Summary
צמר זכוכית מסננים שימשו לרכז וירוסים waterborne על ידי מספר קבוצות מחקר ברחבי העולם. כאן אנו מצביעים על גישה פשוטה לבניית צמר זכוכית מסננים ולהפגין המסננים הם גם יעילים ריכוז waterborne ויראליים, גורמי מחלה חיידקיים protozoan.
Abstract
הצעד הראשון מפתח בהערכת רמות פתוגן במים מזוהמים חשד הוא ריכוז. שיטות הריכוז נוטים להיות ספציפית עבור קבוצת פתוגן מסוים, למשל ארה"ב הסוכנות להגנת הסביבה שיטת 1623 עבור Giardia ו Cryptosporidium 1, כלומר מספר שיטות נדרשים אם תוכנית דגימה מכוונת יותר מקבוצה אחת הפתוגן. עוד חיסרון של השיטות הקיימות הוא הציוד יכול להיות מסובך ויקר, למשל שיטת VIRADEL עם מסנן את מחסנית 1MDS לריכוז וירוסים 2. במאמר זה נתאר כיצד לבנות צמר זכוכית מסננים לריכוז פתוגנים waterborne. לאחר elution מסנן, תרכיז הוא נוח לשלב ריכוז 2, כגון צנטריפוגה, ואחריו זיהוי ספירה הפתוגן ועל ידי שיטות התרבות או המולקולרית. מסננים את מספר יתרונות. בנייה קלה את המסננים ניתן לבנות עלניו יורק גודל הדגימה בדרישות ספציפיות. החלקים סינון זולים, כך שניתן לאסוף מספר רב של דגימות ללא קשות להשפיע על תקציב הפרויקט. כרכים מדגם גדול (100s של עד 1,000 ל ') יכול להיות מרוכזים בהתאם בשיעור של סתימת מן העכירות המדגם. המסננים הם ניידים מאוד עם ציוד מינימלי, כגון משאבה מד זרימת, הם יכולים להיות מיושם בשטח של הדגימה שתייה המוגמר, מים עיליים, מי תהום, נגר חקלאי ו. לבסוף, צמר זכוכית סינון יעיל לרכז מגוון סוגי פתוגן זאת רק שיטה אחת היא הצורך. כאן אנו מדווחים על יעילות הסינון ריכוז enterovirus האדם waterborne, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum, וירוס שפעת העופות.
Protocol
1. הכנת צמר זכוכית
- לפני ואחרי ביצוע כל אצווה של מסננים, לחטא את אזור העבודה עם פתרון אקונומיקה 10%.
- לבש כפפות חלוק. לעקר דלי ידי מעוקר ב 121 מעלות C ו-PSI 15 לפחות 20 דקות. מניחים את צמר זכוכית דלי סטרילי.
- להרוות את צמר זכוכית עם מים אוסמוזה הפוכה ולתת לספוג במשך 15 דקות.
- מסננים את המים אוסמוזה הפוכה מן הדלי.
- להרוות את צמר זכוכית עם 1 M HCl ולתת להשרות למשך 15 דקות.
- מסננים את 1 M HCl מדלי.
- שוטפים את צמר זכוכית עם מים אוסמוזה הפוכה.
- מערבבים היטב.
- בדוק את ה-pH בעזרת נייר pH וחזור מים אוסמוזה הפוכה לשטוף עד pH נייטרלי מושגת.
- יוצקים את המים ולשטוף.
- להרוות את צמר זכוכית עם 1 M NaOH ולתת להשרות למשך 15 דקות.
- מסננים את 1 M NaOH מדלי.
- REPEAT אוסמוזה הפוכה לשטוף עד pH נייטרלי מושגת.
- יוצקים את המים ולשטוף.
- במקום דלי, מכונת צמר זכוכית ניתן לבנות, אשר דומה בעיצוב ל מכונת כביסה כוס פיפטה (איור 1).
- כיסוי צמר זכוכית סטרילית לחלוטין עם פוספט שנאגרו מלוחים (PBS) מותאם pH 6.8.
- שימוש בצמר זכוכית מוכן מיד או בחנות ב 4 ° C. זה ניתן לאחסן עד שבועיים. לפני השימוש, יש לוודא pH נייטרלי כפי שהוא יעלה עם הזמן. אם ה-pH אינו נייטרלי, מחדש לשטוף עם פוספט סטרילית שנאגרו מלוחים (pH 6.8).
