Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Biology

قياس من الانجذاب الكيميائي الخلوي مع ECIS / سيارات الأجرة

doi: 10.3791/3840 Published: April 1, 2012

Summary

نظام ECIS / سيارات الأجرة هو الآلي، في الوقت الحقيقي فحص الكيميائي الذي يقيس الخلوية. في هذا الاختبار، وخلايا تتحرك تحت طبقة من الاغاروز للوصول إلى القطب الهدف. ويتم قياس حركة الخليوي عن ظهور المقاومة إلى 0 ميلان الحالي.

Abstract

حركة الخلوية في استجابة للمؤثرات الخارجية أمر أساسي لكثير من العمليات الخلوية بما في ذلك التئام الجروح، والالتهابات، واستجابة للعدوى. وهناك طريقة شائعة لقياس الكيميائي هو فحص غرفة بويدن، حيث يتم فصل الخلايا وجاذب كيميائي بواسطة غشاء مسامي. كما تهاجر الخلايا من خلال غشاء نحو جاذب كيميائي، كانوا متمسكين السفلي من الغشاء، أو الوقوع في وسائل الإعلام الأساسية، وملطخة في وقت لاحق وعدها بصريا 1. في هذه الطريقة، تتعرض الخلايا لالانحدار 1 جاذب كيميائي حاد وعابر، والتي يعتقد أن يكون تمثيل الفقراء من التدرجات وجدت في الأنسجة 2.

آخر نظام الفحص، وكيل الاغاروز الكيميائي فحص، 3، 4 حركة الخلية عبر تدابير ركيزة صلبة في الفيلم المائية التي تشكل رقيقة تحت طبقة الاغاروز. الانحدار الذي يتطور في الاغاروز ضحلة، ويعتقد أن يكون التطبيقropriate تمثيل طبيعيا التدرجات. ويمكن تقييم الكيميائي عن طريق التصوير المجهري للالمسافة المقطوعة. وعادة ما يتم تكوين كلا من الدائرة بويدن الفحص وفحص تحت الاغاروز كما المقايسات نقطة النهاية.

الآلي ECIS / سيارات الأجرة نظام يجمع بين نهج وكيل الاغاروز مع الكهربائية الاستشعار عن الممانعة الخلوي الركيزة (ECIS) 5 و 6. في هذا الاختبار، وتقع الأقطاب هدف في كل من 8 غرف. وقال كبير لمكافحة قطب كهربائي يعمل من خلال كل دائرة من الدوائر 8 (الشكل 2). يتم تعبئة كل غرفة مع الاغاروز واثنين من الآبار الصغيرة هي قطع في الاغاروز على جانبي القطب الهدف. واحد جيد مليء اختبار سكان الخلية، في حين أن الآخر يحمل مصادر جاذب كيميائي نشرها (الشكل 3). ويمكن استخدام الحالي مرت من خلال نظام لتحديد التغير في المقاومة التي تحدث باسم خلايا تمر فوق القطب الهدف. electrod الخلايا على الهدفه زيادة المقاومة للنظام 6. وبالإضافة إلى ذلك، والتقلبات السريعة في المقاومة تمثل تغيرات في تفاعلات الخلايا التي تحتوي على سطح القطب وتدل على التغيرات الجارية شكل الخلوية. لا يمكن للنظام ECIS / سيارات الأجرة قياس حركة السكان الخلية في الوقت الحقيقي على مدى فترات طويلة من الزمن، ولكن أيضا حساسة بما يكفي للكشف عن وصول خلية واحدة في القطب الهدف.

