Denne protokollen fokuserer på å utnytte den iboende evne stamceller til å ta signalet fra sin omkringliggende ekstracellulær matrix og bli overtalt til å differensiere i flere fenotyper. Dette metoder manuskript utvider vår beskrivelse og karakterisering av en modell utnytte en bilayered hydrogel, sammensatt av PEG-fibrin og kollagen, å samtidig co-differensiere adipose-avledet stilk celler<sup> 1</sup>.
Naturlige polymerer i løpet av årene har fått mer betydning på grunn av sin vert biokompatibilitet og evne til å samhandle med celler in vitro og in vivo. Et område av forskning som holder løftet i regenerativ medisin er kombinatorisk bruk av nye biomaterialer og stamceller. En grunnleggende strategi innen tissue engineering er bruken av tre-dimensjonale stillaset (f.eks decellularized ekstracellulær matrix, hydrogeler, mikro / nano partikler) for regi celle funksjon. Denne teknologien har utviklet seg fra oppdagelsen at celler trenger et substrat hvorpå de kan feste seg, spre seg, og uttrykke sin differensiert cellulær fenotype og funksjon 2-3. Mer nylig har det også blitt bestemt at cellene ikke bare bruke slike underlag for tilhørighet, men også samhandle og ta signaler fra matrisen underlag (f.eks ekstracellulær matrix, ECM) 4. Derfor cellene og stillaser har en gjensidig forbindelse somtjener til å styre vev utvikling, organisering, og ultimate funksjon. Er adipose-avledet stilk celler (ASCs) mesenchymale, ikke-hematopoetic stamceller som finnes i fettvev som kan vise multi-avstamning differensiering og tjene som en lett tilgjengelig kilde til celler (dvs. pre-vaskulær endothelia og pericytes). Vår hypotese er at adipose-avledet stilk celler kan være rettet mot ulike fenotyper samtidig ved å co-dyrkning dem i bilayered matriser 1. Vårt laboratorium er fokusert på dermal sårtilheling. Til dette formålet har vi opprettet en enkelt sammensatt matrise fra de naturlige biomaterialer, fibrin, kollagen, og kitosan som kan etterligne egenskapene og funksjonene til en dermal-spesifikk sårtilheling ECM miljø.
ASCs er godt kjent for sin enkle isolasjon og evne til å skille mot ulike celletyper. Med de teknikkene som beskrives i dette manuskriptet, er vi i stand til å utnytte plastisitet av ASCs ved å utsette disse cellene til flere biomatrices samtidig. Som celler migrere bort fra deres CSM basen og inn i sitt omkringliggende ekstracellulært miljø, cellene ta signalet fra stillaset og kan enten opprettholde "stemness" (kollagen) eller bli overtalt til å differensiere mot vaskulære-og vaskulær-støttende cell…
The authors have nothing to disclose.
SN ble støttet av en postdoktorstilling Grant fra Pittsburgh Tissue Engineering Initiative. Doz støttes av et stipend tildelt fra Genève Foundation.
Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) | Gibco | 14175 | Consumable |
Fetal Bovine Serum | Hyclone | SH30071.03 | Consumable |
Collagenase Type II | Sigma-Aldrich | C6685 | Consumable |
70-μm Nylon Mesh Filter | BD Biosciences | 352350 | Consumable |
100-μm Nylon Mesh Filter | BD Biosciences | 352360 | Consumable |
MesenPRO Growth Medium System | Invitrogen | 12746-012 | Consumable |
L-Glutamine | Gibco | 25030 | Consumable |
CaCl2.2H2O | Sigma | C8106 | Consumable |
T75 Tissue Culture Flask | BD Biosciences | 137787 | Consumable |
Chitosan | Sigma-Aldrich | 448869 | Consumable |
Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 320099 | Consumable |
N-Octanol | Acros Organics | 150630025 | Consumable |
Sorbitan-Mono-Oleate | Sigma-Aldrich | S6760 | Consumable |
Potassium Hydroxide | Sigma-Aldrich | P1767 | Consumable |
Acetone | Fisher Scientific | L-4859 | Consumable |
Ethanol | Sigma-Aldrich | 270741 | Consumable |
Trinitro Benzenesulfonic Acid | Sigma-Aldrich | P2297 | Consumable |
Hydrochloric Acid | Sigma-Aldrich | 320331 | Consumable |
Ethyl Ether | Sigma-Aldrich | 472-484 | Consumable |
8-μm Tissue Culture Plate Inserts | BD Biosciences | 353097 | Consumable |
1.5-ml Microcentrifuge Tubes | Fisher | 05-408-129 | Consumable |
MTT Reagent | Invitrogen | M6494 | Consumable |
Dimethyl Sulfoxide | Sigma-Aldrich | D8779 | Consumable |
Qtracker Cell Labeling Kit(Q Tracker 655) | Molecular probes | Q2502PMP | Consumable |
Type 1 Collagen | Travigen | 3447-020-01 | Consumable |
Sodium Hydroxide | Sigma-Aldrich | S8045 | Consumable |
12-Well Tissue Culture Plates | BD Biosciences | 353043 | Consumable |
Fibrinogen | Sigma | F3879 | Consumable |
Thrombin | Sigma | T6884 | Consumable |
Benztriazole Derivative of Polyethylene | Sunbio | DE-034GS | Consumable |
Tris Buffer Tablet (pH 7.6) | Sigma | T5030 | Consumable |
Centrifuge | Eppendorf | 5417R | Equipment |
Orbital Shaker | New Brunswick Scienctific | C24 | Equipment |
Humidified Incubator with Air-5% CO2 | Thermo Scientific | Model 370 | Equipment |
Overhead Stirrer | IKA | Visc6000 | Equipment |
Magnetic Stirrer | Corning | PC-210 | Equipment |
Vacuum Desiccator | – | – | Equipment |
Particle Size Analyzer | Malvern | STP2000 Spraytec | Equipment |
Water Bath | Fisher Scientific | Isotemp210 | Equipment |
Spectrophotometer | Beckman | Beckman Coulter DU 800UV/Visible Spectrophotometer | Equipment |
Vortex | Diagger | 3030a | Equipment |
Microplate Reader | Molecular Devices | SpectraMax M2 | Equipment |
Light/Fluorescence Microscope | Olympus | IX71 | Equipment |
Confocal Microscope | Olympus | FV-500 Laser Scanning Confocal Microscope | Equipment |
Scanning Electron Microscope | Carl Zeiss MicroImaging | Leo 435 VP | Equipment |
Transmission Electron Microscope | JEOL | JEOL 1230 | Equipment |