Apoptoz Erken teşhis hastalıklarının çeşitli risk altındaki hücre popülasyonu tespit edebilir. Burada bir MR-saptanabilir demir oksit nanoparçacık (SPIO) bir erken apoptozis algılama protein (Annexin V) bağlamak için bir yöntem gösterilmektedir. Bu yöntem MR-saptanabilir moleküler görüntüleme probları üretmek için ilgi diğer proteinlere uzatılabilir.
Hücresel apoptoz birçok hastalığın önemli bir özelliktir ve hastalığın klinik belirtileri ortaya çıkmadan bu programlanmış hücre ölümü genellikle oluşur. Onun erken, tersinir aşamalarında apoptoz algılamak için bir araç önleyici veya tedavi edici önlemler kalıcı hasarlardan kalbi korumak için alınabilecek sırasında bir klinik öncesi 'pencere' göze olacaktır. Biz burada MR-saptanabilir kontrast ajan olarak hizmet süperparamanyetik demir oksit (SPIO) nanopartiküller için heyecanla apoptoz erken, tersinir aşamalarında hücrelerine bağlanarak insan Annexin V (ANX), birleşmek için basit ve sağlam bir yöntem sunmaktadır. Konjugasyon yöntemi SPIO ve polisakkarit kabuk karboksil grupları okside SPIO nanopartiküller, bir oksidasyon ile başlar. ANX proteini saflaştırılmış ve sonra bir indirgeyici tampon içinde SPIO ile ANX arasında kovalent etkileşimi kolaylaştırmak için bir sodyum borat çözeltisi ortamda eklenir. Sodyum borohydrid ile son bir azalma adıme redüksiyon tamamlamak üzere gerçekleştirilir ve daha sonra reaksiyon söndürüldü. Konjuge olmayan ANX mikrosantrifüj filtrasyon ile karışım kaldırılır. ANX-SPIO ürünün saflığı boyutu ve dinamik ışık saçılması (DLS) ile teyit edilmektedir. Bu yöntem ek olarak, veya modifikasyonu gerektirmez, çapraz bağlı olarak demir oksit partikül konjugasyon yöntemler veya biyotin etiketli nanopartiküller karşıt polisakkarid SPIO kabuk. Sonuç olarak, bu yöntem, ilgi diğer proteinler konjugasyon uzayabilir basit, güçlü bir yaklaşımı temsil eder.
Annexin V SPIO bağlama için tarif konjugasyon yöntemi Annexin yan zincirli amin gruplarının ve SPIO Nanopartikülün karboksil yarımlar yararlanır. Belirli bir oksitleme-indirgeme adımlarında, bu bileşiklerin kovalan bağlantı elde edilebilir, ve elde edilen fonksiyonlandırılmış nanoparçacık izole edilebilir. Bu yöntem, diğer proteinler ve ilgi nanopartiküller üzere genelleştirilmiş olabilir.
En önemli aşamaları uygun sıcaklıklarda ve yumuşak karışımı ile ger…
The authors have nothing to disclose.
Sağlık, NHLBI National Institutes (RD, PY, PS).
Amerikan Kalp Derneği (JL).
Stanford Üniversitesi, VPUE Grant (JL).
Name of Reagent | Company | Catalogue # |
Superparamagnetic iron oxide | Ocean Nanotech, Inc. | ICK-40-005 |
Doxorubicin | Sigma | D1515-10MG |
SuperMag Separator | Ocean Nanotech, Inc. | N/A |
Zetasizer Nano DLS machine | Malvern, Inc | N/A |