ومن المعروف Dictyostelium discoidium للهجرة في وجود حمض الفوليك التدرج 7 و 8، ويمكن ردها الكيميائي تقاس بدقة بواسطة ECIS / سيارات الأجرة 9. الكيميائي الكريات البيض، واستجابة لSDF1α والخصوم الكيميائي كما تم قياسه مع ECIS / سيارات الأجرة 10 و 11. ويرد مثال على استجابة الكريات البيض إلى SDF1α في الشكل 1.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. ECIS / سيارات الأجرة الكهربائي التحضير

  1. واستقر لأول مرة سطح الذهب من الصفيف القطب ECIS / سيارات الأجرة (التي تتكون من 8 غرف لكل شريحة) من خلال ما قبل المعالجة العقيمة مع السيستين 10 مليمتر في ماء منزوع الأيونات (DH 2 O) لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة تحت ظروف معقمة.
  2. نضح الحل السيستين من كل غرفة الكهربائي، شطف 3 مرات مع عقيم O 2 درهم، واستبدالها ب 250 ميكرو لتر من متوسط ​​كاملة (RPMI 1640، 10٪ FBS، 25 العازلة HEPES ملم).
  3. ربط الكهربائي مجموعة الاتصال العلامات على صاحب مجموعة أداة لتنفيذ الاختيار الكهربائي.
  4. وسيتم تسليط الضوء الغرف التي ترتبط بشكل صحيح في أخضر على شاشة الكمبيوتر. إذا ما سلط الضوء على الغرف في الحمراء، أنت لم تقم بها وينبغي أن القطب إعادة المتمركزة في مجموعة حامل لإقامة اتصالات لجميع الدوائر.
  5. مرة واحدة وترتبط كل الدوائر، وانقر على زر "الاختيار" في وحدة تحكم البرامج لردعتلغيم المقاومة المبدئية والقيم السعة لكل غرفة. وينبغي أن تكون قيم المقاومة بين 1600 و 2000 أوم، والقيم السعة يجب أن تكون بين 5 و 6 nanofarads لمجموعة غرفة 8. إذا كانت الغرفة ليست ضمن هذه المعايير المقبولة، لا ينبغي أن الدائرة الفردية يمكن استخدامها لجمع البيانات.
  6. قطع القطب من صاحب مجموعة إلى إعداد الفرد غرف الاغاروز. نضح المتوسطة من الغرف وغسل كل غرفة 3 مرات مع معقم O. 2 درهم

2. إعداد الاغاروز الغرف

  1. في العقيمة 15 مل أنبوب البولي بروبلين مخروطي الشكل، وقياس 0.03 غرام من Seakem GTG الاغاروز وإضافة 1 مل العقيمة في برنامج تلفزيوني. استبدال غطاء أنبوب فضفاضة، وإذابة الاغاروز في الأوتوكلاف لدورة دقيقة السائل 2 (ذوبان في الميكروويف ليست فعالة لهذا الفحص). وهذا وقت قصير لا تذوب في أنبوب مخروطي الشكل. لخلايا أقل الحساسية التي لا تحتاج إلى مصل للثقافة، (على سبيل المثال Dictyostelium discoideum) 0.5٪ويمكن إجراء الاغاروز في الوسط المناسب وذابت في الميكروويف. والأوتوكلاف ضروري للخلايا التي تتطلب المصل، كما سيتم هذا التشويه والتحريف إذا ذابت في الميكروويف.
  2. أضف 5 مل من المتوسط ​​RPMI كاملة تحسنت في حمام مائي (55 درجة -60 درجة مئوية) مباشرة إلى الاغاروز الساخنة، وإلى تركيز النهائي من 0.5٪ الاغاروز والماصة صعودا وهبوطا إلى مزيج بلطف.
  3. الماصة 300 ميكرولتر من متوسط ​​الاغاروز ذاب في كل غرفة، استبدال ECIS / سيارات الأجرة تغطية مجموعة والسماح لهلام في درجة حرارة الغرفة.
  4. الماصة المتبقية الاغاروز إلى الحد الأقصى من أنبوب 15 مل لتقييم الاغاروز التبلور. وسيتم أيضا هذه الاغاروز الزائدة يمكن استخدامها في جزء (4): قطع الآبار إلى الاغاروز.

3. بناء وشحذ قنية أداة قطع حسنا

  1. شحذ 2 14 حقنة عادية مقياس نهاية حادة، وذلك باستخدام 5/64 "بت. تدوير غيض من قمة الحفر في كل افتتاح قنية مع تدريبات سرعة بطيئة، مما يجعل بعض لقمة الحفر يخفض حافة الداخلية بأكملها من كل مرجع قنيةening لتشكيل طليعة حاد الشكل (4A).
  2. حفر اثنين من الثقوب من خلال 1 "× 2" س "شبكي (الشكل 4B-D) مع 5/64" ¼ بت في الحفر الصحافة. إدراج كل شحذ قنية قياس 14 لذلك يبرز على مسافة متساوية من خلال كل ثقب شبكي.

