Regelbunden skötsel och underhåll av en zebrafisk ( Published: November 18, 2012 doi: 10.3791/4196

DOI

Automatic Translation

• English (Original)
• العربية (Arabic)
• 中文 (Chinese)
• dansk (Danish)
• Nederlands (Dutch)
• français (French)
• Deutsch (German)
• עברית (Hebrew)
• हिंदी (Hindi)
• italiano (Italian)
• 日本語 (Japanese)
• 한국어 (Korean)
• norsk (Norwegian)
• português (Portugese)
• русский (Russian)
• español (Spanish)
• svenska (Swedish)
• Türkçe (Turkish)

Avdesh Avdesh*^1,2, Mengqi Chen*^1,3, Mathew T. Martin-Iverson^1,2,4, Alinda Mondal^1,3, Daniel Ong¹, Stephanie Rainey-Smith^1,3, Kevin Taddei^1,3, Michael Lardelli⁵, David M. Groth⁶, Giuseppe Verdile^1,3, Ralph N. Martins^1,2,3,7

¹Centre of Excellence for Alzheimer's Disease Research and Care, School of Medical sciences, Edith Cowan University, ²Centre for Clinical Research in Neuropsychiatry, Graylands Hospital, University of Western Australia, ³McCusker Alzheimer's Research foundation, ⁴School of Medicine and Pharmacology, University of Western Australia, ⁵Department of Molecular and Biomedical Sciences, University of Adelaide, ⁶School of Biomedical Sciences, Curtin University of Technology, ⁷School of Psychiatry and Clinical Neurosciences, University of Western Australia

* These authors contributed equally

Summary

Detta protokoll beskriver regelbundet underhåll och skötsel för att upprätthålla optimala förhållanden för zebrafisk djurhållning. Videon visar protokollet för systemunderhåll, ordinärt boende, utfodring, avel och uppfödning av zebrafisk larver.

Abstract

Detta protokoll beskriver regelbunden vård och underhåll av en zebrafisk laboratorium. Zebrafisk nu ökar i popularitet i genetik, farmakologisk och beteendevetenskaplig forskning. Som ett ryggradsdjur, är zebrafisk delar avsevärd genetisk sekvens likhet med människor och används som en djurmodell för olika humana sjukdomstillstånd. Fördelarna med zebrafisk i jämförelse med andra vanliga ryggradsdjur modeller inkluderar hög fruktsamhet, låg underhållskostnad, transparenta embryon och snabb utveckling. På grund av sporre intresset zebrafisk forskning, behovet av att skapa och upprätthålla en produktiv anläggning zebrafisk bostäder ökar också. Även litteratur finns tillgänglig för att upprätthålla en zebrafisk laboratorium, är en kortfattad video protokoll saknas. Denna video visar protokollet för ordinärt boende, utfodring, avel och uppfödning av zebrafisk larver. Denna process kommer att hjälpa forskarna att förstå naturliga beteende och optimala zebrafish djurhållning och därmed felsöka experimentella frågor som kommer från de villkor fisk djurhållning. Detta protokoll kommer att vara till enorm hjälp för forskare som planerar att etablera en zebrafisk laboratorium, samt att doktorander som har för avsikt att använda zebrafisk som en djurmodell.

