Summary

Glaswolle-Filter für die Konzentration auf Wasserbasis Viren-und Landwirtschaftsorganisation der Zoonose-Erreger

Published: March 03, 2012
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Summary

Glaswolle-Filter wurden verwendet, um auf Wasserbasis Viren durch eine Reihe von Forschergruppen auf der ganzen Welt zu konzentrieren. Hier zeigen wir einen einfachen Ansatz für den Bau von Glaswolle-Filter und demonstrieren die Filter sind auch wirksam bei der Konzentration des wässrigen virale, bakterielle und Protozoen Pathogene.

Abstract

Der erste wichtige Schritt bei der Bewertung Krankheitserreger im Verdacht verunreinigtes Wasser ist die Konzentration. Konzentration Methoden sind in der Regel spezifisch für einen bestimmten Erreger Gruppe, zum Beispiel US-Umweltbehörde EPA-Methode 1623 für Giardia und Cryptosporidium 1, die mehrere Methoden benötigt werden, wenn die Probenahme-Programm zielt auf mehr als einem Erreger-Gruppe bedeutet. Ein weiterer Nachteil der derzeitigen Methoden ist die Ausrüstung kann kompliziert und teuer sein, zum Beispiel die VIRADEL-Methode mit dem 1MDS Patronenfilter zum Konzentrieren Viren 2. In diesem Artikel beschreiben wir, wie Glaswolle-Filter für die Konzentration auf Wasserbasis Krankheitserreger zu konstruieren. Nach Filterelution, ist das Konzentrat zugänglich einer zweiten Konzentration Schritt, wie Zentrifugation, durch Pathogen Nachweis und zur Zählung von kulturellen oder molekularen Methoden gefolgt. Die Filter haben mehrere Vorteile. Die Konstruktion ist einfach und die Filter kann ein gebaut werdenny Größe für die Erfüllung spezifischer Anforderungen Probenahme. Die Filterteile sind kostengünstig, was es ermöglicht, eine große Anzahl von Proben ohne gravierende Auswirkungen auf ein Projektbudget zu sammeln. Große Volumina (einige 100 bis 1000 s L) können je nach der Höhe des Verstopfens von Probe Trübung konzentriert werden. Die Filter sind sehr portabel und mit minimaler Ausrüstung, wie eine Pumpe und Durchflussmesser, können sie im Bereich für die Probenahme fertigen Trinkwasser, Oberflächenwasser, Grundwasser und landwirtschaftliche Stichwahl durchgeführt werden. Schließlich ist Glaswolle effektive Filtration zum Konzentrieren einer Vielzahl von Erreger-Typen so nur eine Methode erforderlich ist. Hier berichten wir über Filter Wirksamkeit bei der Konzentration des wässrigen menschlichen Enteroviren, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum und Vogelgrippe-Virus.

Protocol

1. Vorbereiten der Glaswolle Vor und nach der Herstellung jeder Charge von Filtern, sterilisieren Sie den Arbeitsbereich mit 10% Bleichmittel. Handschuhe anziehen und Kleid. Sterilisieren Sie einen Eimer durch Autoklavieren bei 121 ° C und 15 psi für mindestens 20 Minuten. Legen Sie die Glaswolle in der sterilen Löffel. Tränken Sie die Glaswolle mit Umkehrosmose-Wasser einweichen lassen und für 15 Minuten. Lassen Sie das Umkehrosmose-Wasser aus dem Eimer. Tränken …

Discussion

Glaswolle-Filter wurden von verschiedenen Forscherteams 3,5,6 benutzt worden, um menschliche enteralen Viren aus einer Vielzahl von Wasser-Quellen wie fertig Trinkwasser 7, 8,9 Grundwasser, Oberflächenwasser 10, Meerwasser 11, 12 Abwasser konzentrieren, und 13 landwirtschaftliche Stichwahl. Hier berichten wir über die Filter sind auch wirksam bei der Konzentration des Vogelgrippevirus sowie die bakterielle und Protozoen Erreger Salmonella enterica (Serova…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Wir danken William T. Eckert für das Video erzählt. Die Entwicklung der Glaswolle-Protokoll war ein Teil des Wisconsin Wasser und Gesundheit Testversion für Enteric Risks (WAHTER Study), die von US EPA STAR Stipendium R831630 finanziert. Alaska-Proben wurden von A. Reeves, A. Ramey, und B. Meixell mit finanzieller Unterstützung von USGS gesammelt. Jede Nutzung der Handels-, Produkt-oder Firmennamen ist nur zu beschreibenden Zwecken und stellt keine Billigung durch die US-Regierung.

Materials

Name of reagent or item Company Catalogue number
Hydrochloric acid Fisher Scientific A144-500
Sodium hydroxide Fisher Scientific BP359-212
Phosphate Buffered Saline
Sodium chloride
Potassium phosphate-dibasic
Potassium phosphate-monobasic

Fisher Scientific
Fisher Scientific
Fisher Scientific

BP358-212
BP363-500
BP362-500
Sodium hypochlorite i.e., household bleach The Clorox Co.  
Sodium thiosulfate, anhydrous Fisher Scientific S 475-212
Beef extract, desiccated Becton, Dickinson and Company 211520
Glycine Fisher Scientific G46-500
Oiled sodocalcic glass wool
Or
R-11 unfaced fiberglass insulation
Isover

Johns Manville
Bourre 725 QN


Polypropylene mesh Industrial Netting xN4510
2″x4″ Sch 80 PVC threaded pipe nipple Grainger 6MW35
2″ Sch 40 PVC cap Grainger 5WDW3
Male adapter nylon fitting (1/2″x1/2″) US Plastic Corp. 62178
Sample bottles for eluate- 1 liter Fisher Scientific 03-313-4F
60 mL syringe Fisher Scientific NC9661991
pH strips Whatman 2614 991
Prefilter, Polypropylene, 10 inch cartridge, 10 μm McMaster-Carr 4411K75
Prefilter housing Cole-Parmer S-29820-10

References

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Cite This Article
Millen, H. T., Gonnering, J. C., Berg, R. K., Spencer, S. K., Jokela, W. E., Pearce, J. M., Borchardt, J. S., Borchardt, M. A. Glass Wool Filters for Concentrating Waterborne Viruses and Agricultural Zoonotic Pathogens. J. Vis. Exp. (61), e3930, doi:10.3791/3930 (2012).

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