4. قطع ويلز في الاغاروز

  1. تعقيم حقنة عادية قياس 14 بواسطة المشتعلة بخفة النصائح. قبل قطع الآبار في غرفة ECIS، والسماح للحقنة عادية ليبرد إلى درجة حرارة الغرفة، أو تهدئة حقنة عادية عن طريق لمس الاغاروز في الحد الأقصى للأنبوب 15 مل. إذا كانت درجة الحرارة من قنية عالية جدا، فإن الاغاروز تذوب كما تقطع غرفة الآبار، مما يجعل الآبار مشوه ومعيب.
  2. محاذاة هذا الزوج قنية فوق النقاط ذهبيتين المحيطة القطب هدف في كل غرفة (الشكل 2C و 5). إدراج قنية عموديا، من دون أي حركة أفقية، ووقف على اتصال لطيف بين قنية وعلى سطح القطب. إزالة بعناية قنية، ومرة ​​أخرى من دون أي حركة أفقية. وضع آبار إضافية للمعارضة التدرجات الممكن أيضا مع إعادة تشكيل رقصة قنية.
  3. نضح بلطف المكونات الاغاروز التي خلفتها قنية، وذلك باستخدام معقم 9 "باستور ماصة، متصلة فراغ الضغط المنخفض، مع فخ الفراغ قبض الاغاروز النفايات.
  4. إضافة 300 ميكرولتر من وسائل الاعلام RPMI كاملة لسطح كل غرفة على 37 درجة مئوية، لمدة 2 دقيقة لتشبع الاغاروز، ثم نضح بلطف وسائل الاعلام من على سطح الأرض والآبار من دون إزعاج الاغاروز.

5. تحميل ويلز

  1. كل بئر غير قادرة على عقد حجم من 7 ميكرولتر. إلى بئر واحدة في كل غرفة، إضافة 7 ميكرولتر من تعليق خلايا. لخلايا تي Jurkat، استخدام 2 X10 7 خلية / مل. وهذه الخلايا تستجيب إلى 7 ميكرولتر من 200 نانوغرام / مل SDF-1α المخفف في RPMI غير مكتملة، الذي يفتقر الى مصل. استخدام وسائل الإعلام كاملة وحده باعتباره تابع سلبيROL.
  2. بعد يتم تحميل الآبار، وعرض كل حجرة من الصفيف مع مجهر مقلوب لضمان خفض جميع الآبار وشغلها بشكل صحيح. يجب أن تكون الخلايا في داخل حدود حدود البئر. إذا تم النظر إليها على حد سواء في الآبار، أو تنتشر خارج حدود الخلية بشكل جيد، ثم شكلت فجوة تحت الاغاروز. لاحظ وضع الآبار غير صحيح حتى، كما لا يمكن أن تفسر بيانات موثوق بها عن تلك الدوائر.