Protocol

1. Systemunderhåll

1. Zebrafisk hålls i ett cirkulerande system som kontinuerligt filter och luftar systemvattnet att bibehålla vattnet kvalitet som krävs för en sund vattenmiljö. Den cirkulerande Systemet hjälper också att filtrera matrester och fisk avföring. Olika företag ger zebrafisk system, men vi använder system från akvatiska livsmiljöer, USA i vårt laboratorium. Rumstemperaturen eller tankens temperatur upprätthålls generellt mellan 26-28,5 ° C och ljusförhållanden är 14:10 h (ljus: mörk). En zebrafisk system från akvatiska livsmiljöer (t.ex. bänk-system) kostar ~ 9.000 USD. Denna bänkskiva med två hyllor kan hålla sex 10-liters, tolv 3-liters, eller 20 1,5-liters tankar på varje hylla. Flera rader av fisk (t.ex. transgena, mutant, vildtyp) kan också hållas på samma system.
2. En uppsättning av olika typer av filter används i systemet. I vårt system, vatten från alla tankarna paSSES genom en 120-mikron filterdynan, 50-mikron-filter kapseln, biologiskt filter, aktivt kol absorptionsfilter och UV-desinfektion filtret innan cirkuleras tillbaka in i tanken. De-chlorinated/aged vatten används i zebrafisk systemet. Vatten kan de-klorerade åldring under minst 48 timmar. Under ideala förhållanden bör vatten hållas i en behållare med en pump cirkulerar vattnet för att hålla det varma och påskynda de-klorering.
3. PH för systemet vatten bör kontrolleras dagligen och underhållas mellan 6,8 och 7,5. Vid behov bör natriumbikarbonat användas för att öka pH-värdet.
4. Akvarier bör rengöras regelbundet. För att rengöra ett akvarium, stäng vattenflödet till denna tank, dränera överflödigt vatten genom att luta tanken bakåt och ta bort tanken försiktigt från systemet. Smuts och algtillväxt kommer att framgå på botten och sidorna av tanken.
5. Placera plattan i en ren tank och fyll på med de-klorerat vatten (aka System WATER). Töm fisken i denna tank med en fisk nät. Stäng locket och överför namnetiketten av tanken. Placera försiktigt rent tanken in i systemet och slå på vatten.
6. Att sanera fisken nätet, spraya med 70% etanol, skölj i vatten och låta det torka innan återanvända. Ta baffeln från smutsiga tanken och spraya båda delarna med 70% etanol. Skölj noggrant med kranvatten och låt tanken och förbryllar torka helt innan återanvända.
7. De cirkulerande systemet filter måste kontrolleras och ändras regelbundet för att säkerställa en korrekt funktion. Dessa filter bör bytas regelbundet för att säkerställa korrekt och rent vatten till alla akvarier.
8. Det 120-mikron filterdynan brukar flyttas eller bytas dagligen, flytta till vattenflödet att använda den helt innan du sätter med en ny.
9. Behållaren Filtret bör bytas varje vecka. Om du vill ändra boks filtrera, ta bort filterenheten genom att vrida myraiclockwise med en skiftnyckel eller händer. Placera en plastfolie eller handduk nedan för att förhindra eller absorbera vatten spill. Byt behållaren filtret med ett nytt och montera filterenheten tillbaka in i systemet, försiktigt dra med händerna och en skiftnyckel om det behövs.
10. Kolfiltret bör bytas varannan vecka (varannan vecka). Om du vill ändra kolfilter, ta bort enheten kolfilter försiktigt med en skiftnyckel. Kassera den använda aktivt kol och ersätta det med nytt aktivt kol. Sätt tillbaka kolet hållaren och placera den tillbaka in i filterenheten. Montera filterenheten tillbaka in i systemet. Slå på systemet och kontrollera att vattnet flödar till filtret. Om nödvändigt, spola lite vatten genom rören för att rengöra smuts i rören innan filtret monteras i systemet.
11. Den biologiska filtret bör rengöras var sjätte månad. Ett biologiskt filter är i allmänhet beläget mellan behållaren och kolfilter i cirkulerande system. För att ändra biologiskt filter, remove filterenheten från systemet. Släpp trycket från filtret genom att trycka på knappen trycket släpper. Skruva loss filtret med en skiftnyckel. Allmänhet två personer behövs för detta steg. Avlägsna locket på filterenheten. Tömma innehållet i filtret i en siktad behållare för att separera Siporax från vattnet. Obs: Siporax är en fin por bio-filtermedia som har förmågan att utföra både nitrifikation och denitrifikation.
12. Om Siporax är mycket smutsig ersätta det med nytt. Fyll filterenheten med system vatten (de-klorerat vatten), stäng locket, tillbaka filterenheten till systemet och slå på vatten. Obs: I en acklimatiserad akvarium kommer Siporax att vara hem för flera nitrifikationsbakterier. Dessa mikroorganismer är kritiska för att upprätthålla kvävets kretslopp i akvariet, och ta bort den primära bostäder för den biologiska filtret (den smutsiga Siporax) kan resultera i en allvarlig ammoniak spik, följt av en nitrit spik medan new biologiskt filter (med nya Siporax) är att återupprätta. Båda dessa mellanliggande tillstånd av kvävets kretslopp kan vara giftiga för vattenlevande organismer och kan döda zebrafisk om de inte svarat på lämpligt sätt. Därför är det viktigt att ha ett sekundärt biologiskt filter någon annanstans i zebrafisk inhysningssystem (t.ex. i uppsamlingstanken i vattenmiljöer systemet) för att medge snabb återinsättning av dessa viktiga mikroorganismer på den nya Siporax.
13. UV-filter som används för att styra systemet biologiska föroreningar (t.ex. bakterier) och bör bytas ut var 9-10 månader. Det bör noteras att UV-filter desinfektion dosraten ~ 110 mJ / cm ² vid början av lampans livslängd och dosraten minskar under loppet av tiden, varför det är nödvändigt att ersätta hela världen även när det verkar fortfarande vara funktionell.

