Summary
Miltenyi एमएसीएस किट का उपयोग कर लिम्फोसाइटों के अलगाव पूरे lymphoid ऊतक homogenates से कोशिकाओं को शुद्ध करने के लिए एक विश्वसनीय तरीका है. Miltenyi प्रणाली का उपयोग कर शुद्ध कक्ष आम तौर पर कर रहे हैं ≥ 96% शुद्ध है. यहाँ, हम सीडी 4 + टी कोशिकाओं है, कई Miltenyi द्वारा की पेशकश की किट के एक अलग करने के लिए उठाए गए कदमों का प्रदर्शन.
Abstract
प्राथमिक स्रोत से कोशिकाओं के अलगाव कई और अधिक जटिल प्रोटोकॉल में एक आवश्यक कदम है. Miltenyi किट प्रदान करता है मनुष्य, गैर मानव प्राइमेट, चूहे और, के रूप में हम यहाँ वर्णन चूहों, सहित कई जीवों से कोशिकाओं को अलग. चुंबकीय मनका आधारित सेल जुदाई या तो सकारात्मक (या सेल रिक्तीकरण) चयन के रूप में अच्छी तरह से नकारात्मक चयन के लिए अनुमति देता है. यहाँ, हम अछूता या ना किया है सीडी 4 + सहायक टी कोशिकाओं की नकारात्मक चयन प्रदर्शित करता है. इस मानक प्रोटोकॉल का प्रयोग हम आम तौर पर कोशिकाओं है कि ≥ 96% शुद्ध + / CD3 सीडी 4 + शुद्ध. इस प्रोटोकॉल प्रोटोकॉल विच्छेदन और टी कोशिकाओं और अन्य प्रकार की कोशिकाओं की शुद्धि adoptively इमेजिंग प्रयोजनों के लिए स्थानांतरण के लिए, जौव के 7 अंक में प्रकाशित चूहे में परिधीय लिम्फ नोड्स के 2 फोटॉन इमेजिंग के साथ संयोजन के रूप में प्रयोग किया जाता है. हालांकि हम इस प्रोटोकॉल वीडियो में FACS विश्लेषण का प्रदर्शन नहीं किया, यह अत्यधिक पृथक FACS के माध्यम से उचित एंटीबॉडी का उपयोग कोशिकाओं के समग्र शुद्धता की जांच की सिफारिश की है. इसके अलावा, हम गैर बाँझ टी सेल अलगाव की विधि प्रदर्शित करता है. यदि बाँझ कोशिकाओं अपने विशेष आवेदन अंत उपयोगकर्ता के लिए आवश्यक हैं, मानक बाँझ शर्तों के तहत टिशू कल्चर हुड में प्रदर्शन प्रक्रियाओं के सभी सुनिश्चित कर लें कि हो. आप देख रहा है और अपने खुद के प्रयोगों के साथ अच्छे भाग्य के लिए धन्यवाद!
Protocol
पढ़ने के लिए और Miltenyi या किट ऑनलाइन में शामिल प्रोटोकॉल का पालन करें http://www.miltenyibiotec.com/ .
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Discussion
प्राथमिक स्रोत से कोशिकाओं के अलगाव कई और अधिक जटिल प्रोटोकॉल में एक आवश्यक कदम है. Miltenyi किट प्रदान करता है मनुष्य, गैर मानव प्राइमेट, चूहे और, के रूप में हम यहाँ वर्णन चूहों, सहित कई जीवों से कोशिकाओं को अलग. चुंबकीय मनका आधारित सेल जुदाई या तो सकारात्मक (या सेल रिक्तीकरण) चयन के रूप में अच्छी तरह से नकारात्मक चयन के लिए अनुमति देता है. यहाँ, हम अछूता या ना किया है सीडी 4 + सहायक टी कोशिकाओं की नकारात्मक चयन प्रदर्शित करता है. इस मानक प्रोटोकॉल का प्रयोग हम आम तौर पर कोशिकाओं है कि ≥ 96% शुद्ध + / CD3 सीडी 4 + शुद्ध. हालांकि हम इस प्रोटोकॉल वीडियो में FACS विश्लेषण का प्रदर्शन नहीं किया, यह अत्यधिक पृथक FACS के माध्यम से उचित एंटीबॉडी का उपयोग कोशिकाओं के समग्र शुद्धता की जांच की सिफारिश की है. इसके अलावा, हम गैर बाँझ टी सेल अलगाव की विधि प्रदर्शित करता है. यदि बाँझ कोशिकाओं अपने विशेष आवेदन अंत उपयोगकर्ता के लिए आवश्यक हैं, मानक बाँझ शर्तों के तहत टिशू कल्चर हुड में प्रदर्शन प्रक्रियाओं के सभी सुनिश्चित कर लें कि हो.
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Acknowledgments
हम रेबेका Paquett एमएसीएस बफर की तैयारी के लिए धन्यवाद करना चाहता हूँ.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| MACS Buffer | Reagent | None | None | Prepare as described by Miltenyi. |
| CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation | Reagent | Miltenyi Biotec | 130-090-860 | For use with the Miltenyi system. |
| Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS) | Reagent | For use in the preparation of MACS buffer. | ||
| Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish | Other | Corning | 430588 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 70 micron Cell Strainer | Tool | BD Biosciences | 352350 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 6 mL Syringe | Tool | Tyco Healthcare, Covidien | 8881516051 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 10x Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (DPBS) | Reagent | Invitrogen | 14200-075 | For use in RBC lysis. |
| Sterile Water | Reagent | Sigma-Aldrich | W4502 | For use in RBC lysis. |
References
- Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
- Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node. J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).