6. جمع البيانات

  1. وضع قطب كهربائي في حامل الصفيف وإعادة ربط منصات الذهب على الصفيف الكهربائي إلى دبابيس بوجو بنابض لحامل وانقر على "الإعداد". وسيتم تسليط الضوء على الآبار التي ترتبط بشكل صحيح في الأخضر. إذا كانت الآبار هي الأحمر، أنت لم تقم بها ويجب أن يكون repositioned القطب في حامل الصفيف.
  2. حدد "8WE1" (8 جيد 1 الكهربائي) من القائمة المنسدلة في لوحة برامج للإشارة إلى تكوين مجموعة.
  3. حدد "تحقق" في مقاولات البرمجياتلوحة رأ لتحديد المقاومة المبدئية والقيم السعة لكل بئر. يجب أن تكون قيم المقاومة بين 1600 و 2000 أوم، في حين أن القيم السعة يجب أن تكون بين 5 و 6 nanofarads.
  4. تحديد الترددات متعددة لقياس المقاومة عند ترددات عدة. هناك خيار لتخصيص الترددات، أو باستخدام مجموعة من الترددات الموصى بها. المعيار اكتساب تردد عدة إعدادات التقاط البيانات على ترددات محددة مسبقا 11 (52،5، 125، 250، 500، 1000، 2000، 4000، 8000، 16000، 32000 و 64000 هرتز) بمعدل 8 آبار / دقيقة. ويمكن أيضا أن الفاصل الزمني بين القياسات تخصيصها. جمع بيانات متعددة تردد يسمح لتحليل، مقاومة المقاومة والسعة،. جمع قيم المقاومة عند 4000 هرتز يكفي عادة للدراسات الثدييات الكيميائي خلية، ولكن ترددات إضافية يمكن أن توفر المعلومات في سياقات أخرى 12،13.
  5. يمكن تعيين مجموع مدة التجربة، على اليد اليمنىيمكن وقفها لوحة، أو التجربة يدويا، بالنقر على "إنهاء" مرة واحدة قد أنتجت خلايا المقاومة التي تدل على وصوله الى القطب. الوقت الذي يستغرقه للخلايا للوصول الى القطب يعتمد على نوع من الخلايا المستخدمة.
  6. انقر على زر "ابدأ" لبدء عملية جمع البيانات.

7. إدارة البيانات

  1. على الرغم من أن يمكن تصدير البيانات إلى Excel، برنامج 1600R ECIS، الذي يصاحب نظام ECISθ هو الأسلوب الأكثر فعالية لتحليل ECIS / بيانات سيارات الأجرة.
  2. تحليل البيانات والبرمجيات شريط الأدوات يحتوي على أزرار الراديو Z، R، وجيم هذه تحديد ما إذا كان رسم مقاومة، مقاومة، أو السعة، على التوالي، على المحور الرأسي ضد محور س (الوقت المنقضي).
  3. وبأكبر قدر من الكفاءة عرض ECIS / سيارات الأجرة البيانات والمقاومة على مر الزمن في 4000 هرتز. التقلبات السريعة في المقاومة، أو microtransients (الشكل 1)، هي دليل على حركة الخلوية على قطب كهربائي. تجميع، سص binning نقاط البيانات بحيث يتم رسوم بيانية ليست كل النقاط، لا ينصح لECIS / سيارات الأجرة، لأنه سوف microtransients المتوسط ​​للخروج من البيانات.
  4. مرة واحدة أحرز الرسم البياني مع برنامج ECIS1600R، ويمكن تصديره عن طريق اختيار "رسم بياني للتصدير" من القائمة ملف، وحفظ TIF. او. ملف JPG.

8. ممثل النتائج

يشار الخلوية الكيميائي زيادة في المقاومة عند 4000 هرتز. وأشار أيضا إلى وصول الخلايا على القطب الهدف من ظهور التقلبات السريعة في المقاومة ودعا microtransients، أو micromotion كما هو موضح في وآخرون مقابل. آل.، 2009 (الشكل 1) 14. يشار إلى نتيجة سلبية من قبل متسقة، أو انخفاضا طفيفا، في المقاومة عند 4000 هرتز، كما رأينا في الحمراء في الشكل 1. غياب microtransients هو أيضا علامة على عدم وجود خلية لحركة القطب. الزيادة في المقاومة الموالية مباشرةportional إلى عدد الخلايا التي تعبر القطب 10. ويمكن إضافة ريتوكسيماب محددة لجاذب كيميائي أو السموم تتداخل مع مستقبلات بروتين G الديناميكي منع الكيميائي 11.

الشكل 1
الشكل 1. تعرضت الكيميائي من الإنسان خلايا تي Jurkat ردا على SDF1α. الإنسان خلايا تي Jurkat (2.0x10 6 خلية / مل) إلى الانحدار من 1α، قوات الدفاع الذاتى (ابتداء من تركيز 100 نانوغرام / مل) أو RPMI 1640 كوسيلة لمراقبة سلبية. ورسوم بيانية للمقاومة التطبيع في 4000 هرتز. انتقل الإنسان Jurkat الخلايا التائية ردا على 1α، قوات الدفاع الذاتى، كما يدل على ذلك زيادة في المقاومة وmicrotransients، في حين كان ينظر أي تحرك مع التعرض لRPMI 1640.