2. Utfodring

1. Zebrafisk kan matas med torr mat (livsmedel storlek från 100 mikroner för larver tO 300/400 mikron för vuxen fisk) eller levande föda (Artemia). Köldbärare (Artemia sp.) Ägg är tillgängliga från lokala djuraffärer och kan kläckas i laboratoriet genom att följa de enkla stegen som beskrivs nedan.
   1. Lös Röda havet salt i åldern vatten genom att placera en bägare med salt på en magnetomrörare för bättre löslighet. Alternativt, kan saltet lösas i vatten genom luftning den med luftning röret. Instant Ocean salt kan också användas som en kläckning lösning om Red Sea salt är inte tillgänglig. Artemia kan tolerera ett brett utbud av salthalt, men vi kläcks vår artemia (10-15 g) i 30-35 g / L Röda havet saltvatten. Obs: Om artemia ägg inte är lätt tillgängliga i de lokala djuraffärer sedan inkapslade Artemia också kan användas efter "decapping" dem i omgångar innan du lägger dem i räkor kläckeriet. Detta kan även undvika täta turer till djuraffären.
   2. Fyll Hatcher artemia med SAlt vatten och tillsätt räkor ägg på en koncentration av 1,2 msk / liter. Lufta Hatcher kraftigt med en luftpump och lämna äggen artemia att kläckas för ~ 48 timmar.
      Notera: Det bör noteras att icke-berikade Artemia förlora näringsvärde varje timme efter kläckning. Därför kan det vara lämpligt att antingen lucka över 24 timmar eller anrika över 48 h, för att erhålla maximal näringsvärde från artemia.
   3. Avloppsvatten från kläckning systemet läggs i karantän avfall som skall desinficeras med blekmedel och omhändertas senare.
2. Att samla in Artemia, ta bort luftröret och låt kulturen att nöja 4-5 minuter, men inte mer än 10 minuter. De streckade Artemia samlas vid botten av Hatcher.
   1. Samla Artemia med kranen vid botten av Hatcher. Kasta den första flödet som består av icke-kläckta ägg artemia.
   2. Separera Artemia från det salta vattnet, med en saltlake netto räkor samling (~ 350 mikron nylonnät). Skölj Artemia från nätet i en behållare med system för vatten.
3. De uppsamlade Artemia är vanligen närvarande i hög koncentration på botten av behållaren som ger den ett ganska orange färg.
4. Mata Artemia till zebrafisk med en pipett eller en pipett / Squeezy flaska. Mängden doseras mat beror på befolkningens storlek individuella tankar. Den allmänt accepterade förhållandet för zebrafisk är att erhålla 4% av kroppsvikten i mat per dag. Zebrafisk ska aldrig övergödd, eftersom detta kan öka nitrathalten i vattnet, eventuellt påverkar deras avel eller livskraft, som vissa fiskar kan dö på grund av överätande.
   1. När insprutning mat ivatten, hungriga fiskar simmar att fånga Artemia.
5. Torr utfodring kan utföras med hjälp av en akvatiska ekosystem är / akvatiska livsmiljöer enkel fjäder-baserade fiskmat dispenser. Alternativt kan torr matning också utföras med hjälp av en enkel sked eller genom att skära en plast pipett diagonalt med en sax för att ge det ett intryck av en liten sked.

