השתלת מח עצם Murine היא טכניקה בשימוש נרחב ללמוד מנגנונים אימונולוגיים המסדירים את מחלת שתל נגד מארח בבני אדם. היכולת לעקוב אחר דפוסי סחר בתא T<em> In vivo</em> מאפשר ניתוח מפורט של ההתפתחות וההנצחה של תגובות תא T במחלת שתל נגד מארח.
Abstract
מחלת שתל נגד מארח (GVHD) היא המחסום להגבלת השימוש הרחב של השתלת מח עצם כטיפול מרפא למגוון ליקויים המטולוגיות. GVHD נגרם על ידי תאי T alloreactive בשלים הנמצאים במח עצם השתל שהחדירו לתוך הנמען ולגרום ניזק לאיברים מארחים. עם זאת, בעכברים, תאי T יש להוסיף לבידוד מח העצם גורמים GVHD. למרות עבודה מקיפה שנעשתה לאפיין השתלת הודעת T תא תגובות, טכנולוגיית הדמית bioluminescent היא שיטה לא פולשנית כדי לעקוב אחר דפוסי סחר בתאי ה T בגוף חי.
בעקבות קרינה קטלנית, עכברי נמען מושתלים עם תאי מח עצם וsplenocytes מעכברים תורמים. תת תאי T מL2G85.B6 (עכברים הטרנסגניים שconstitutively מבטאים לוציפראז) נכללים בהשתלה. על ידי השתלת תאי T מסוים תת בלבד, אחד הוא מסוגל לעקוב אחר תת תאי T ספציפי בגוף חי,ובהתבסס על המיקום שלהם, לפתח השערות בדבר תפקידו של תת תאי T ספציפי בקידום GVHD בנקודתי זמן שונות. בהשתלת הודעת מרווחים קבועים מראש, עכברי נמען הם צלמו באמצעות מצלמת CCD IVIS Xenogen. עוצמת אור ניתן לכמת באמצעות תוכנת תמונת חיים כדי להפיק תמונה פסאודו צבע המבוססת על עוצמת פוטון (אדום = בעצמה גבוהה, סגולות = עצימות נמוכות).
בין השתלה לאחר 4-7 ימים, עכברי נמען מתחילים להראות סימנים קליניים של GVHD. קוק ואח'.1 פתח שיטת ניקוד ללכמת את התקדמות מחלה המבוססת על מרקם נמען עכברי פרווה, שלמות עור, פעילות, ירידה במשקל, ויציבה. עכברים הם הבקיעו יומיים, ומורדמים כשהם הופכים לגוססים. עכברים בדרך כלל מטופלות הפכו גוססים השתלת 20-30 ימי הודעה.
מודלים עכבריים הם כלים רבים ערך ללימוד אימונולוגיה של GVHD. סלקטיבי השתלת התאים T מסוים תת אלשפל לזיהוי מדוקדק של התפקידים כל תת מחזות. הלא פולשני מעקב תגובות תא T in vivo מוסיף עוד שכבה של ערך למודלים עכבריים GVHD.
Protocol
1. הקרנה קטלנית הנח עד 10 עכברי נמען לכלוב microisolator תואם irradiator לשמש. להקרין ב2 מנות שווות מסכמות מינון כולל (מנה כוללת = 9 cGy למקבלי BALB.B). הקרנה שנייה צריכה להיות 3 שעות אחרי הראשון. הזריקה אמורה להת…
Discussion
הפרוטוקול לגרימת GVHD בעכברים שהוצגו כאן מהווה מודל רלוונטי קליני של GVHD העכברי. הוקם במקור על ידי ברגר ואח'. בשנת 1994, / 6 C57Bl לשילוב מתח BALB.B הוא MHC-תאם, עם תמותת GVHD מתווכת על ידי CD4 CD8 התלוי, גורמי אש T 2, דומים מאוד לתרחיש הקליני השכיח ביותר 3. זה ידוע כי השתלת…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו חייבים תודה לאליס Gaughan ומחמם-ג'ינג וואנג, שמצטיין טכניים תמיכה, הזנה רוחנית ותמיכה מוסרית היו תפקיד מרכזי במחקרים אלו נעים קדימה. מחקרים אלה נתמכו על ידי מענק NIH AI036532 לgah.
Anthony, B. A., Hadley, G. A. Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model. J. Vis. Exp. (66), e3697, doi:10.3791/3697 (2012).