الشكل 2
الشكل 2. رأي كبار من ECIS / سيارات الأجرة الكهربائي withouتي الاغاروز. وتتألف كل قطب كهربائي ECIS / سيارات الأجرة من 8 غرف فردية. كل غرفة تشترك في قطب كهربائي كبير (أ)، وتحتوي على قطب كهربائي هدف فردي (ب). كل غرفة لديها أيضا الدوائر الذهب 2 (ج)، والتي تستخدم كمرشد عندما قطع الآبار في الاغاروز مع حقنة عادية. المربعات الذهب (د) هي منصات الاتصال التي تتصل دبابيس بوجو من أجل تطبيق الحالي ميلان إلى القطب. الأقطاب الهدف الفردية في كل الدوائر مع قطب كهربائي أكبر عداد (ه).

الشكل (3)
الشكل 3. يتم قطع بئرين في كل غرفة الاغاروز مملوءة. عند إضافة جاذب كيميائي واحد إضافة إلى أنه ينشر لإنشاء التدرج في الاغاروز، وفقا لأعلى تركيز من chemoattract الأقرب إلى جاذب كيميائي جيد. الخلايا السفر تحت الاغاروز نحو تركيزات أعلى من جاذب كيميائي ويمكن أن تمر عبر القطب الهدف. كماالخلايا عبر القطب الهدف، وسجلت زيادة في المقاومة من خلال برنامج ECIS 1600R.

الشكل 4
الشكل 4. إدراج اثنين من حقنة عادية قياس 14 في شبكي. أ) B 5/64 "مثقاب يستخدم لزيادة رأس قنية.) يجب أن يتم حفر اثنين من الثقوب في شبكي لاستيعاب حقنة عادية عيار 14 وفقا للتخطيط لقطة. ج) استخدام الصحافة الحفر للتأكد من الثقوب متعامدة إلى السطح pleixglass. D) يتم إدراج اثنين من حقنة عادية من خلال شحذ شبكي "¼، 2 مم وبصرف النظر (تقاس من الحواف الداخلية). تندس بعناية هذه حقنة عادية شحذ إلى الاغاروز لقطع الآبار.

الشكل 5
الشكل 5. التوفيق بين حقنة عادية مع نقاط الذهب في ECIS / سيارات الأجرة غرفة. لخفض الآبار، ويجب أن حقنة عادية شحذأن تكون متمشية مع نقاط الذهب المرافقة القطب الهدف على الجزء السفلي من الغرفة ECIS / سيارات الأجرة. ينبغي أن تدرج في حقنة عادية عموديا، من دون أي حركة أفقية، وإزالتها في نفس الطريقة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

خصائص رواية للفحص ECIS / سيارات الأجرة وتشمل قدرتها على أتمتة عملية جمع البيانات في الوقت الحقيقي وخلايا الاستجابة للجاذب كيميائي. في حين أن تطبيق معظم شائعا لهذه التكنولوجيا هو قياس الاستجابات الخلوية لالتدرجات الكيميائي الفردية، أو إلى التدرجات تتكون من خليط من ناهضات الكيميائي والخصوم، والنهج ECIS / سيارات الأجرة هي أيضا قابلة للتغير إلى هذه التكوينات التي يمكن أن تكون مفيدة جدا في تقييم الاستجابة الخلوية. هناك أدلة قوية على أن تداخل أو تدرجات متسلسلة يمكن أن تؤثر في السلوكيات الخلوية بطرق جديدة. وعلاوة على ذلك، فمن المرجح أن هذه التدرجات أكثر تعقيدا هي القاعدة في الموقع 12 و 13.

يمكن للفحص ECIS / سيارات الأجرة تمكين نمذجة هذه التكوينات الانحدار مختلف بطرق غير ممكن مع غيرها من التكنولوجيات. على سبيل المثال، عن طريق إضافة آبار إضافية، يمكن للمرء أن توزيع اتجاه زradient (ق) في ما يتعلق بشكل جيد الخلية والقطب الهدف. ومن الممكن أيضا لتكوين فحص لوضع الخلايا في واحدة من الآبار كمصدر لعوامل الانجذاب الكيميائي.

عند إعداد مقايسة، فمن المهم للحفاظ على الماء كاملة من الجل الذي يعلو هدف والأقطاب الكهربائية العداد في كل غرفة، وإلى خفض الآبار التي لها علاقة صحيحة المكانية إلى القطب الهدف. وعلاوة على ذلك، في الجزء السفلي من خلية يحتاج أيضا لتكون متجاورة مع طبقة رقيقة من السائل الذي يشكل تحت طبقة الاغاروز، بل هو في هذا الفيلم أن الخلايا ستتحرك ردا على التدرج الفوقية. للقيام بذلك، يجب على المرء أن نضح كل من المكونات الاغاروز دون أن تترك وراء شظايا هلام. ويمكن إزالة قطع المكونات الاغاروز من قبل قنية إنشاء نفق بين بئرين، التي لديها تأثير تشويه التدرج والسماح للخلايا على التحرك بحرية عبر القطب الهدف. فمن الأهمية بمكان أن الضغط فراغ تستخدم لآسيا والمحيط الهادئغاضب المكونات هلام منخفض لتجنب تعريض سلامة جيد الاغاروز.

لقد وجدنا أن الاختلافات في النسبة المئوية للالاغاروز المستخدمة في هلام يمكن التفريق الخلايا التي تعبر عن العيوب هيكل الخلية من البرية من نوع الخلايا، مما يوحي بأن ويمكن استخدام هذا التلاعب لاستجواب القوى التي يمكن ان تمارس على خلايا بيئتهم. إذا كان جل يجفف خلال الثقافة، وسوف تحدث التغييرات التي تؤثر على النتائج التجريبية، بما في ذلك زيادة نسبية في صلابة هلام التي من شأنها أن تبطئ حركة الخلايا وزيادة في تركيز المذاب الذي من شأنه أن يقلل مجموع مقاومة النظام.

الفحص متوافق مع قياس حركة بواسطة الكريات البيض وأنواع الخلايا الأخرى التي لا تسمح تدفق التيار من خلال خلايا الجسم. هذه ليست سمة عالمية من الخلايا: الخلايا العصبية، وبعض الخلايا الظهارية (على سبيل المثال) يمكن أن يحيل الحالية من خلال خلايا الجسم، وسوف تنتج وبالتالي أقل بكثير valu مقاومةوفاق لكل خلية على حدة.

في حين تم تعريفها على وجه التحديد هذه المناهج للكشف عن الاستجابات الخلوية لالتدرجات الكيميائي، فمن السهل أن نتصور الفحص كما ينطبق بالمثل على دراسات أجريت على خلايا سرطانية، والاشارات خارج الخلية التي تعزز النقيلي حركة الخلية. وعلاوة على ذلك، هناك مجموعة تكوينات إضافية التي يمكن استخدامها في دراسات أخرى تفاعل الخلايا الركيزة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ديفيد KNECHT ومايكل وينز لديها براءات الاختراع الصادرة للتكنولوجيا ECIS / سيارات الأجرة، والتي كما تم الترخيص من جامعة كونيكتيكت في شركة التطبيقية، الفيزياء الحيوية

Acknowledgments

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (ES07408 وEB00208).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
ECIS Zθ Applied Biophysics www.biophysics.com/prodducts_Ecisz0.php
ECIS Electrode Array Applied Biophysics 8W Chemotaxis www.biophysics.com/cultureware.php
Seakem GTG agarose BioWhittaker 50070
RPMI1640 Cellgro 10-040
HyClone Fetal Bovine Serum Thermo Fisher Scientific, Inc. SH300703
Penicillin/Streptomycin MP Biomedicals 1670049 Penicillin 5,000 IU/ml; Streptomycin 5 mg/ml
HEPES Buffer MP Biomedicals 1688449 1M solution, cell culture grade
14 Gauge stainless steel Cannula (2) 4 inch General Supply 5-8365-1 Blunt point

