Summary
Miltenyi MAC kiti kullanılarak lenfositlerin İzolasyon tüm lenfoid doku homojenatlarında hücreleri arındırmak için güvenilir bir yol. Miltenyi sistemini kullanarak saflaştırılmış Hücreler genellikle ≥% 96 saf. Burada, CD4 + T hücreleri, Miltenyi tarafından sunulan birçok kitleri biri izole etmek için atılan adımları göstermektedir.
Abstract
Birincil kaynak hücrelerin izolasyonu çok daha karmaşık protokoller gerekli bir adımdır. Miltenyi, insanlar, insan olmayan primatlardan, sıçan ve biz burada açıklamak gibi, fare dahil olmak üzere çeşitli organizmalar hücreleri izole etmek için kitleri sunmaktadır. Pozitif seçimi (veya hücre kaybı) yanı sıra olumsuz seçim ya boncuk tabanlı Manyetik hücre ayırma sağlar. Burada, biz, bakir ya da na ve CD4 + yardımcı T hücreleri olumsuz seçim göstermektedir. Biz genellikle ≥% 96 saf CD4 + / CD3 + hücrelerden arındırmak bu standart protokolü kullanarak. Bu protokol, protokol Diseksiyon ve T hücreleri ve diğer hücre tipleri adoptively görüntüleme amaçlı transfer saflaştırılması, Jüpiter 7. sorunu yayınlanan Fare Periferik lenf düğümleri, 2-Foton Görüntüleme ile birlikte kullanılır. Bu protokol video FACS analiz göstermek olmasa da, son derece izole hücrelerinin FACS üzerinden uygun antikorları kullanarak genel saflığını kontrol etmek için tavsiye edilir. Buna ek olarak, T hücre izolasyonu steril olmayan bir yöntem gösterilmektedir. Eğer steril hücreleri belirli bir son kullanıcı uygulaması için gerekli olan, tüm doku kültürü kaputu göstermiştir prosedürleri standart steril koşullar altında yapmak istediğinizden emin olun. Kendi deneyleri ile izlemek ve iyi şans için teşekkür ederiz!
Protocol
Lütfen okuyun ve uygulayın Miltenyi kiti veya çevrimiçi dahil protokol http://www.miltenyibiotec.com/ .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Birincil kaynak hücrelerin izolasyonu çok daha karmaşık protokoller gerekli bir adımdır. Miltenyi, insanlar, insan olmayan primatlardan, sıçan ve biz burada açıklamak gibi, fare dahil olmak üzere çeşitli organizmalar hücreleri izole etmek için kitleri sunmaktadır. Pozitif seçimi (veya hücre kaybı) yanı sıra olumsuz seçim ya boncuk tabanlı Manyetik hücre ayırma sağlar. Burada, biz, bakir ya da na ve CD4 + yardımcı T hücreleri olumsuz seçim göstermektedir. Biz genellikle ≥% 96 saf CD4 + / CD3 + hücrelerden arındırmak bu standart protokolü kullanarak. Bu protokol video FACS analiz göstermek olmasa da, son derece izole hücrelerinin FACS üzerinden uygun antikorları kullanarak genel saflığını kontrol etmek için tavsiye edilir. Buna ek olarak, T hücre izolasyonu steril olmayan bir yöntem gösterilmektedir. Eğer steril hücreleri belirli bir son kullanıcı uygulaması için gerekli olan, tüm doku kültürü kaputu göstermiştir prosedürleri standart steril koşullar altında yapmak istediğinizden emin olun.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Rebecca Paquett MACS tamponunun hazırlanması için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| MACS Buffer | Reagent | None | None | Prepare as described by Miltenyi. |
| CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation | Reagent | Miltenyi Biotec | 130-090-860 | For use with the Miltenyi system. |
| Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS) | Reagent | For use in the preparation of MACS buffer. | ||
| Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish | Other | Corning | 430588 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 70 micron Cell Strainer | Tool | BD Biosciences | 352350 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 6 mL Syringe | Tool | Tyco Healthcare, Covidien | 8881516051 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 10x Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (DPBS) | Reagent | Invitrogen | 14200-075 | For use in RBC lysis. |
| Sterile Water | Reagent | Sigma-Aldrich | W4502 | For use in RBC lysis. |
References
- Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
- Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node. J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).
