Multi-modal de imagem de angiogênese em um modelo de rato nu de Câncer de mama utilizando a ressonância magnética, tomografia computadorizada volumétrica e ultra-som

Summary

Na patogénese da metástase óssea, a angiogénese é um processo crucial e, portanto, representa um alvo para imagiologia e terapia. Aqui, apresentamos um modelo do rato de site-specific metástases ósseas de câncer de mama e descrever as estratégias para não-invasiva angiogênese imagem<em> In vivo</em> Usando ressonância magnética, tomografia computadorizada volumétrica e ultra-som.

Abstract

A angiogênese é uma característica essencial do crescimento do câncer e formação de metástases. Em metástase óssea, factores angiogénicos são cruciais para a proliferação de células tumorais na cavidade da medula óssea, bem como para a interacção do tumor e osso células, resultando em destruição óssea local. Nosso objetivo foi desenvolver um modelo experimental de metástase óssea que permite avaliação in vivo da angiogênese nas lesões ósseas, utilizando técnicas não-invasivas de imagem.

Para este propósito, que injectado 10 ⁵ MDA-MB-231 células cancerosas de mama humano na artéria epigástrica superficial, o que impede o crescimento de metástases em outras áreas do corpo do que a perna respectiva traseira ^1. Após 25-30 dias após a inoculação de células de tumor, metástases ósseas específicas do local desenvolver, restrita ao fêmur distal, tíbia proximal e fíbula proximal ^1. Aspectos morfológicos e funcionais da angiogênese pode ser investigada longitudinalmente no osso metaestase usando ressonância magnética (MRI), tomografia volumétrica computadorizada (VCT) e ultra-som (EUA).

RM exibe informações morfológica da parte do tecido mole de metástases ósseas que é inicialmente confinados à cavidade da medula óssea e, subsequentemente, excede o osso cortical, enquanto a progredir. Usando dinâmica de contraste MRI (DCE-MRI) funcional dados, incluindo o volume de sangue regional, perfusão e permeabilidade dos vasos podem ser obtidos e quantificados ^2-4. Destruição óssea é capturado em imagens de alta resolução usando VCT morfológica. Em complemento a resultados de MRI, lesões osteolíticas pode ser localizado adjacente a sítios de crescimento do tumor intramedular. Após a aplicação de contraste, VCT angiografia revela a arquitetura macrovaso em metástases ósseas em alta resolução, e DCE-VCT permite discernimento na microcirculação destes ^5,6 lesões. Dos EUA é aplicável para avaliar as características morfológicas e funcionais a partir de lesões do esqueleto, devido àosteólise local de osso cortical. Usando modo-B e técnicas de Doppler, a estrutura ea perfusão das metástases do tecido mole pode ser avaliada, respectivamente. DCE-US permite imagens em tempo real da vascularização metástases ósseas após a injeção de microbolhas ^7.

Em conclusão, em um modelo de site-specific osso câncer de mama metástases técnicas multi-modais de imagem, incluindo ressonância magnética, VCT e informações complementares oferta dos EUA sobre a morfologia e parâmetros funcionais da angiogênese dessas lesões esqueléticas.

Protocol

1. Cultura de Células Cultura MDA-MB-231 células cancerosas de mama humanos (American Type Culture Collection) em meio RPMI-1640 (Invitrogen, Alemanha) suplementado com FCS 10% (Sigma, Alemanha). Manter todas as culturas em condições padrão (37 ° C, atmosfera humidificada, 5% de CO 2) e as células de passagem 2-3 vezes por semana para mantê-las em crescimento logarítmico. Para o modelo animal descrito abaixo, não há necessidade de utilização de osso sub-linhas específicas de MDA-MB-23…

Discussion

O método de indução de osso experimental metástases aqui apresentados, em combinação com os procedimentos de imagem permitir o seguimento lesões osteolíticas em ratos nus longitudinalmente. Em nosso modelo, MDA-MB-231 células humanas de câncer de mama são injetadas no mar, que é uma anastomose entre a artéria ilíaca, através do tronco pudendo ea artéria femoral. Consequentemente, o fluxo de sangue para a região fornecido da articulação do joelho é mantida após a ligadura da SEA. As vantagens deste m…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number
MDA-MB-231 human breast cancer cells	American Type Culture Collection (ATCC)	HTB-26
RPMI-1640	Invitrogen	61870
FCS	Invitrogen	10270
Trypsin-EDTA	Invitrogen	25300
Carprofen Rimadyl	Pfizer	PZN 110208
Magnevist	Bayer-Schering	PZN 6961516
Imeron 400 MCT	Bracco	PZN 228654
SonoVue	Bracco	PZN 1567358
Papaverin	Alfa Aesar	L 04152
Isofluran	Baxter	HDG 9623
Symphony (Magnetic resonance imaging)	Siemens
Volume CT (Volumetric computed tomography)	Siemens
Acuson Sequioa 512 (Ultrasound)	Siemens-Acuson