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Boyden, S. The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes. J. Exp. Med. 115, 453-466 (1962).
  2. Lauffenburger, D. A., Tranquillo, R. T., Zigmond, S. H. Concentration gradients of chemotactic factors in chemotaxis assays. Methods Enzymol. 162, 85-101 (1988).
  3. Nelson, R. D., Quie, P. G., Simmons, R. L. Chemotaxis under agarose: a new and simple method for measuring chemotaxis and spontaneous migration of human polymorphonuclear leukocytes and monocytes. J. Immunol. 115, 1650-1650 (1975).
  4. Newton-Nash, D. K., Tonellato, P., Swiersz, M., Abramoff, P. Assessment of chemokinetic behavior of inflammatory lung macrophages in a linear under-agarose assay. J. Leukoc. Biol. 48, 297-305 (1990).
  5. Giaever, I., Keese, C. R. Monitoring fibroblast behavior in tissue culture with an applied electric field. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81, 3761-374 (1984).
  6. Keese, C. G. I. A Whole Cell Biosensor bsed on Cell-Substrate Interactions. IEEE Engineering in Medicine and Biology Society. 12, 500-501 (1990).
  7. Laevsky, G., Knecht, D. A. Cross-linking of actin filaments by myosin II is a major contributor to cortical integrity and cell motility in restrictive environments. J. Cell. Sci. 116, 3761-3770 (2003).
  8. Condeelis, J., Bresnick, A., Demma, M., Dharmawardhane, S., Eddy, R., Hall, A. L., Sauterer, R., Warren, V. Mechanisms of amoeboid chemotaxis: an evaluation of the cortical expansion. 11, 5-6 (1990).
  9. Hadjout, N., Laevsky, G., Knecht, D. A., Lynes, M. A. Automated real-time measurement of chemotactic cell motility. Biotechniques. 31, 1130-1138 (2001).
  10. Hadjout, N., Yin, X., Knecht, D. A., Lynes, M. A. Automated real-time measurements of leukocyte chemotaxis. J. Immunol. Methods. 320, 70-80 (2007).
  11. Yin, X., Knecht, D. A., Lynes, M. A. Metallothionein mediates leukocyte chemotaxis. BMC Immunol. 6, 21-21 (2005).
  12. Lundien, M. C., Mohammed, K. A., Nasreen, N., Tepper, R. S., Hardwick, J. A., Sanders, K. L., Van Horn, R. D., Antony, V. B. Induction of MCP-1 expression in airway epithelial cells: role of CCR2 receptor in airway epithelial injury. J. Clin. Immunol. 22, 144-152 (2002).
  13. Zudaire, E., Cuesta, N., Murty, V. The aryl hydrocarbon receptor repressor is a putative tumor suppressor gene in multiple human cancers. J. Clin. Invest. 118, 640-650 (2008).
  14. Opp, D., Wafula, B., Lim, J., Huang, E., Lo, J. C., Lo, C. M. Use of electric cell-substrate impedance sensing to assess in vitro cytotoxicity. Biosens. Bioelectron. 24, 2625-269 (2009).
  15. Foxman, E. F., Kunkel, E. J., Butcher, E. C. Integrating conflicting chemotactic signals. The role of memory in leukocyte navigation. J. Cell. Biol. 147, 577-588 (1999).
  16. Heit, B., Tavener, S., Raharjo, E., Kubes, P. An intracellular signaling hierarchy determines direction of migration in opposing chemotactic gradients. J. Cell. Biol. 159, 91-102 (1999).
قياس من الانجذاب الكيميائي الخلوي مع ECIS / سيارات الأجرة
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Pietrosimone, K. M., Yin, X., Knecht, D. A., Lynes, M. A. Measurement of Cellular Chemotaxis with ECIS/Taxis. J. Vis. Exp. (62), e3840, doi:10.3791/3840 (2012).More

Pietrosimone, K. M., Yin, X., Knecht, D. A., Lynes, M. A. Measurement of Cellular Chemotaxis with ECIS/Taxis. J. Vis. Exp. (62), e3840, doi:10.3791/3840 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter