인간 유방 선암과 Tamoxifen과 Neuroblastoma 셀의 7-deoxypancratistatin의 소설 합성 C-1 아날로그에 의한 Apoptotic 및 Autophagic 유도의 향상
Summary
우리는 네이티브 pancratistatin 같은 비교 안티 – 암 활동과 pancratistatin의 소설 아날로그를 합성했습니다, 흥미롭게도, tamoxifen과 조합 치료 noncancerous 섬유아 세포에 대한 최소한의 효과와 대상 mitochondrial에 의한 apoptotic 및 autophagic 유도의 급격한 향상이 나왔고. 따라서, tamoxifen와 함께 JCTH-4는 안전한 안티 암 치료를 제공할 수 있습니다.
Abstract
유방암은 북미에서 여인 중에 가장 흔한 암 중 하나입니다. 이온화 방사선 등 많은 현재의 안티 – 암 치료, DNA 손상을 통해 apoptosis를 유도. 불행히도, 이러한 치료는 암세포가 아닌 선택이며, 정상 세포에서 유사한 독성을 생산하고 있습니다. 우리는 천연 복합 pancratistatin (PST)에 의해 암 세포에서 apoptosis의 선택적 유도를보고했습니다. 최근 소설 태평양 표준시 아날로그, 7 deoxypancratistatin (JCTH-4)의 C-아세 톡시 메틸 유도체는 드 노보 합성에 의해 생산과 몇 가지 암 세포 라인에 비교 선택적 apoptosis를 유도하는 활동을 전시했다. 최근 autophagy는 화학 요법에 대한 반응으로 프로 생존과 프로 사망 메커니즘 양쪽으로 malignancies에 연루되었습니다. Tamoxifen (TAM)는 결국에 수많은 암의 프로 생존 autophagy의 유도를 보여주었다. 본 연구에서는 혼자와 TAM와 함께 JCTH-4의 효능은 인간의 유방 cance에서 세포 죽음을 유도하는R (MCF7)과 neuroblastoma (SH-SY5Y) 전지 평가되었다. 혼자 JCTH-4 autophagy의 일부 유도와 apoptosis의 상당 유도를 일으킨 반면 혼자 TAM은 autophagy 유도하지만, 볼품없는 세포의 죽음. 흥미롭게도, 조합 치료 apoptotic과 autophagic 유도의 급격한 증가를 굴복. 우리는 촬영된 현미경을 사용하여 조합 치료 TAM 유발 autophagy를 겪고 MCF7 세포에서는 시간 의존 형태학의 변화, JCTH-4-유도된 apoptosis와 autophagy 및 가속 세포 죽음을 모니터링. 우리는이 암 세포의 mitochondrial 타겟팅을 사용하여 apoptosis / autophagy를 유도하기 위해 이러한 화합물을 증명하고있다. 중요한 것은 이러한 치료 noncancerous 인간 섬유아 세포의 생존에 영향을주지 않았다. 따라서 이러한 결과는 JCTH-4 TAM과 결합된이 유방암과 neuroblastoma 세포에 대한 안전하고 매우 강력한 항정 암 치료로 사용될 수 있음을 나타냅니다.
Protocol
Discussion
PST 및 유사 화합물은 안티 – 암 속성에게 11-15,21을 가지고 보여왔다. 우리는 이전에이를 apoptogenic 요인 12,14의 릴리스에 의한 apoptosis를 유도 암세포에 선택적으로 mitochondria를 불안정하게하는 자연 PST를보고했습니다. 그것은 가능성이 높습니다 그 같은 메커니즘을 통해 JCTH-4 막으로, JCTH-4 (TMRM 염색법 (그림 5A)와 볼, 그리고 SH-SY5Y 세포 격리 mitochondria의 ROS의 생성을 증가…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 콜럼버스 장 9671 (윈저, 온타리오), 그리고 CIHR 프레더릭 들소와 데니스 엄마에게 수여 찰스 베스트 캐나다 대학원 장학금의 기사에 의해 지원되었습니다. 촬영된 현미경으로 그들의 도움 로버트 호지와 엘리자베스 Fidalgo 다 실바에게 감사합니다. 촬영된 현미경 비디오를 편집 케이티 Facecchia에 감사합니다. 우리는 또한이 원고의 비판적 검토를 위해 Sudipa 6월 Chatterjee와 필립 Tremblay 감사드립니다. 이 작품은 2010 년 암 상대로 자신의 연이은 승전 케빈 Couvillon의 메모리에 전념하고 있습니다.
Materials
| Material Name | Company | Catalogue number |
| SH-SY5Y cell line | ATCC | CRL-2266 |
| Dulbecco’s Modified Eagles Medium F-12 HAM | Sigma-Aldrich | 51448C |
| Fetal bovine serum | Gibco BRL | 16000-044 |
| MCF7 cell line | ATCC | HTB-22 |
| RPMI-1640 medium | Sigma-Aldrich | R 0883 |
| Apparently normal human fetal fibroblast cell line (NFF) | Coriell Institute for Medical Research | AG04431B |
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium, High Glucose medium | Thermo Scientific | SH30022.01 |
| Tamoxifen citrate salt | Sigma-Aldrich | T9262 |
| 35 mm glass bottom culture dishes | MatTek | P35G-014-C |
| Leica DMI6000 B inverted microscope | Leica Microsystems | N/A |
| Hoechst 33342 dye | Molecular Probes | H3570 |
| Leica DM IRB inverted fluorescence microscope | Leica Microsystems | N/A |
| Annexin V AlexaFluor-488 | Invitrogen | A13201 |
| Trypan Blue solution | Sigma-Aldrich | T8154-20ML |
| Haemocytometer | Fisher Scientific | 267110 |
| WST-1 reagent | Roche Applied Science | 11644807001 |
| Wallac Victor3 1420 Multilabel Counter | PerkinElmer | 1420-011 |
| Tetramethylrhodamine methyl ester (TMRM) | Gibco BRL | T-668 |
| Glass tissue grinder | Fisher Scientific | K8885300-0002 |
| BioRad protein assay | Bio-Rad Laboratories | 500-0001Bottom of Form |
| Amplex Red | Invitrogen | A12222 |
| Horseradish peroxidase (HRP) | Sigma-Aldrich | P8125 |
| SpectraMax Gemini XPS | Molecular Devices | 3126666 |
| Anti-LC3 antibody raised in rabbit | Novus Biologicals | NB100-2220 |
| Anti-mouse HRP-conjugated secondary antibody | Abcam | ab6728 |
| Anti-rabbit HRP-conjugated secondary antibody | Abcam | ab6802 |
| Chemiluminescence peroxidase substrate | Sigma-Aldrich | CPS160 |
| Monodansylcadaverine | Sigma-Aldrich | 30432 |
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