Summary
In diesem Artikel wird ein hoher Durchsatz Verfahren zur Synthese von Oligosacchariden und ihre Befestigung an der Oberfläche der Nanopartikel Polyanhydrid zur weiteren Verwendung bei der Ausrichtung der spezifische Rezeptoren auf Antigen-präsentierenden Zellen präsentiert wird.
Abstract
Transdisziplinäre Ansätze unter Einbeziehung Bereichen wie Material-Design, Nanotechnologie, Chemie, Immunologie und müssen genutzt werden, um rational zu entwerfen wirksame Impfstoffe Carriern werden. Nanopartikel-basierte Plattformen können verlängert die Persistenz der Impfstoff-Antigene, die Verbesserung der Immunogenität Impfstoff könnte 1. Mehrere biologisch abbaubare Polymere sind als Impfstoffen Fahrzeugen 1 untersucht, insbesondere Polyanhydrid Teilchen die Fähigkeit zur Freisetzung von stabilen Protein-Antigene bereitzustellen und Antigen-präsentierenden Zellen zu aktivieren und zu modulieren Immunantworten 2-12 gezeigt.
Die molekularen Aufbau von diesen Vakzin-Trägern muss die rationale Auswahl der Eigenschaften von Polymeren sowie den Einbau von geeigneten Zielmittel integrieren. Hoher Durchsatz automatisierter Herstellung von Targeting-Liganden und funktionalisierte Partikel ist ein leistungsfähiges Werkzeug, das die Fähigkeit, ein breites r studieren verbessern wirdAnge von Eigenschaften und trägt zur Gestaltung von reproduzierbaren Impfstoff Abgabevorrichtungen führen.
Die Zugabe von Zielliganden, die durch spezifische Rezeptoren auf Zellen erkannt wurde gezeigt, zu modulieren und Schneider Immunantworten 10,11,13 C-Typ Lektin-Rezeptoren (CLR) sind Mustererkennungsrezeptoren (PRR), die auf der Kohlenhydratgehalt erkennen Oberfläche von Krankheitserregern. Die Stimulation von Immunzellen über CLRs erlaubt eine gute Internalisierung des Antigens und anschließende Präsentation für weitere T-Zell-Aktivierung 14,15. Daher spielen Kohlenhydrat-Moleküle eine wichtige Rolle bei der Untersuchung der Immunantwort, jedoch die Verwendung dieser Biomoleküle leidet oft die mangelnde Verfügbarkeit von strukturell gut definiert und reine Kohlenhydrate. Ein Automatisierungs-Plattform auf iterative Lösung-Phasen-Reaktionen basieren, können eine schnelle und kontrollierte Synthese dieser Moleküle synthetisch herausfordernden mit deutlich niedrigeren bEBÄUDE Block Mengen als herkömmliche Festphasenmethoden 16,17.
Hier berichten wir über ein Protokoll für die automatisierte Lösung-Phasen-Synthese von Oligosacchariden wie Mannose-based Targeting-Liganden mit fluorierten Festphasenextraktion für die Zwischen-Reinigung. Nach der Entwicklung von automatisierten Verfahren, um die Kohlenhydrat-Zielmittel machen, beschreiben wir für ihre Befestigung auf der Oberfläche der Nanopartikel Polyanhydrid Verwendung einer automatisierten Roboter-Einrichtung betrieben werden, wie zuvor LabVIEW 10 beschrieben. Funktionalisierung von Oberflächen mit Kohlenhydraten hat seine Wirksamkeit bei der Ausrichtung der CLRs 10,11 und die Erhöhung der Durchsatzleistung des Herstellungsverfahrens auszugraben die Komplexität mit einer multi-parametrischen Systems verbunden sind, werden von großem Wert (Abbildung 1a) gezeigt werden.
Protocol
1. Hochdurchsatz-Synthese von Kohlenhydraten
- Vor der automatisierten Synthese dimannoside, eine entsprechend geschützte Zuckerdonor, typischerweise Trichloracetimidat, und Akzeptor, vor allem eine Alkenylgruppe fluorierten Alkohol, auf dem Arbeitstisch synthetisiert.
- Ein Programm wurde für die automatisierte Synthese von dimannoside geschrieben. Eine schematische Darstellung der grundlegenden automatisierten Verfahrens ist in 2 dargestellt. In dem Programm, wird sichergestellt, dass vor der Zugabe des Promotors, die Mischung von Donor und Akzeptor für mindestens 30 min gerührt.
- Lösungen des synthetischen Donor, Akzeptor und Trimethylsilyltrifluoromethansulfonat werden in Dichlormethan hergestellt. Toluol und Dichlormethan werden am häufigsten für Glycosylierungen verwendet.
- Außerdem werden die Lösungen der Reagentien für die Schutzgruppenabspaltung der temporären Schutzgruppen in 80% Methanol und 100% Methanol.
- Vor dem Beginn des Programms, sicherzustellen, dass der jeweiIVE Luftfeuchtigkeit im Raum ist 30% oder weniger in der Automatisierung Kammer. Hohe Luftfeuchtigkeit ist schädlich für Glycosylierungsreaktionen.
- Sobald das Programm gestartet wird, überträgt der Roboterarm die Lösungen von Donor und Akzeptor in das Reaktionsgefäß nacheinander. Dann wird die Mischung 30 Minuten lang gerührt.
- Weiter der Roboterarm überträgt 0,2 bis 0,3 Äquivalente Trimethylsilyltrifluoromethansulfonat in die Mischung, typischerweise bei Raumtemperatur obwohl niedrigere Temperaturen wie -20 ° C erreicht werden kann. Das Reaktionsgemisch wird 30 min gerührt.
- Nach 30 min wird die Reaktion gestoppt und ein kleines Aliquot entfernt, um die Reaktion Fortschritt zu überwachen. Wenn nicht abgeschlossen ist, kann die Reaktion fortgesetzt und schließlich die erforderliche Zeit geändert werden kann.
- Sobald die Reaktion abgeschlossen ist, wird das Reaktionsgemisch auf der fluorhaltigen Festphasenextraktion (FSPE) Kartuschen mit C 8 F 17-modifizierten Kieselgel zur Reinigung übertragen.
- Der WagenRippen zunächst mit einer 80% Methanol-Wasser-Gemisch (8 ml), um die Beseitigung der Nicht-Fluorphase Fraktion gewaschen.
- Dann werden die Patronen werden mit 100% Methanol gewaschen, um die gewünschte fluormarkierten Produkt zu erhalten. Wenn zusätzliche Reinigung gewünscht wird, kann die Maschine zu stoppen und das Reaktionsprodukt (en) für die Reinigung durch zusätzliche Maßnahmen entfernt werden.
- Nach der Reinigung Zyklus, verzichtet der Roboterarm Natriummethylat in das Reaktionsgefäß. Die Reaktion wird für 2 Stunden gerührt. Wenn nicht abgeschlossen ist, kann die Reaktion erneut für einen längeren Zeitraum fortgesetzt werden und schließlich die programmierte Zeit erforderlich ist, geändert werden.
- Nach Beendigung der Reaktion wird das Produkt durch FSPE gereinigt und dann Auflösen in wasserfreiem Toluol unterzogen, gefolgt von Verdampfung um Restwasser zu entfernen.
- Anschließend beginnt der Zyklus (von Schritt 6 bis 13) wird wiederholt, bis die gewünschte Kettenlänge für das Zielmolekül erhalten wird.
- Das geschützte Produkt von der Automatisierung erhalten wird, ist then weiter gereinigt und vollständig durch Techniken wie Kernspinresonanz (NMR)-Spektroskopie charakterisiert. Totalentschützung (Entfernung aller verbleibenden Schutzgruppen) der endgültigen Zielmolekül wird dann außerhalb der Automatisierungsplattform der Regel abgeschlossen werden, da sich in der Regel explosives und Palladium. Die endgültige Entschützungsschritt wurde am Tischgerät außerhalb der Automatisierungs-Plattform durchgeführt. Der erste Schritt war Ozonolyse der Doppelbindung in fluorigen Tag durch Oxidation des gebildeten Aldehyd zu einer Carbonsäure, gefolgt. Das Produkt wurde durch Säulenchromatographie gereinigt. Der letzte Schritt war Entschützung Benzylethergruppen durch Palladium-katalysierten Hydrierung. Das Produkt wurde durch Celite-Pad weitergegeben loswerden Palladium auf reine Endprodukt zu bekommen.