3. Avel

1. Zebrafisk initiera avel vid början av ljus. Befruktade ägg kan erhållas antingen genom in-tank avel eller parvisa avel. Även i-tank avel är mer arbetsintensiv effektivare och genomförs för regelbunden embryosamlingsgrupper i vårt laboratorium, är parvis avel föredra när gener eller mutationer ska avskärmad från individuella fiskar.
2. För i-tank avel, montera den i tank uppfödare och släpp långsamt i akvariet efter debuten av ljuset. Alternativt kan i-tank avel set-up lämnas över natten i akvariet.
3. Ltakfoten in-tank uppfödare för cirka 15 minuter för att låta fisken att para innan du tar bort uppfödaren från tanken och samla in ägg.
4. Parvis avel brukar ställa in sent på eftermiddagen efter utfodring.
5. Montera avel tanken och fyll den med åldern systemet vatten.
6. Överför en hona och en hane till motsatta sidor av avel tanken. Kvinnor kan skiljas från män på grund av deras större buk. Manlig kan också skiljas från honorna eftersom de är smalare och mörkare i färgen än kvinnor. Dessutom har män har mer gul färg i analfenan jämfört med kvinnor (se figur 1). När du är osäker leta efter ovipositor i kvinnliga zebrafisk (se figur 4).
7. Ta delaren nästa morgon kort efter debuten av ljuset. Tillåt parning att inträffa ostört under 20 minuter eller tills tillräckligt antal embryon läggs på botten av tanken.
8. Efter avel,tillbaka fisken till tankarna. Samla äggen med en sil.
9. Tvätta embryona noga med system vatten.
10. Överför embryona till en petriskål genom sköljning silen med embryon medium, aka EM3 (NaCl, 13,7 mM, KCl, 0,54 mM, MgSO _4, 1,0 mM, CaClj _2, 1,3 mM, Na ₂ HPO _4, 0,025 mM; KH ₂ PO _4, 0,044 mM, NaHCOs _3, 4,2 mM).
11. Embryon kan observeras under ett mikroskop. Befruktade ägg separeras sedan från de obefruktade ägg med en nål och en pipett (se figur 3).

4. Uppfödning av larver

1. Befruktade ägg hålls i en inkubator (~ 28,5 ° C) under 72 timmar tills larverna kläcks.
2. Nu larver är av chorion och simning fritt de är redo att överföra till en huvud akvarium. Larver måste matas från 5 dagar efter gödsling (DPF) och hålls i embryo medium (komposition som beskrivs iDel 3, 10) eller system vatten. Larver kan hållas i runda skålar med ~ 50% eller mer av vatten däri ändras på en daglig basis. Den vattenbyte bör innefatta att ta bort döda eller sjuka larver och andra skräp.
3. Överför larverna försiktigt i en tank som innehåller en liten storlek baffel (cirka 300-400 mikrometer). Döda och sjuka larver bör tas bort och några milliliter vatten bör tillsättas långsamt på en daglig basis.
4. Efter 14 dagar kan larver tankar på hyllan i systemet, och levereras med en liten ström av cykling vatten (1-2 droppar per sekund). Eftersom larverna växa, kan vattenflödet ökas. Olika storlekar av bafflar kan användas beroende på storleken av larverna (t.ex. baffel storlek 300-400, 500, 700-750, och 1000 mikron) och en vanlig plast baffel bör användas för vuxen fisk.
5. Det brukar 3 månader för de embryon som utvecklas till könsmogna vuxna.

Representative Results

Zebrafisk bostäder och underhåll är enklare och billigare än traditionella gnagarmodeller. Flera tusen zebrafisk kan inrymmas i ett litet laboratorium. Som ett resultat av detta protokoll kommer forskarna att kunna hantera en zebrafisk anläggning som kommer att ge goda förutsättningar för zebrafisk. Dessutom kommer följande illustrationer hjälpa till att identifiera befruktade ägg, vuxen zebrafisk, och deras mat. En illustration av en manlig zebrafisk (Figur 1A) och kvinnliga zebrafisk (Figur 1B och 1C) visas för att hjälpa forskare skilja mellan en manlig och en kvinnlig zebrafisk för avel ändamål visar en mikroskopisk bild av figur 2,. Artemia på 12X (Figur 2A), en enda artemia vid 90X (figur 2B), och ett obefruktat artemia ägg vid 90X (figur 2C). Detta kommer att bidra till att förstå skillnaden mellan obefruktade och befruktade Artemia för propER utfodringsändamål. Befruktade och obefruktade ägg visas i Figur 3. Figur 3A visar en mikroskopisk vy av befruktade och obefruktade embryon. Obefruktade embryon är i allmänhet opaka och / eller med brusten cell (er) på insidan av chorion (svart pil) medan befruktade embryon verkar intakt och växande till nästa celldelning tillstånd (för detaljerad läsning av olika stadier av zebrafisk embryon se ^1). Högre förstoring vy av ett befruktat och ett obefruktat ägg visas i figur 3B och 3C respektive. Figur 4 illustrerar en kvinnlig zebrafisk är ovipositor att hjälpa forskare skilja mellan en manlig och en kvinnlig zebrafisk.

Flera kritiska problem som kan uppstå i en zebrafisk laboratorium ingår blockering av vattentillförseln till individ / alla tankar i huset systemet, dålig vattenkvalitet, och läckage i rör eller reservoar av cirkulerande systemet. Dessutom,problem med att få embryon från avel kan vara en annan fråga. Felsökning av dessa frågor diskuteras nedan.

Figur 1. En illustration av en manlig zebrafisk (A) och kvinnliga zebrafisk (B, C).

Figur 2. En mikroskopisk vy av Artemia vid 12X (A), en enda artemia vid 90X (B), samt ett obefruktat artemia ägg vid 90X (C).

Figur 3. Mikroskopisk bild (16X) av befruktade och obefruktade ägg, där endast två ägg obefruktade är obefruktade ägg som anges med svarta pilar (A). Högre förstoringvy (90X) av ett befruktat (B) och ett obefruktat ägg (C).

Figur 4. En kvinnlig zebrafisk är ovipositor (anges med svart pil) visar.

Parameter	Optimalt intervall
Alkalinitet	50-150 mg / l CaCO 3
pH	6,8-7,5 (6,0-8,5 tolereras)
Temperatur	26-28,5 ° C
Hårdhet	50-100 mg / l CaCO 3
Un-joniserad ammoniak	<0,02 mg / l
Nitrat (NO 3 -)	<50 mg / L
Nitrit (NR 2 -)	<0,1 mg / L
Upplöst syre	> 6,0 mg / L
Salthalt	0,5-1 g / L
Konduktivitet	300 -1500 iS

Tabell 2. Vatten kvalitetsparametrar. Water kvalitetsparametrar. Optimalt antal miljöparametrar i zebrafisk akvariet ^11.

