Murine benmargstransplantasjon er en mye brukt teknikk for å studere immunologiske mekanismer som styrer graft-versus-host sykdom hos mennesker. Muligheten til å overvåke T celle trafficking mønstre<em> In vivo</em> Tillater detaljert analyse av utviklingen og opprettholdelse av T celle responser under graft-versus-host sykdom.
Transplantat-mot-vert-sykdom (GVHD) er den begrensende barriere til allsidig bruk av benmargstransplantasjon som kurativ terapi for en rekke hematologiske mangler. GVHD er forårsaket av modne alloreactive T-celler til stede i benmargen pode som er tilført i mottakeren og skade vert organer. Men i mus, må T-celler legges til benmargen inokulatet å føre GVHD. Selv om omfattende arbeid har blitt gjort for å karakterisere T celle responser etter transplantasjon, er bioluminescent bildeteknologi en ikke-invasiv metode for å overvåke T celle trafficking mønstre in vivo.
Etter dødelig bestråling, er mottaker mus transplantert med benmargceller og splenocyttene fra donor mus. T celle undergrupper fra L2G85.B6 (transgene mus som konstitutivt uttrykker luciferase) er inkludert i transplantasjon. Ved kun transplantere visse T-celle-undergrupper, er man i stand til å spore spesifikke T celle undergrupper in vivo,og basert på deres sted, utvikle hypoteser for den rolle spesifikke T celle undergrupper i fremme GVHD ved forskjellige tidspunkter. På forhåndsbestemte intervaller etter transplantasjon, er mottaker mus avbildes ved hjelp av en Xenogen IVIS CCD-kamera. Lysintensiteten kan kvantifiseres ved hjelp levende bilde programvare for å generere en pseudo-fargebilde basert på foton intensitet (rød = høy intensitet, fiolett = lav intensitet).
Mellom 4-7 dager etter transplantasjon, mottaker mus begynner å vise kliniske tegn på GVHD. Cooke et al. 1 utviklet et poengsystem for å kvantifisere sykdomsprogresjon basert på mottakeren mus pels tekstur, hud integritet, aktivitet, vekttap, og holdning. Mus scoret daglig, og avlives når de blir døende. Mottaker mus generelt blitt døende 20-30 dager etter transplantasjon.
Murine modeller er verdifulle verktøy for å studere immunologi GVHD. Selektivt transplantere bestemt T-celle undergrupper allows for forsiktig identifisering av rollene hver undergruppe spiller. Non-invasiv sporing T celle responser in vivo legger et lag av verdi til murine GVHD modeller.
Protokollen for å indusere GVHD hos mus som presenteres her representerer en klinisk relevant modell av murine GVHD. Opprinnelig etablert av Berger et al. I 1994, er den C57BL / 6 i BALB.B belastning kombinasjon MHC-matchet, med GVHD dødelighet mediert av CD4 avhengige, CD8 T effektbokser 2, høyt ligner den vanligste kliniske scenario 3. Det er kjent at transplantasjonen CD8 T-celler alene ikke forårsaker GvHD i denne modellen, men er sykdomsprogresjon signifikant verre når både CD4 …
The authors have nothing to disclose.
Vi står i gjeld til Alice Gaughan og Jiao-Jing Wang som fremragende teknisk støtte, intellektuell input, og moralsk støtte var instrumental i å flytte disse studiene fremover. Disse studiene ble støttet av NIH stipend AI036532 til GAH.
Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |