Summary

定位頭蓋内注入と<emインビボ></em多形性膠芽腫のマウスモデル系における腫瘍異種移植片の>生物発光イメージング

Published: September 25, 2012
doi:

Summary

私たちは、ヌードマウスとその後シリアルの脳に人間の多形性膠芽腫細胞の正確な、定位注入のための統合方法を説​​明<em生体内で></em>イメージングは​​成長し、得られた異種移植片の治療に対する反応を監視することができます。

Abstract

多形性膠芽腫(GBM)は外科的切除、術後放射線療法とテモゾロミド療法1から構成される標準のトライ集学的治療にもかかわらず、ヒトでのみ14.6ヶ月の生存期間の中央値を持つハイグレード原発性脳腫瘍である。新しい治療法は明らかに生活の患者の生存率と品質を向上させるために必要とされる。より効果的な治療戦略の開発は、人間の病気を再現まだ腫瘍の成長や治療に対する反応を監視するためにシリアルイメージングを可能GBMの動物モデルによって支援されるであろう。本稿では、GBMの2のキーの臨床的特徴を再現腫瘍異種移植片を生じるヌードマウスの脳にバイオイメージング可能GBMの癌細胞の正確な定位注入のための私たちのテクニックを説明します。この方法では、再現性がある腫瘍をもたらし、順次内を監視するために生体内生物発光イメージング可能にしながら、正確な解剖学的位置に配置されてい頭蓋の異種移植片の成長と治療3-5から応答。また、この方法は、低周術期の罹患率と死亡率を持つ動物での忍容性は良好である。

Protocol

A.術前の腫瘍細胞の調製レンチウイルス発現ベクター(pGreenFireは、System Biosciences)で形質U251多形性膠芽腫細胞が安定的にホタルルシフェラーゼ遺伝子を発現させた。 これらの細胞は10%ウシ胎児血清、1%ペニシリン – ストレプトマイシン、およびでインキュベートT75組織培養フラスコ内の1%非必須アミノ酸を添加したDMEMで構成されていますイーグル培地(DMEM)、の完全ダル…

Discussion

本稿で述べたマウスでは、がん細胞の定位注入の方法が合理的に再現可能な臨床神経膠芽腫膠2、6-8の浸潤および急速な成長パターンを再現腫瘍を発生させる。この手法は、特に匹敵する大きさと生物学的特性および特定の解剖学的位置で再現腫瘍が望まれている別の治療群に均等にマウスを階層化実験に適しています。私たちが説明する技術を用いて、腫瘍細胞の定位的注入はほと?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我々は、彼らの専門的な支援のための博士アンドリューホランダー、サラ·デイビス、リー·シューマン、ティム·ジェンキンス、博士Xiangsheng Xuさんに感謝しています。私たちは、博士アンケネディのサポートを承諾。 BCBは、放射線生物トレーニンググラントC5T32CA009677でサポートされていました。 JFDは、医療科学者のためのバローズウェルカムキャリア賞(1006792)でサポートされていました。 JLBは、スーパークラスの助成金(5 R25 CA140116-03)でサポートされていました。我々は、その励ましと支援の研究が可能になる助けた博士スティーブ·ハーンを承認したいと思います。我々はまた、励ましや有益なコメントをペンシルベニアナノバイオインターフェースセンター(NBIC)博士とデニスディッシャー大学に感謝したいと思います。我々は彼らのMRIおよび生物発光/光中核施設の使用のためにペンシルベニア大学で小動物イメージング機能(SAIF)を認める。これらの技術は、米国立衛生研究所(RC1 CA145075とK08-NS076548によってサポートされていたプロジェクトの一環として開発された01)。

Materials

Description Supplier Catalogue Number Comments
Digital Just for Mouse Stereotaxic Instrument Stoelting 51730D Stereotactic platform for mouse implantation
Ketamine/xylazine     Injectable anesthesia
Puralube Vet Ointment (ophthalmic) Amazon.com   To prevent drying of the mouse’s eyes
drill holder for the stereotactic platform Stoelting 51681  
Micromotor Electric Drill Stoelting 51449 For drilling through the skull
.45 mm carbide drill bit Stoelting 514551  
Sterile cotton swabs Fisher Scientific 23-400-100  
Glass bead dry sterilizer (Germinator 500) Braintree Scientific GER-5287 To sterilize metal surgical instruments
Mouse rectal probe Braintree Scientific RET-3-ISO Compatible with the temperature controller
Temperature Controller (TCAT-2DF) Harvard Apparatus 727561 Temperature controller to maintain animal’s temperature during surgery
Small heating plate Harvard Apparatus 727617 For use with temperature controller to warm mouse during surgery. The heating plate fits under the mouse on the stereotaxic platform.
Disposable Scalpels BD Bard-Parker 2015-11 #10 scalpel
10 microliter syringe Hamilton 7635-01 For injection of tumor cells
30 gauge needles, 1″ long, with flat point Hamilton Various Must be compatible with the 10 μl syringe
Nanomite Programmable Syringe Pump Harvard Apparatus 704507 Digital motorized syringe injector for stereotaxic device
Cellulose sterile surgical spear sponges Ultracell 40410 To dry the surgical field
Bone wax Ethicon W31 To seal the burr hole
Tissumend II synthetic absorbable tissue adhesive Veterinary Products Laboratories 3002931 To seal the incision
Hot water pump with warming pad Gaymar TP-650 Warms mice in post-operative period
IVIS Lumina II Caliper Life Science   Bioluminescent imager
D-Luciferin potassium salt Gold Biotechnology LUCK-1 Luciferin for bioluminescent imaging

References

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Cite This Article
Baumann, B. C., Dorsey, J. F., Benci, J. L., Joh, D. Y., Kao, G. D. Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme. J. Vis. Exp. (67), e4089, doi:10.3791/4089 (2012).

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