2. הרכבת מסנן צמר זכוכית
- לקדוח חור 11/16 סנטימטר לתוך כמוסות PVC, חוטים ברז כך ניילון אביזרי גברים מתאם יכול להיות מוברג לתוך כמוסות את. צעד זה נחוץ רק להרכבה 1. לאחר מכן, כובעים יכולים לשמש במשך שנים. החל טפלוןקלטת את הנושאים אביזרי ניילון ולדפוק את כובעי.
- ארוז את צינור PVC עם חתיכות קטנות של צמר זכוכית. השתמש הבוכנה מתכת, כמו שסתום מנוע של מכונית, לארוז חזק. האריזה אינה דורשת כוח רב. לארוז חזק מספיק כדי צמר זכוכית נשאר במקום וערוצי לא יוצרים. עם זאת, לא לארוז כל כך חזק המים לא יכולים לזרום דרך פילטר. כאשר ארוז כראוי, קצב הזרימה של 4 עד 5 ליטר לדקה צריך להיות בר השגה, כאשר המסנן מחובר ברזי מים עם לחצים בין 40-60 psi. עבור גודל של צינור PVC צוין בפרוטוקול זה, כ 85 גרם שטף צמר זכוכית ארז משמש לכל צינור. טרה צינור ריק PVC על איזון העליונה הטעינה ואת חבילת צמר זכוכית עם שטף עד המסה מקטרת מגדיל 85 גרם.
- הכנס רשת פוליפרופילן לתוך כמוסות PVC עם גברים ניילון אביזרי מתאם המצורפת.
- החל סרט טפלון לחלקים הליכי של צינור PVC.
- לדפוק על כמוסות PVC כדי עמ 'PVCIPE ואחד תווית סוף מסנן יבוא, ואת הקצה השני יצוא. זה חשוב לשלב מאוחר יותר elution. איזה סוף מתויג יבוא לא משנה.
- לדחוף 60 מ"ל של פוספט סטרילית שנאגרו מלוחים (pH = 6.8) לתוך מסנן באמצעות קטטר היטה המזרק. עודף ייצא בסוף ההפוך.
- גלישת מסתיים באופן הדוק עם Parafilm כדי למנוע דליפה. מסננים ניתן לאחסן עד 30 יום ב 4 ° C.
3. דגימה
- לעקר צינור המשמש הדגימה על ידי הסירקולציה המחודשת או לטבול פריטים עבור 30 דקות של 0.525% NaClO (כלומר, פתרון של 10% אקונומיקה בית רגיל). בצע זאת על ידי ייבוש פתרון hypochlorite ולנטרל עם thiosulfate נתרן 0.05%, על ידי הוספת 25 מ"ל של המניה 2% נטול מים פתרון thiosulfate נתרן ליטר אחד של מים אוסמוזה הפוכה.
- מים עם pH מדגם גדול מ 7.5, להתאים את ה-pH על בין 6.5 ו 7.0 עם HCl. ריכוז HCl יכול לנוע בין 0.25M ל 1 יג ארבעה ליטר 0.5 מ 'HCl הוא בדרך כלל מספיק עבור שני מדגמים 800 ליטר, תלוי pH הסביבה של מים קיבולת חציצה. להזריק HCl במהלך הדגימה באמצעות משאבת peristaltic או ונטורי (איור 2). להתאים את מהירות המשאבה או פתיחת ונטורי כדי להשיג את ה-pH היעד. למדוד את ה-pH בנקודת היציאה מדגם הקו באמצעות מד pH בתחום.
- השתמש prefilter אם צמר זכוכית כפכפים לסנן מהמים עם עכירות גבוהה. (מפרט prefilter והשיכון שלו נמצאים באינטרנט חומרים הרשימה.) כי גורמי מחלה יכולים להיות מחוברים על ידי חלקיקים לכודים prefilter יש eluted יחד עם מסנן צמר זכוכית (ראה להלן).
- להתאים את קצב הזרימה בין 2 ל 4 ליטר / דקה. כרכים מדגם אופייניים הם בין 200 ל 1500 ליטר.
- נתק את צמר זכוכית המסנן חנות בתוך שקית פלסטיק סטרילית ב 4 ° C עד 48 שעות.
4. Elution
- להדביק צמר זכוכית מסנן הטבעתלעמוד עם סוף יבוא המדגם מצביע כלפי מטה לתוך בקבוק פוליפרופילן. Elute הפוך כיוון הזרימה המדגם.