2. High-Throughput-Nanopartikel-Oberfläche Funktionalisierung
- High-Throughput-Polymer-Nanopartikel-Synthese und Herstellung erfolgt nach dem gleichen PR durchgeführtotocol und Roboter einrichten beschrieben von Petersen et al 19. Die Copolymer-Systeme für die Herstellung verwendeten Partikel auf Sebacinsäure (SA) und 1,6-Bis (para-carboxyphenoxy) Hexan (CPH), und 1,8-Bis basieren ( para-carboxyphenoxy) -3,6-dioxaoctan (CPTEG) und CPH. Eine schematische Darstellung der Roboter Abscheidungsvorrichtung verwendet wird in 1b dargestellt.
- Nach Nanopartikel Herstellung wird der Halter, die Rohre mit der Nanopartikel-Bibliothek an den linearen Stellantrieb Stufe wieder befestigt werden.
- Zur Befestigung von Kohlenhydraten an der Oberfläche der Teilchen Polyanhydrid, wird ein Amin-carbonsäure-Kupplung 20, bestehend aus zwei aufeinander folgenden Reaktionen durchgeführt.
- Für die erste Reaktion, die Spritze in der ersten programmierbaren Spritzenpumpe mit 10 Äquivalenten (Gl.) (Äquivalente Molekulargewicht Carbonsäure Konzentration auf Partikeloberfläche) aus gefülltem 1-Ethyl-3-(3-Dimethylaminopropyl)-ca.rbodiimide Hydrochlorid (EDC) und 10 eq. Ethylendiamin in einer wässrigen Lösung, während die Spritze in der zweiten programmierbaren Spritzenpumpe mit 12 äq geladen. N-Hydroxysuccinimid (NHS) in wässriger Lösung.
- Mithilfe des LabVIEW-Programm, werden Reagenz Suspensionen von Nanopartikeln in die Bibliothek * hinterlegt.
- Als nächstes wird jede Probe mit Ultraschall behandelt (30 s bei 40 Hz) und der Schlauchhalter ausgewählt ist aus der Roboter-Plattform abgelöst.
- Nanopartikel-Suspensionen sind für 9 h ** mit ständiger Rotation bei 4 ° C inkubiert
- Nach Reaktionszeit abgeschlossen ist, werden Röhrchen zentrifugiert (12000 xg für 5 min) und kehrte in die Roboter-Station, um zwei Waschschritte durchzuführen.
- Zum Waschen bleibt eine Spritze leer und mit dem in den ersten programmierbaren Spritzenpumpe, während die Spritze in der zweiten Spritzenpumpe mit kaltem Wasser gefüllt ist. Der Überstand in jedem Röhrchen wird in die leere Spritze und die zweite Pumpe Ablagerungen kaltem Wasser entzogen.
- Homogenisierung von NanoPartikel-Suspension erfolgt wie in Schritt 2.6 beschrieben. Die Rohre werden dann zentrifugiert (12000 × g für 5 min) und einem zweiten Waschschritt wird durchgeführt, wie in Schritt 2.9 beschrieben.
- Für die zweite Reaktion, werden zwei Schritte Abscheidung verwendet. In der ersten Abscheidungsschritt, 12 eq. EDC mit einer Pumpe und 12 eq geladen. NHS mit der zweiten Pumpe geladen.
- Der zweite Schritt umfasst Abscheidung 10 eq. einer spezifischen Substanz auf den ersten und zweiten Pumpen (dh Galactose, Lactose oder Di-Mannose) *** und eine dritte Pumpe mit 10 eq. Glykolsäure (als Kontrolle verwendet ****).
- Nanopartikel-Suspensionen wird homogenisiert, wie auf Schritt 2.6 beschrieben und inkubiert für 9 h mit ständiger Rotation bei 4 ° C
- Nachdem die Zeit der Reaktion abgeschlossen ist, wird ein Waschschritt durchgeführt, wie in den Schritten 2.8, 2.9 und 2.10 beschrieben.
- Das funktionalisierte Nanopartikel-Bibliothek wird dann in einer Vakuumkammer angeordnet, um für mindestens 2 Stunden trocknen.
- Die funktionalisierten Nanopartikel werden dann CharakterIzed durch Röntgen-Photoelektronen-Spektroskopie und einen hohen Durchsatz Phenol-Schwefelsäure-Test, um die Oberfläche Zusammensetzung und Konzentration des Saccharids jeweils zu bestimmen. Rasterelektronenmikroskopie und dynamische Lichtstreuung werden genutzt, um Partikelgröße, Größenverteilung und Oberflächenladung zu bestimmen.
Anmerkungen: * Deposition Volumen variieren mit der Masse von Nanopartikeln in jedem Röhrchen enthalten.
** Reaktionszeiten bei ersten und zweiten Reaktionen können geändert werden, um die endgültige Saccharidkonzentration einzustellen.
Jedes Saccharid *** werden in Reagenzgläser Abhängigkeit von der gewünschten Gruppe abgeschieden.
**** Für die spezifische Reaktion in dieser Studie für die Befestigung von Kohlenhydraten verwendet wird, wird Glycolsäure als Linker Kontrolle verwendet, da sich dieses Saccharide entschützten Moleküls kovalent verknüpft, die für die weitere Befestigung an Nanopartikeloberfläche zulässt.
3. Repräsentative Ergebnisse
Die FULly geschützt dimannoside in Abbildung 2 dargestellt wurde unter Verwendung der Automation-Plattform. Die synthetisierte Verbindung wurde durch 1 H-NMR in einem VXR 400 MHz Spektrometer unter Verwendung von CDCl 3 als Lösungsmittel enthält. Das NMR-Spektrum ist in 3 gezeigt.
Unter Verwendung des High-Throughput-Nanopartikel Herstellung und Funktionalisierung von Polyanhydrid-Nanopartikel beschrieben, hat Befestigung dimannose, Lactose und Galactose wurden erfolgreich 10, 11 durchgeführt. Mit diesem Aufbau wurden optimalen Reaktionsbedingungen (dh, der Reaktionstemperatur und Zeit) identifiziert gewünschte Funktionalisierung Nanopartikel und Morphologie zu erreichen. Wenn die Reaktion wurde bei 4 ° C statt bei Raumtemperatur, eine Verringerung Nanopartikelaggregation wurde durch SEM beobachtet (Daten nicht gezeigt). Tabelle 1 zeigt repräsentative Ergebnisse der Charakterisierung von funktionalisierten 50:50 CPTEG: CPH Nanopartikel entweder mit Di-Mannose oderLactose, bei 4 ° C synthetisiert Die Daten zeigen einen kleinen Anstieg der durchschnittlichen Durchmesser Nanopartikel aufgrund der Funktionalisierung. Während die nicht-funktionalisierte Nanopartikel einen negativen Zeta-Potential von ca.. -20 MV zeigten die funktionalisierten Partikel ein positives Zetapotential Wert und zeigt erfolgreiche Funktionalisierung der Oberfläche der Nanopartikel. Laktose und Di-Mannose beide neutralen Zuckern, doch, Diamin freien Amingruppen aus dem Ethylen-Linker verwendet werden, um die Saccharide und kann auch verantwortlich der positiven Zeta-Potential.
Die Reaktionszeit ist eine weitere Variable, die sowohl die endgültige Morphologie der Nanopartikel und der Grad der Zucker Anlage erreicht beeinflussen könnten. Durch Einstellen der Reaktionszeit kann die endgültige Zuckerkonzentration an die Nanopartikel angeheftet Oberfläche gesteuert, wie in 4A gezeigt. Wie erwartet, die Konzentration des dimannose auf der Oberfläche von 50:50 CPTEG: CPH-Nanopartikel mit erhöhterdie Gesamtzeit der Reaktion und erreichte ein Maximum nach 18 Stunden. Nanopartikel mit dem 24 Stunden Gesamt-Reaktionszeit funktionalisiert wurden verwendet, um ihre Fähigkeit, auf CLRs Maus aus dem Knochenmark dendritische Zellen (DCs) gezielt zu evaluieren. Durchflusszytometrie wurde verwendet, um die Expression von zwei CL-Rezeptoren (dh, CIRE (CD209, DC-SIGN) und Mannose-Rezeptor (CD206)) nach Stimulation mit nicht funktionalisierten und Lactose und Di-Mannose funktionalisierte Nanopartikel (4B) zu bewerten. Eine höhere Expression der beiden Rezeptoren, die ein Hinweis auf effektive Targeting ist, wurde erhalten, wenn Zellen, die sowohl Lactose und Di-Mannose funktionalisierte Nanopartikel stimuliert wurden. Jedoch zeigten Di-Mannose-funktionalisierten Teilchen eine höhere Expression anzeigt, eine Spezifität dieses Liganden für die Rezeptoren, die untersucht wurden.
| Nanopartikel-Typ | Durchschnittlicher Partikeldurchmesser (nm) | AveWut Particle ζ-Potential (mV) |
| Nicht-funktionalisierte | 162 ± 43 | -20 ± 0,6 |
| Laktose | 235 ± 34 | 26 ± 2,4 |
| Di-Mannose | 243 ± 32 | 30 ± 4,2 |
Tabelle 1. Nanopartikelcharakterisierung. Nicht-funktionalisierte und funktionalisierte wurden durch quasi-elastische Lichtstreuung und Zetapotential Messungen charakterisiert. Partikelgrößen-Daten stellen den Mittelwert ± Standardabweichung (SD) der dynamischen Lichtstreuung Daten in drei unabhängigen Experimenten gesammelt. Zetapotential Daten stellen den Mittelwert ± Standardabweichung von drei unabhängigen Messungen. Änderung des Vorzeichens des Zetapotentials zeigt, dass Zucker war effizient, konjugiert mit dem 50:50 CPTEG: CPH Nanopartikel-Oberfläche.
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Abbildung 1. (A) Grafische Darstellung der Ansatz mit Kohlenhydrat-Funktionalisierung von Nanopartikeln Polyanhydrid und ein Beispiel der funktionalisierten Nanopartikel-Bibliotheken, die mit der beschriebenen High-Throughput-Ansatz konzipiert werden konnte verfolgt. (B) Schematische Darstellung des automatisierten Abscheidungsvorrichtung zur Partikelfunktionalisierung, der aus (i) drei NE 1000 Pumpen besteht verwendet, (ii) ein Roboter-Stufe durch zwei Aktuatoren (Zaber) integriert ist: ein zur Bewegung in x-Richtung und der andere für eine Bewegung in y-Richtung, (iii) eine zweite Roboter mit jeweils zwei benachbarten Gestellen (geeignet für Rohre und Küvetten), bestehend aus drei Aktuatoren, eine für jede Richtung (x, y und z). Die Pumpen und insgesamt fünf Aktuatoren in Reihe geschaltet sind. Stellantriebe, Pumpen werden von einem Computer mit LabVIEW-Software betrieben. Diese Darstellung ist nicht maßstabsgetreu.arge.jpg "target =" _blank "> Klicken Sie hier für eine größere Abbildung zu sehen.
Abbildung 2. Graphische Darstellung des automatisierten iterativen Synthese von Kohlenhydraten am Beispiel Mannose.
3. 1 H-NMR des geschützten dimannoside.
Abbildung 4. (A) Wirkung der Reaktionszeit auf Nanopartikeloberfläche Konzentration von Saccharid. In den gezeigten Daten, 50:50 CPTEG: CPH wurden Nanopartikel mit dimannose zu unterschiedlichen Reaktionszeiten funktionalisiert und die Reaktion wurde bei 4 ° C Der Durchschnitt und Standardabweichung von zwei unabhängigen Experimenten Funktionalisierung gezeigt. (B) Laktose-und Di-Mannose funktionalisierte Nanopartikeleffektiv Ziel-DC-SIGN (CIRE, CD209) und Mannose-Rezeptor (CD206) auf das Knochenmark-abstammenden dendritischen Zellen, wie durch die verstärkte Expression dieser beiden Marker nach Stimulation mit funktionalisierten 50:50 CPTEG gezeigt: CPH Nanopartikel, wenn sie mit der Expression verglichen mit nicht-funktionalisierte Partikel.
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Discussion
Die Wirksamkeit von Kohlenhydraten als Targeting-Agenten, um direkte Interaktionen von Nanopartikeln an Immunzellen wurde bereits 10, 11 gezeigt. Frühere Untersuchungen in unserem Labor haben gezeigt, dass spezifische Zucker an Polyanhydrid Nanopartikel können verschiedene CLR auf Antigen-präsentierenden Zellen (APCs) ausgerichtet sind, wodurch die Aktivierung von Immunzellen, die wichtig sein kann für weitere T-Zell-Aktivierung 10, 11. Um jedoch eine optimale Ausrichtung mehrerer Parameter-wie dem Polyanhydrid Chemie, Größe, Art der Oberfläche von Zucker oder Zucker-Dichte sind zu optimieren und damit Erhöhung des Durchsatzes in dem Herstellungsverfahren der Komplexität ans Licht zu bringen mit einem solchen multi-parametrischen Systems verbunden wird von großem Wert sein. Darüber hinaus ist die Verwendung von funktionalisierten Nanopartikel, wenn von großem Wert zu anderen verwandten Bereichen Forschung, einschließlich der Biosensorik, Enzymimmobilisierung, und den Nachweis von foodbOrne Krankheitserreger.
Durch die Nutzung der beschriebenen Hochdurchsatz-Synthese von Kohlenhydraten, können die Herausforderungen in der reproduzierbaren Synthese von Kohlenhydrat-Moleküle gemildert werden. Automatisierte parallele Reaktionen des gleichen Zucker produzieren können größere Mengen an Material, wie gebraucht. Die bekannten Rollen von Zuckern und Glykokonjugate verbreiten sich schnell. Dennoch ist ein Verständnis der molekularen Mechanismen von Kohlenhydraten in vielen Prozessen, zB Signaltransduktionswege oder zellulären Erkennungs-21, stützt sich auf die einfache und preiswerte Verfügbarkeit von strukturell genau definierten Sacchariden. Schutz / Entschützung Strategien, um die Reaktivität der verschiedenen Hydroxylgruppen für die präzise Steuerung Kettenverlängerung sind die Voraussetzung zur Synthese von Zucker, sind aber mühsam und zeitaufwendig. Oligonukleotide und Oligopeptide werden regelmäßig und effizient durch den Einsatz automatisierter Synthesizer 22, 23 synthetisiert. Eine feste Phase Synthesizer ist ava Eingabefeld steht für Oligosaccharidsynthese 24, leidet aber unter einigen gravierenden Nachteilen: zB große Überschüsse an Bausteinen (5 bis 20 Äquivalenten pro Kupplungsschritt), das Fehlen von einfachen Überwachung der Reaktion Fortschritte, und die inhärente Variabilität der Festphasen-Harze verwendet . Eine neue Lösung-Phasen-Automation-Plattform erfordert jedoch nur 2 bis 3 Äquivalente dieser wertvollen Bausteinen. In dieser Plattform eine Vielzahl von Perfluorierte Marker, wie zB die Alkenyl fluorigen Gruppe, ermöglicht fluorigen Festphasenextraktion (FSPE), um die Zwischenprodukte leicht zu reinigen, von nicht-fluorierten Verbindungen 18, 25, 26. Allerdings, wie hier gezeigt, sind diese Tags nicht entgegen-Phasen-Lösung Glykosylierung und Entschützung Reaktionen in organischen Lösungsmitteln Standard. Auch im Gegensatz zu einem festen Phase automatischen Synthesizer, ermöglicht diese neue Plattform Standard Reaction Monitoring-Strategien wie der Massenspektrometrie (MS) und Dünnschichtchromatographie (TLC) in jedem Stadium.
NHALT "> wie in den Ergebnissen Abschnitt beschrieben, nach dem High-Throughput-Funktionalisierung von Nanopartikeln hier vorgestellten Reaktionsbedingungen (z. B., Reaktionszeit und-temperatur), um eine optimale Nanopartikel Morphologie nach der Funktionalisierung zu erreichen, wurden optimiert. Optimale Reaktionstemperatur kann optimiert werden müssen abhängig von den Eigenschaften des Polymers verwendet werden, um die Nanopartikel (zB Glasübergangstemperatur (T g), Abbauraten) herzustellen. Zum Beispiel bei der Verwendung von Polymeren mit niedrigem Tg (unterhalb der Raumtemperatur), werden die Funktionalisierung Reaktionen müssen bei durchgeführt niedrigen Temperaturen, was der Fall für einige der Polyanhydrid Chemie in unserer Arbeitsgruppe eingesetzt ist. Optimierung des Gesamt-Reaktionszeit für Partikelfunktionalisierung beschäftigt gewünscht wird vor allem, wenn Teilchen der Chemie mit unterschiedlichen Abbauraten zu funktionalisiert werden müssen. Kürzere Reaktionszeiten ideal sein zu Bulk-Materialien Erodieren e funktionalisierenspeziell wenn ein Targeting Zucker zu Drogen-oder Protein-beladenen Partikel gebunden werden muss. Zuckerkonzentration auf Partikeloberfläche kann eine wichtige Variable, um die biologische Leistung dieser Träger zu lenken sein. Die biologische Ergebnis unterschiedlicher Zuckerkonzentration ist ein aktuelles Forschungsgebiet in unseren Labors. Die Verwendung dieser hohen Durchsatz einrichten zu fabrizieren und funktionalisierte Nanopartikel Polyanhydrid ermöglicht die Prüfung von mehreren Variablen schneller als herkömmliche Methoden der Herstellung und Funktionalisierung. Eine wesentliche Einschränkung des hohen Durchsatzes Technik ist die maximale Stückzahl von Teilchen, die erhalten, da es durch die Größe der Behälter, die in den Halterungen zu passen Vorrichtung begrenzt wird ueber: da jedoch die hauptsächliche Verwendung dieser Schaltung ist für das Screening kleinere Größe Batch effizient werden zu diesem Zweck zu verwenden.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
NLBP ist Mitbegründer und hält Beteiligungen in der Kohlenhydrat-Unternehmen LuCella Biosciences, Inc.
Acknowledgments
Die Autoren möchten sich an die US Army Medical Research und Materiel Command danken (Grant # W81XWH-10-1-0806) und die National Institutes of Health (Grant # U19 AI091031-01 und Grant # 1R01GM090280) für finanzielle Unterstützung. BN erkennt die Balloun Professur für Chemie-und Bioingenieurwesen und NLBP Wilkinson erkennt die Professur für Interdisziplinäre Engineering. Wir danken Julia Vela für ihre Hilfe bei der Durchführung der Nanopartikel-Funktionalisierung Experimente.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Motorized XYZ Stage: 3x T-LSM050A, 50 mm travel per axis | Zaber Technologies | T-XYZ-LSM050A-KT04 | |
| NE-1000 Single Syringe Pump | New Era Pump Systems | NE-1000 | |
| Pyrex* Vista* Rimless Reusable Glass Culture Tubes | Corning | 07-250-125 | |
| ASW 1000 | Chemspeed Technologies | ||
| LabVIEW | National Instruments | 776671-35 | |
| SGE Gas Tight Syringes, Luer Loc | Sigma Aldrich | 509507 | |
| XL-2000 Sonicator | Qsonica | Q55 | |
| Mini-tube rotator | Fisher Scientific | 05-450-127 |
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