014-C |
| Leica DMI6000 B inverted microscope | Leica Microsystems | N/A |
| Hoechst 33342 dye | Molecular Probes | H3570 |
| Leica DM IRB inverted fluorescence microscope | Leica Microsystems | N/A |
| Annexin V AlexaFluor-488 | Invitrogen | A13201 |
| Trypan Blue solution | Sigma-Aldrich | T8154-20ML |
| Haemocytometer | Fisher Scientific | 267110 |
| WST-1 reagent | Roche Applied Science | 11644807001 |
| Wallac Victor3 1420 Multilabel Counter | PerkinElmer | 1420-011 |
| Tetramethylrhodamine methyl ester (TMRM) | Gibco BRL | T-668 |
| Glass tissue grinder | Fisher Scientific | K8885300-0002 |
| BioRad protein assay | Bio-Rad Laboratories | 500-0001Bottom of Form |
| Amplex Red | Invitrogen | A12222 |
| Horseradish peroxidase (HRP) | Sigma-Aldrich | P8125 |
| SpectraMax Gemini XPS | Molecular Devices | 3126666 |
| Anti-LC3 antibody raised in rabbit | Novus Biologicals | NB100-2220 |
| Anti-mouse HRP-conjugated secondary antibody | Abcam | ab6728 |
| Anti-rabbit HRP-conjugated secondary antibody | Abcam | ab6802 |
| Chemiluminescence peroxidase substrate | Sigma-Aldrich | CPS160 |
| Monodansylcadaverine | Sigma-Aldrich | 30432 |
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