- לדחוף 80 מ"ל של תמצית בשר בקר סטרילית של 3% מ 0.05 גליצין עם PH של 9.5 לתוך מסנן.
- חכו 15 דקות.
- לדחוף עוד 80 מ"ל של תמצית בשר בקר סטרילית של 3% מ 0.05 גליצין עם PH של 9.5 לתוך מסנן.
- לדחוף יסודית האוויר המסנן עד קצף יוצא של כניסת המסנן.
- להתאים את ה-pH בין 7.0 ל eluate ו 7.5 עם 1 M HCl.
- חנות eluate ב 4 ° C עד 24 שעות או ב -20 מעלות צלזיוס במשך תקופות זמן ארוכות יותר.
- Elute prefilter אם נעשה שימוש. להתיר את החלק העליון של מחסנית הדיור לשפוך את כל המים שיורי בתוך הדיור תוך החזקת prefilter במקום בידיים עטויות כפפות סטריליות.
- הסר את prefilter מהמחסנית הדיור ומכניס אותו 15 "x 6" לשקית חסינת.
- יוצקים 200 מ"ל של תמצית סטרילית בשר בקר 3% ב 0.05 מ 'זlycine עם pH של 9.5 לשקית ולאטום היטב עם מנעול-zip.
- הפוך prefilter בשקית מספר פעמים על מנת להבטיח את פני השטח כולו בא במגע עם תמצית בשר בקר.
- חכו 15 דקות, היפוך מדי פעם מעסה prefilter בשקית.
- פתח את בעלת רוכסן. גריפ שקית סביב prefilter בחוזקה לסחוט כמו תמצית בשר כמה שיותר ולמשוך את prefilter בידיים עטויות כפפות סטריליות.
- יוצקים את eluate תמצית בשר לתוך בקבוק פוליפרופילן.
- להתאים את ה-pH בין 7.0 ל eluate ו -7.5 עם 1M HCl.
- חנות eluate ב 4 ° C עד 24 שעות או ב -20 מעלות צלזיוס במשך תקופות זמן ארוכות יותר. Eluate prefilter ניתן לנתח בנפרד או בשילוב עם פתוגנים eluate צמר זכוכית המסנן.
5. נציג תוצאות
| הפתוגן | עכירות המים רמות (NTU) | Seeded / L כמות B, C, D | שחזור% ± SD 1 | מספר ניסויים בלתי תלויים |
| Enterovirus-poliovirus סבין III | 0.5 | 500 | 81% ± 11 | 7 |
| Enteroוירוסים poliovirus סבין III | 0.5 | 5000 | 67% ± 12 | 8 |
| Enterovirus-poliovirus סבין III | 215 | 500 | 59% ± 32 | 7 |
| Enterovirus-poliovirus סבין III | 215 | 5000 | 38% ± 22 | 6 |
| Enterovirus-poliovirus סבין III | 447 | 500 | 56% ± 18 | 8 |
| Enterovirus-poliovirus סבין III | 447 | 5000 | 63% ± 37 | 8 |
| Cryptosporidium parvum | 0.5 | 5 | 38% ± 14 | 7 |
| Cryptosporidium parvum | 0.5 | 50 | 53% ± 19 | 8 |
| לבכותptosporidium parvum | 215 | 5 | 40% ± 16 | 7 |
| Cryptosporidium parvum | 215 | 50 | 30% ± 6 | 6 |
| Cryptosporidium parvum | 447 | 5 | 33% ± 13 | 8 |
| Cryptosporidium parvum | 447 | 50 | 28% ± 11 | 8 |
| סלמונלה enterica | 0.5 | 5 | 29% ± 24 | 7 |
| סלמונלה enterica | 0.5 | 500 | 56% ± 16 | 8 |
| סלמונלה enterica | 215 | 5 | 32% ± 24 | 7 |
| סלמונלה enterica 215 | 500 | 34% ± 11 | 6 | |
| סלמונלה enterica | 447 | 5 | 34% ± 18 | 8 |
| סלמונלה enterica | 447 | 500 | 31% ± 24 | 8 |
- עכירות Nephelometric היחידה
- Enteroviruses המנויים ידי QPCR כמו עותקים הגנומי / ל '
- ג parvum מנה ידי immunofluorescence כמו שביצים
- ס enterica מנה התרבות כמושבה יוצרי יחידות
1. שולחן זכוכית עם צמר ריכוז turbidities מים שונים וצפיפות הפתוגן.
