במאמר זה אתאר את הליך סינתזה אנזים שונה hydrophobically Nafion immobilization קרום ואיך לשתק חלבונים ו / או אנזימים בתוך קרום ולבדוק הפעילות הספציפיים שלהם.
בעשור האחרון, חלה שפע של אנזימים בקשה ללא יכולת לזוז, התייצב כולל Biocatalysis, biosensors, ותאי דלק ביולוגי. 1-3 ביישומים bioelectrochemical ביותר, אנזימים או האברונים הם משותקים על משטח האלקטרודה עם שימוש של סוג כלשהו של פולימר מטריקס. זה פיגום פולימרי צריך לשמור על האנזימים יציבים ולאפשר דיפוזיה קליל של מולקולות ויונים פנימה והחוצה של מטריקס. רוב פולימרים המשמשים עבור סוג זה של חוסר תנועה מבוססים על פוליאמינים או polyalcohols – פולימרים המחקים את הסביבה הטבעית של האנזימים שהם לתמצת ולייצב את האנזים באמצעות מימן או מליטה יוניים. שיטה נוספת לייצוב אנזימים כרוכה בשימוש micelles, המכילות אזורים הידרופובי שניתן לתמצת לייצב אנזימים. 4,5 בפרט, קבוצת מינטיר פיתחה פולימר micellar מבוסס על Nafion זמינים מסחרית. 6,7 Nafionעצמו הוא פולימר micellar המאפשר דיפוזיה ערוץ בסיוע של פרוטונים קטיונים קטנים אחרים, אבל את micelles וערוצים קטנים מאוד הפולימר הוא חומצי מאוד, בשל שרשרת חומצה sulfonic לוואי, הוא שלילי עבור immobilization האנזים. עם זאת, כאשר Nafion מעורבב עם עודף של הידרופובי מלחי אמוניום אלקיל ברומיד כגון tetrabutylammonium (TBAB), את קטיונים אמוניום הרביעון להחליף את הפרוטונים ולהיות יונים נגד לקבוצות sulfonate על שרשרות פולימר לוואי (איור 1). התוצאה micelles ערוצי גדולים בתוך הפולימר המאפשרים דיפוזיה של מצעים ויונים גדולים הדרושים לתפקוד אנזימטי כגון dinucleotide nicotinamide אדנין (NAD). שונה זה Nafion פולימר נעשה שימוש כדי לשתק הרבה סוגים שונים של אנזימים, כמו גם המיטוכונדריה לשימוש biosensors ותאי דלק ביולוגי. 8-12 מאמר זה מתאר את הליך הרומן עבור ביצוע מיקרופוןellar immobilization פולימרי קרום האנזים שיכול לייצב אנזימים. סינתזה של קרום immobilization micellar האנזים, הליך משתק אנזימים בתוך הקרום, ואת מבחני ללימוד פעילות אנזימטית של אנזים מסוים משותקת מפורטים להלן.
בהליך המתואר, טטרה אלקיל מלחי אמוניום משמשים לשנות Nafion מסחרי ליצור פולימרים micellar שניתן להשתמש בהם כדי לשתק ולייצב אנזימים. מבחני המתוארים הצג את הנוהל הפולימר יכול לשמש כדי לשתק מגוון רחב של אנזימים עם השמירה הגבוהה של הפעילות. אם האנזים עניין יש פעילות נמוכה מאוד או…
The authors have nothing to disclose.
המחברים מודים משרד המחקר של הצי, מועצת הברית סויה, ואת הקרן הלאומית למדע למימון.
Name of the reagent | Company | Catalog number |
Nafion | Sigma-Aldrich | 70160 |
Tetra alkylammonium bromide salts | Sigma-Aldrich | n/a |
Alcohol dehydrogenase | Sigma-Aldrich | A3263 |
Nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) | Simga-Aldrich | N7004 |
Sodium pyrophosphate | Sigma-Aldrich | P8010 |
Phenazine methosulfate (PMS) | Sigma-Aldrich | P9625 |
2,6-Dichloroindophenol (DCIP) | Sigma-Aldrich | D1878 |
Glucose oxidase | Sigma-Aldrich | G7141 |
4-Hydroxybenzoic acid | Sigma-Aldrich | 240141 |
Sodium azide | Sigma-Aldrich | S8032 |
Peroxidase | Sigma-Aldrich | P8375 |
4-aminoantipyrine | Sigma-Aldrich | 06800 |
UV/Vis Spectrophotometer | Thermo | Evolution 260 Bio or Spectronic Genesys 20 |
Vortex Genie | ||
Analytical balance |