השרשה ותוך גולגולת Stereotactic<em> בחי</em> הדמית bioluminescent של xenografts גידול במערכת מודל עכבר של multiforme glioblastoma
Summary
אנו מתארים שיטה משולבת להשתלה המדויקת, stereotactic של תאי multiforme glioblastoma אדם לתוך המוח של עכברים בעירום וסידורי עוקבים<em> In vivo</em> הדמיה כדי לפקח צמיחה ותגובה לטיפול בxenografts התוצאה.
Abstract
multiforme glioblastoma (GBM) הוא סרטן מוח ראשוני בדרגה גבוהה עם הישרדות חציונית של 14.6 חודשים בלבד בבני אדם, למרות טיפול, שיטה תלת סטנדרטי המורכב של כריתה כירורגית, הקרנות לאחר הניתוח וכימותרפיה temozolomide 1. גישות טיפוליות חדשות באופן ברור יש צורך לשפר את ההישרדות ואת איכות חיי מטופל. הפיתוח של אסטרטגיות טיפול יעילות יותר יהיה בעזרת מודלים של בעלי חי GBM כי לסכם מחלה אנושית עדיין לאפשר הדמיה סידורית כדי לפקח על גדילת גידול ותגובה לטיפול. במאמר זה, אנו מתארים הטכניקה שלנו להשתלת stereotactic המדויקת של תאי סרטן GBM יו imageable לתוך מוחם של עכברים בעירום וכתוצאה מxenografts גידול שלסכם מאפיינים קליניים עיקריים של GBM 2. שיטה זו מניבה גידולים לשעתק וממוקמות במקומות אנטומיים מדויקים תוך מתן בתחום הדמית vivo bioluminescent סדרתי כדי לפקח על תוךצמיחת גולגולת xenograft ותגובה לטיפולים 3-5. שיטה זו גם נסבלת היטב על ידי בעלי החיים בעלי תחלואת perioperative נמוך ותמותה.
Protocol
Discussion
השיטה של השתלת stereotactic של תאים סרטניים בעכברים המתוארים במאמר זה reproducibly מייצרת גידולים, אשר סביר לסכם דפוס infiltrative ומהיר צמיחה של גליובלסטומה multiforme הקלינית 2, 6-8. טכניקה זו במיוחד היטב מתאימה לניסויי stratifying עכברים באופן שווה לקבוצות טיפול שונות בי גידולים לשעתק ג?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו מודים לד"ר אנדרו הולנדר, שרה דייויס, לי שומן, טים ג'נקינס, וד"ר Xiangsheng שו לסיוע המומחה שלהם. אנו מכירים בתמיכתו של ד"ר אן קנדי. BCB נתמך בהדרכת ביולוגית קרינת גרנט C5T32CA009677. JFD נתמך פרס קריירת Wellcome ורוז למדענים רפואיים (1006792) על. JLB נתמך על עליות המענק (5 R25 CA140116-03). ברצוננו להודות ד"ר סטיב האן עידודו ותמיכה סייעה להפוך את המחקר שלנו אפשרי. אנחנו גם רוצים להודות לאוניברסיטת פנסילבניה Nano-יו ממשק המרכז (NBIC) ודניס ד"ר Discher לעידוד והערותיו מועילות. אנו מכירים במתקן הדמית החיה הקטן (סייף) באוניברסיטת פנסילבניה לשימוש במתקני גרעין MRI ואופטיים / פליטת אור שלהם. טכניקות אלו פותחו כחלק מפרויקטים שנתמכו על ידי המכון הלאומי לבריאות (-NS076548 RC1 CA145075 וK0801).
Materials
| Description | Supplier | Catalogue Number | Comments |
| Digital Just for Mouse Stereotaxic Instrument | Stoelting | 51730D | Stereotactic platform for mouse implantation |
| Ketamine/xylazine | Injectable anesthesia | ||
| Puralube Vet Ointment (ophthalmic) | Amazon.com | To prevent drying of the mouse’s eyes | |
| drill holder for the stereotactic platform | Stoelting | 51681 | |
| Micromotor Electric Drill | Stoelting | 51449 | For drilling through the skull |
| .45 mm carbide drill bit | Stoelting | 514551 | |
| Sterile cotton swabs | Fisher Scientific | 23-400-100 | |
| Glass bead dry sterilizer (Germinator 500) | Braintree Scientific | GER-5287 | To sterilize metal surgical instruments |
| Mouse rectal probe | Braintree Scientific | RET-3-ISO | Compatible with the temperature controller |
| Temperature Controller (TCAT-2DF) | Harvard Apparatus | 727561 | Temperature controller to maintain animal’s temperature during surgery |
| Small heating plate | Harvard Apparatus | 727617 | For use with temperature controller to warm mouse during surgery. The heating plate fits under the mouse on the stereotaxic platform. |
| Disposable Scalpels | BD Bard-Parker | 2015-11 | #10 scalpel |
| 10 microliter syringe | Hamilton | 7635-01 | For injection of tumor cells |
| 30 gauge needles, 1″ long, with flat point | Hamilton | Various | Must be compatible with the 10 μl syringe |
| Nanomite Programmable Syringe Pump | Harvard Apparatus | 704507 | Digital motorized syringe injector for stereotaxic device |
| Cellulose sterile surgical spear sponges | Ultracell | 40410 | To dry the surgical field |
| Bone wax | Ethicon | W31 | To seal the burr hole |
| Tissumend II synthetic absorbable tissue adhesive | Veterinary Products Laboratories | 3002931 | To seal the incision |
| Hot water pump with warming pad | Gaymar | TP-650 | Warms mice in post-operative period |
| IVIS Lumina II | Caliper Life Science | Bioluminescent imager | |
| D-Luciferin potassium salt | Gold Biotechnology | LUCK-1 | Luciferin for bioluminescent imaging |
References
- Stupp, R. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).
- Jacobs, V. L., Valdes, P. A., Hickey, W. F., De Leo, J. A. Current review of in vivo GBM rodent models: emphasis on the CNS-1 tumour model. ASN Neuro. 3, e00063 (2011).
- Shelton, L. M. A novel pre-clinical in vivo mouse model for malignant brain tumor growth and invasion. J. Neurooncol. 99, 165-176 (2010).
- Brehar, F. M. The development of xenograft glioblastoma implants in nude mice brain. J. Med. Life. 1, 275-286 (2008).
- Ozawa, T., James, C. D. Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging. J. Vis. Exp. (41), e1986 (2010).
- Radaelli, E. Immunohistopathological and neuroimaging characterization of murine orthotopic xenograft models of glioblastoma multiforme recapitulating the most salient features of human disease. Histol. Histopathol. 24, 879-891 (2009).
- Baumann, B. C. Enhancing the efficacy of drug-loaded nanocarriers against brain tumors by targeted radiation therapy. , (2012).
- Baumann, B. C. An integrated method for reproducible and accurate image-guided stereotactic cranial irradiation of brain tumors using the Small Animal Radiation Research Platform (SARRP). Transl. Oncol. , (2012).
- Park, S. S. MicroPET/CT imaging of an orthotopic model of human glioblastoma multiforme and evaluation of pulsed low-dose irradiation. Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 80, 885-892 (2011).
- Szentirmai, O. Noninvasive bioluminescence imaging of luciferase expressing intracranial U87 xenografts: correlation with magnetic resonance imaging determined tumor volume and longitudinal use in assessing tumor growth and antiangiogenic treatment effect. Neurosurgery. 58, 365-372 (2006).
- Dinca, E. B. Bioluminescence monitoring of intracranial glioblastoma xenograft: response to primary and salvage temozolomide therapy. J. Neurosurg. 107, 610-616 (2007).