| הפתוגן | דגימת מים מיקום | סכום seeded / ל ' | % Reco מאוד |
| שפעת העופות H5N2 | Sundi אגם, Anchorage בורו | 2500 | 42.9% |
| שפעת העופות H5N2 | מינטו דירות, פיירבנקס כוכב הצפון בורו | 2500 | 36.7% |
| שפעת העופות H5N2 | Portage Valley, Anchorage בורו | 2500 | 7.8% |
| שפעת העופות H5N2 | פוטר מארש, Anchorage בורו | 2500 | 41.5% |
| שפעת העופות H5N2 | אגם ערבה, יוקון, Koyukuk בורו | 2500 | 15.5% |
- כפי שהיא נמדדת על ידי QPCR עותקים הגנומי / ל '
2. לוח זכוכית צמר ריכוז של וירוס שפעת העופות באמצעות מים חמישה אתרים באלסקה.
les/ftp_upload/3930/3930fig1.jpg "alt =" איור 1 "/>
באיור 1. תרשים של מכונת צמר זכוכית. זה יכול לשמש במקום בדלי, תוך חיסכון בזמן מן השטיפה. הרעיון דומה מכונת כביסה פיפטה מזכוכית.
איור 2. צמר זכוכית סינון עם הזרקת חומצה על ידי משאבת peristaltic. שים לב "T" שם המחבר מציג את צינורות משאבת החומצה לתוך קו מדגם בין ברז מים וצמר פילטר זכוכית. התאמת ה-pH יש צורך רק אם המים שנדגמו יש pH> 7.5.
צמר זכוכית מסננים יעילים ריכוז פתוגנים מן המים עם מגוון רחב של רמות עכירות וצפיפות פתוגן (טבלה 1). כדי לבחון זאת, 20 ליטר מי ברז dechlorinated היה מעורב באדמה יבשים טין טין (0, 1.27, או 2.75 גר '/ ל') כדי להשיג את הרמה הרצויה של עכירות ואז זרע עם פתוגנים בצפיפויות שונות. מיםעבר דרך פילטר צמר זכוכית, פתוגנים את מרוכזות eluate פורטו, וערך זה המונה בחישוב התאוששות אחוזים. כמות של פתוגנים שנזרעו למים, כלומר, את המכנה של חישוב אחוזים התאוששות, נקבע על ידי 1 הזרעת פתוגנים אל eluate שלילית ואז ספירת פתוגנים. Eluate שלילית הוכן על ידי העברת דגימת unseeded 20 ליטר דרך פילטר ואת משחררי. לכימות פתוגנים שנזרעו ב eluate שלילית נמנע הבדלים ספירה הפתוגן העלולות להיגרם כתוצאה מהפרשי מטריקס שנוצרו על ידי מסנן צמר זכוכית. חשיבותו של שלב זה, כאשר לכימות פתוגנים על ידי QPCR נדון Lambertini et al. 3. 20 פקד ליטר מדגם שלילית התרכזה באמצעות סינון צמר זכוכית, כדי לקבוע שלא היו נוכחים פתוגנים יליד שיכול לבלבל את החישוב התאוששות אחוזים. 10 מיקרומטר הנומינלי גודל הנקבוביות prefilter Wמשמש כאשר רמת העכירות היה ≥ 215 NTU.
Poliovirus היה לכמת ידי QPCR בזמן אמת באמצעות ריכוז משני גרעין מיצוי הליכים חומצה primers ו החללית המתואר Lambertini et al. 3. Cryptosporidium parvum היה לכמת בהיקף המדגם הסופי מרוכזת (FCSV) שנוצר על ידי תהליך ריכוז משני poliovirus . שביצים היו דמיינו ידי immunofluorescence (MeriFluor Cryptosporidium & Giardia איתור קיט, מרידיאן מדעי החיים, Inc, Cincinnati, OH). סלמונלה enterica היה לכמת ב FCSV ידי ציפוי על אגר XLD (Remel, Lenexa, KS) ועוד היד נטויה המושבה יוצרי- יחידות.
צמר זכוכית מסננים יעילים ריכוז נגיפי שפעת העופות (טבלה 2). פתוגניות נמוכה שפעת העופות הנגיף (H5N2) היה זרע לתוך המים ממקומות שונים באלסקה התאוששות אחוז מחושב כמתואר abovה. ריכוז משני הליכים חומצות גרעין בוצעו באשר שנגיף הפוליו, נגיף היה לכמת ידי QPCR באמצעות primers ו בדיקה המתוארים Spackman ואח' 4.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
צמר זכוכית מסנני כבר בשימוש על ידי צוותי מחקר מספר 3,5,6 להתרכז וירוסים אנטרי אדם ממגוון רחב של מקורות המים כגון מי שתייה סיים 7, 8,9 מי תהום, מים עיליים 10, מי ים 11, שפכים 12, ו נגר חקלאי 13. כאן אנו מדווחים על המסננים הם גם יעילים ריכוז נגיף שפעת העופות, כמו גם את גורמי מחלה חיידקיים protozoan סלמונלה enterica (serovar Typhimurium) ו Cryptosporidium parvum, בהתאמה. Deboosere et al. גם דיווחו לאחרונה צמר זכוכית ריכוז של וירוס שפעת העופות 14.
המסננים הם יתרון בכך שהם זולים, ניידים מאוד, שימושי במגוון רחב של מטריצות מים, ויעיל לריכוז סוגים רבים של פתוגנים waterborne. הם ניתן לבנות בכל גודל, בהתאם לצורכי מחקר. לאחר חיטוייון, מעטה המסנן לשימוש חוזר.
צמר זכוכית מסננים, לעומת זאת, יש מגבלות. כמו כל שיטה וירוס ריכוז המסתמכת על מדיה טעונים electropositively עבור וירוס ספיחה (למשל, 1MDS מסנן, CUNO בע"מ, Meriden, CT), יעילות הסינון תלויה pH המים הסביבה. במעבדה שלנו בחרנו pH 7.5 כמו ניתוק, שמעליו pH המים כלפי מטה באופן רציף על ידי שאיבה 0.25 M HCl לתוך שורת הקלט המסנן במהלך הדגימה. מי ה-pH גבוה יותר ניתן לדגום ללא התאמה pH, אך במחיר של יעילות מסנן 3. מגבלה נוספת היא חיי מדף. הראינו מסננים המאוחסנים על 4 מעלות צלזיוס במשך שישה שבועות, כי האפקטיביות ריכוז הפתוגן לא לרדת (נתונים שלא פורסמו). עם זאת, פעמים אחסון ארוכות יותר, לא נבדקו כל כך, באופן שמרני, על מנת להבטיח איכות נתונים, אנחנו לא משתמשים מסננים יותר מ -30 יום. בדרך כלל, מסננים נעשים לפי הצורך. עוד מחסום הפוטנציאל בחלק countrieזה הוא קבלת צמר זכוכית מהמקור הצרפתי המצוין ניירות קודמות. לאחרונה, הראינו בידוד פיברגלס רגיל unfaced הוא יעיל באותה מידה, וזה זמינים בחנויות החומרה או שיפוץ הבית (ראה רשימת חומרים באינטרנט).
ניסויים כל, חשוב להפעיל שתי מערכות בקרה, ציוד ריקים כדי להבטיח צמר זכוכית מסננים לא היו מזוהמים במהלך הבנייה, כדי להבטיח התאוששות מלאה מסננים את תוכנן לעבוד. בקרות אלה נחוצים שיטת ריכוז waterborne כל הפתוגן.
באמצעות מסנן צמר זכוכית יכול להיות פשוט כמו הצמדתו ברז ולהפוך את הברז או מסובך כמו דגימת משקעים הנהר העמוס במיקום מרוחק, המחייב משאבות, התאמה pH ו prefilter למנוע סתימת. עבור קבוצת המחקר שלנו, היתרון הגדול של שימוש במסנני זכוכית צמר הוא היכולת לאסוף ולנתח אלפי דגימת מיםעבור פתוגנים של האדם החי, מניב שפע נתונים על התפלגות הפתוגן בסביבה כי לא היה כפי אפשרי עם שיטות יקרות יותר מסובכים 13,15.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
Acknowledgments
אנו מודים ויליאם ט 'אקרט ל המספרת וידאו. פיתוח פרוטוקול צמר זכוכית היה חלק מים ויסקונסין ניסיון הבריאות לסיכונים אנטרי (WAHTER לימוד), במימון המשרד לאיכות הסביבה בארה"ב STAR גרנט R831630. דגימות אלסקה נאספו על ידי א 'ריבס, א ריימי, ו-B Meixell עם תמיכה כספית USGS. כל שימוש בשמות המסחר, המוצר או החברה הוא למטרות תיאוריות בלבד, אינה מעידה על אישור על ידי ממשלת ארה"ב.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Hydrochloric acid |  Fisher Scientific |
A144-500 | |
| Sodium hydroxide | Fisher Scientific |
BP359-212 | |
| Phosphate Buffered Saline Sodium chloride Potassium phosphate-dibasic Potassium phosphate-monobasic | Fisher Scientific |
BP358-212 BP363-500 BP362-500 | |
| Sodium hypochlorite i.e., household bleach | Clorox |
||
| Sodium thiosulfate, anhydrous | Fisher Scientific |
S 475-212 | |
| Beef extract, desiccated | BD Biosciences |
211520 | |
| Glycine | Fisher Scientific |
G46-500 | |
| Oiled sodocalcic glass wool Or R-11 unfaced fiberglass insulation | Johns Manville |
Bourre 725 QN | |
| Polypropylene mesh | Industrial Netting |
xN4510 | |
| 2"x4" Sch 80 PVC threaded pipe nipple | Grainger |
6MW35 | |
| 2" Sch 40 PVC cap | Grainger |
5WDW3 | |
| Male adapter nylon fitting (1/2"x1/2") | US Plastic Corp. |
62178 | |
| Sample bottles for eluate- 1 liter | Fisher Scientific |
03-313-4F | |
| 60 mL syringe | Fisher Scientific |
NC9661991 | |
| pH strips | Whatman, GE Healthcare |
2614 991 | |
| Prefilter, Polypropylene, 10 inch cartridge, 10 μm | McMaster-Carr | 4411K75 | |
| Prefilter housing | Cole-Parmer | S-29820-10 |
References
- US Environmental Protection Agency. Method 1623: Cryptosporidium and Giardia in Water by Filtration/IMS/FA. EPA 815-R-05-002. , (2012).
- Cashdollar, J. L., Dahling, D. R. Evaluation of a method to re-use electropositive cartridge filters for concentrating viruses from tap and river water. J. Virol. Methods. 132, 13-17 (2006).
- Lambertini, E. Concentration of enteroviruses, adenoviruses, and noroviruses from drinking water by use of glass wool filters. Appl. Environ. Microbiol. 74, 2990-2996 (2008).
- Spackman, E. Development of a real-time reverse transcription PCR assay for Type A influenza virus and the avian H5 and H7 hemagglutinin subtypes. J. Clin. Microbiol. 40, 3256-3260 (2002).
- Environment Agency. Optimisation of a new method for detection of viruses in groundwater. Report No. NC/99/40. , Environment Agency, National Groundwater and Contaminated Land Centre. West Midlands, United Kingdom. (2000).
- Vilaginés, P., Sarrette, B., Husson, G., Vilaginés, R. Glass wool for virus concentration at ambient water pH level. Water Sci. Technol. 27, 299-306 (1993).
- Vivier, J. C., Ehlers, M. M., Grabow, W. O. Detection of enteroviruses in treated drinking water. Water Res. 38, 2699-2705 (2004).
- Powell, K. L. Enteric virus detection in groundwater using a glass wool trap. In: Groundwater: Past Achievements and Future Challenges. Sililo, O. , Balkema, Rotterdam. 813-816 (2000).
- Hunt, R. J., Borchardt, M. A., Richards, K. D., Spencer, S. K. Assessment of sewer source contamination of drinking water wells using tracers and human enteric viruses. Environ. Sci. Technol. 44, 7956-7963 (2010).
- van Heerden, J., Ehlers, M. M., Heim, A., Grabow, W. O. Prevalence, quantification and typing of adenoviruses detected in river and treated drinking water in South Africa. J. Appl. Microbiol. 99, 234-242 (2005).
- Vilaginés, P. Round robin investigation of glass wool method for poliovirus recovery from drinking water and sea water. Water Sci. Technol. 35, 445-449 (1997).
- Gantzer, C., Senouci, S., Maul, A., Levi, Y., Schwartzbrod, L. Enterovirus genomes in wastewater: concentration on glass wool and glass powder and detection by RT-PCR. J. Virol. Methods. 65, 265-271 (1997).
- Pathogen losses in surface water runoff from dairy manure applied to corn fields. Borchardt, M. A., Jokela, W. E., Spencer, S. K. American Society for Microbiology General Meeting, New Orleans, LA, , (2011).
- Deboosere, N. Development and validation of a concentration method for the detection of influenza A viruses from large volumes of surface water. Appl. Environ. Microbiol. 77, 3802-3808 (2011).
- Lambertini, E. Virus contamination from operation and maintenance practices in small drinking water distribution systems. J. Water Health. 9, 799-812 (2011).