Discussion

Zebrafisk kommer från floden Ganges i norra Indien och blir populär i forskning både deras vuxna och larvstadier ^2, granskas av Spence et al. ^3. Zebrafisk har flera fördelar jämfört med andra djurmodeller såsom hög fruktsamhet, enkelt underhåll, optisk clearance av embryon, snabb embryonal utveckling och låga underhållskostnader. De är mottagliga för genetisk manipulation ⁶ och lämplig för hög genomströmning drog screening ^4,5. Deras befruktning är extern vilket är fördelaktigt för deras användning av utvecklings biologer. På grund av dessa fördelaktiga egenskaper är zebrafisk ökar i popularitet i genetik ^7, farmakologiska ⁸ och beteendevetenskaplig forskning ^9,10. Det finns ett antal utmaningar för att upprätthålla en zebrafisk anläggning och zebrafisk djurhållning för att få embryon. Häri beskriver vi våra erfarenheter och rekommendationer för att lösa dessa utmaningar och outline ett protokoll för systemunderhåll, utfodring, avel och höjning av larverna.

Systemunderhåll

För att upprätthålla zebrafisk i en hälsosam kondition, är det viktigt att förse dem med en ren miljö i ett väl fungerande akvarium systemet. En viktig del av detta håller på att förändras systemet filter regelbundet så att alla tankar får ordentlig vattenflöde och rent vatten. Det är viktigt att undvika fel i cykling vattenförsörjningen till varje tank på grund av blockerade systemet rör. Rören kan rengöras med en högre än normalt vattentryck och flöde om blockering sker. Helst bör cirka 10% av systemets vattnet bytas dagligen för att upprätthålla en god vattenkvalitet. Alternativt, kan vatten bytas samtidigt ändrar kapsel eller Kolfilter. Detta säkerställer att smuts deponeras i rören som förbinder dessa filter avlägsnas. Kvaliteten på vattnet bör kontrolleras regelbundet. Parametrar såsom alkalinitet, pH, temperaure, hårdhet, ammoniak, löst syre, salthalt, och konduktivitet bör betraktas som viktiga faktorer i representerar systemets kvalitet vatten (se tabell 2 för detaljer). Åtminstone nitrat bör pH och temperatur övervakas regelbundet för att säkerställa god vattenkvalitet för bostäder zebrafisk. Idealiskt nitrat (NO ^{3 -)} nivåer <50 mg / L ^11, om hög dessa nivåer kan reduceras genom att ersätta vattnet i cirkulerande systemet med färskt systemvattnet. Ibland passar filter inte bra och läcker så det rekommenderas att leta efter läckor efter en filterbyte. Om vattenflödet från den huvudsakliga reservoaren blockeras antingen efter byte av vattenpumpen eller ändra ett filter, kan vattenflödet återställas antingen genom att lossa eller ta bort filtret för några sekunder för att släppa någon vakuum genereras i rören. Den tid som krävs för att byta filter kan variera beroende på olika faktorer såsom total biologisk belastning on systemet, renlighet andra filter, och smuts deponeras i rören. Därför bör filter omedelbart bytas om de verkar smutsiga eller om alla tankar inte får rätt vattenförsörjning. Det rekommenderas också att fisken nätet rengöras med 70% etanol, och sköljas i vatten för att sanera den och får torka innan den återanvänds. Torkning säkerställer avdunstning av etanol som annars är giftigt för fisk.

De flesta av de zebrafisk systemen använder de-klorerat kranvatten, men vissa system använder avjoniserat vatten. Det är viktigt att hålla konduktivitet systemvattnet mellan 300 och ~ 1.500 iS eftersom detta minskar den energi fisken måste upprätthålla kroppssalter. Därför kan zebrafisk inte hållas i avjoniserat vatten inte salter tillsätts för att upprätthålla de optimala ledningsförmåga nivåerna. Det finns en risk för eventuella höga kopparkoncentrationer i systemet vatten om kranvatten används eftersom kolfiltret inte avlägsnar koppar. Därför, uSERS borde kontrollera kopparkoncentrationer och undvika kopparrör där det är möjligt.

Utfodring

Zebrafisk ska aldrig övergödd, eftersom detta kan öka nitrathalten i vattnet, eventuellt påverkar deras avel ¹¹ eller livskraft, som vissa fiskar kan dö på grund av överätande. Vi rekommenderar att tillhandahålla inte mer mat under någon matning än en tank av fisk kan avsluta inom 10 minuter. Det är mycket viktigt att ta bort saltet från Artemia innan utfodra dem till zebrafisk som överskottet saltkoncentration orsakar död. Om fler zebrafisk ägg krävs kan fiska matas tre gånger om dagen. Rengöring av tankar uppfödare fisk dagligen förbättrar också nivåerna av äggproduktion.

Vid matning på akvatiska livsmiljöer system vi slår oftast av vattenpumpen och luftpump så att fisken att äta mat i 10 min. Detta minskar den mängd mat som tvättas i filtren. Måste dock användaren vara noga med att remglödkol att slå på dessa pumpar igen efteråt.

Avel

Zebrafisk är oftast vid optimal avel tillstånd mellan ~ 3 och 18 månaders ålder. Parvis avel bör inte utföras under två på varandra följande dagar ^11, men kan i-tank avel utförs dagligen som en tank kan hålla många fiskar vilket minskar risken för att samma par av fisk som föds upp för två dagar i rad. Avel bör ske med jämna mellanrum även om äggen inte behövs. Denna process kommer att säkerställa avel cykel av fisken bibehålls. Det rekommenderas att det finns fler kvinnor än män i en avel set-up. Man zebrafisk ändra sina kvinnliga partners på daglig basis ¹² som ytterligare stöder denna rekommendation. Dessutom, i vårt laboratorium upplevde vi först problem med avel, men med fler honor än hanar i avel installation hjälpte att lösa problemet. Dessutom utfodring med hög proteinhalt content kost och artemia 2-3 gånger om dagen, blandning fisk från olika tankar (från olika föräldrar), varvid temperaturen på avel installation mellan 27 och 28 ° C, och klämma magar av kvinnor med blockerade äggstock rör med mild massage förbättrats ytterligare äggproduktion. Vi rekommenderar föra register över fisk linjer / ursprung för att undvika in-avel mellan syskon. Detta förbättrar ytterligare embryo produktion. Föra register över antalet embryon som av fisk från varje tank rekommenderas också. Detta hjälper till att hålla ett spår av de bästa tankar odling av fisk och vidta åtgärder för att förbättra uppfödning i fisken inte lägga ägg.

Uppfödning av larver

Utfodring av larver bör påbörjas från 5 dpf (dagar efter befruktning). Unga larver kan matas med torrfoder av ~ 100 mikron (t.ex. ZM100) eller levande mat som Paramecium och hjuldjur (som stimulerar tillväxt). Livsmedel storlek kan sakta ökastill 200 mikron (t.ex. ZM200) eller 300/400 mikron (t.ex. ZM300). En population av vuxna fiskar bör vara cirka 6-7 fiskar per liter vatten. Denna praxis rekommenderas för bättre underhåll av BOD (Biological Oxygen Demand) till tankarna.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Zebrafish circulating system	Aquatic Habitats, USA	AHAB stand-alone, bench-top systems
Sodium Bicarbonate	Sigma Aldrich	S6297
Fish food dispenser/Dry food feeder	Aquatic Habitats, USA	AH19
Microscope	Olympus	SZX12
Dry Food	ZM Fish food, UK	ZM100, ZM200, ZM300
Brine shrimp eggs	Salt Creek, Inc., USA	Premium Grade
In-tank breeders	Aquatic Habitats, USA	ITSTS-A
Activated carbon	Penn-Plax Pro-crab, USA	PBC3MF
Breeding tanks	Aquatic Habitats, USA	SBTANK (1L) Breeder Tank-2 (2L)
Red sea salt	Red sea salt, USA	Local pet store/ www.redseafish.com
Filters (Canister, filter pads, and UV)	Aquatic Habitats, USA	aquatichabitats.com
Siporax Media	Aquatic Habitats, USA	BF 820
Brine shrimp net	Aquatic Habitats, USA	BSN 1
Brine shrimp hatcher	Aquatic Habitats, USA	BS252
Baffles	Aquatic Habitats, USA	aquatichabitats.com
Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol.